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融合蛋白GST-hS100A2对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用被引量：1: 2011年; 目的探讨GST-人S100A2融合蛋白(GST-hS100A2)对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用。方法将重组质粒pGST-moluc-hS100A2和pGST-moluc转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot鉴定后采用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠分离纯化。以制备的GST-hS100A2融合蛋白分别处理HCT116和SW480细胞,以GST处理的细胞和空白细胞作为对照,分别用MTT法检测细胞增殖活力,Hochest33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,划痕愈合法检测细胞迁移能力,Transwell小室试验检测细胞侵袭能力。结果融合蛋白GST-hS100A2能以剂量依赖和时间依赖的方式抑制HCT116和SW480细胞的增殖,并可明显促进两种细胞凋亡,阻滞HCT116细胞周期,抑制HCT116细胞迁移和两种细胞的侵袭能力。结论 GST-hS100A2对人结肠癌HCT116和SW480细胞具有一定的抑制作用,有可能成为结肠癌分子治疗的新靶标。; 徐兰兰游莉郭元元邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：融合蛋白

β-catenin降低外源性hS100A6对骨肉瘤细胞的抑制作用被引量：1: 2010年; 目的研究外源性hS100A6抑制骨肉瘤细胞作用与Wnt/β-catenin信号途径的关系。方法用携带人β-catenin及其siRNA基因的重组腺病毒Adβ-catenin和AdSiβ-catenin分别上调和下调MG63和U2OS细胞中β-catenin水平,再用重组hS100A6处理这些细胞,然后通过MTT法检测细胞增殖能力的变化,Hochest染色法检测细胞凋亡的变化,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果①外源性hS100A6抑制2株骨肉瘤细胞的增殖(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对这2株细胞的增殖抑制作用(P<0.05);②外源性hS100A6促进2株骨肉瘤细胞的凋亡(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别增强和减弱hS100A6对这2株细胞的促凋亡作用(P<0.05);③外源性hS100A6抑制骨肉瘤细胞株MG63的迁移(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对MG63的迁移抑制作用(P<0.05)。结论β-catenin负性调节hS100A6对骨肉瘤的抑制作用;hS100A6对骨肉瘤的抑制作用可能经由Wnt信号途径及其他信号途径共同调控。; 卫佳李星星陈英华吴丽美马闻何通川周兰; 关键词：Β-CATENIN S100A6 生物学作用骨肉瘤

S100A6上调人乳腺癌细胞系MCF-7中β-catenin及其机制被引量：5: 2013年; 目的探讨钙细胞周期蛋白S100A6对人乳腺癌细胞系MCF-7中β-catenin的影响及其机制。方法分别用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6与AdsiS100A6处理MCF-7细胞,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK3β)表达或分布的变化。结果在MCF-7细胞中,S100A6可以上调β-catenin的蛋白表达水平(P<0.01),但对其mRNA表达无显著性影响;S100A6对E-cadherin的mRNA表达、蛋白质表达水平及分布均无显著性影响;S100A6可以提高β-catenin降解复合体的主要成员GSK3β磷酸化水平(P<0.01)。结论 S100A6上调β-catenin的可能机制是通过促进GSK3β磷酸化失活,而不是通过调节E-cadherin实现的。; 武睿段亮叶立伟张昀源陈娴王海燕杨霞罗进勇周兰; 关键词：S100A6 Β-CATENIN E-CADHERIN GSK3Β

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移被引量：11: 2013年; 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用.方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6,rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和0.5 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt,t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt,p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移.结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P〈0.05）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P〈0.05）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降10.3%～69.7%,细胞迁移率下降37.9%～41.6%,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的.; 王海燕邹正渝段亮陈娴李欢袁世梅何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤 P13K AKT信号通路

S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制被引量：2: 2011年; 探讨S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制。用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6和AdsiS100A6处理人骨肉瘤细胞系143B,Western blot分析处理前后细胞中β-catenin水平的变化;再以人胚肾细胞HEK293为研究对象,通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合Western blot检测S100A6与Wnt经典信号通路主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、散乱蛋白(Dishevelled,DVL)和轴蛋白(Axin)之间的相互作用。结果:1)AdS100A6作用48h后,143B细胞中β-catenin水平较实验对照组(AdGFP组)增加了64%(P<0.01),而AdsiS100A6处理的细胞中β-catenin较AdGFP组减少了20.2%(P<0.05),AdGFP组与空白组之间的差异无统计学意义;2)在S100A6抗体的沉淀物中,检测到β-catenin、GSK-3β和DVL,而无Axin检出;3)β-catenin、GSK-3β和DVL的抗体沉淀物中,均有S100A6检出,而Axin抗体的沉淀物中无S100A6检出。结论:S100A6能够上调人骨肉瘤细胞系143B中的β-catenin水平;并与β-catenin、GSK-3β和DVL之间存在直接相互作用;S100A6与这三个分子之间的直接相互作用可能抑制了β-catenin的降解,使之在胞浆内聚集,水平升高。这可能是S100A6上调β-catenin的部分机制。; 黎玉叶李星星孙双双邹正渝张昀源段亮叶立伟武睿杨霞何通川周兰; 关键词：蛋白质相互作用

外源性S100A6对人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖、凋亡及β-catenin表达的影响被引量：11: 2009年; 目的:探讨外源性S100A6对骨肉瘤细胞株U2OS的生物学作用及其可能机制。方法:MTT法检测S100A6对U2OS细胞增殖的影响及浓度依赖性,台盼蓝拒染法计数活细胞检测S100A6对U2OS增殖作用的时间依赖性,Hoechst染色检测细胞凋亡,Westernblot法及免疫细胞化学法检测细胞内β-catenin的表达变化。结果:S100A6作用3d时,浓度为30、100、300和1000μg/ml的重组S100A6(GST-S100A6)组的OD值分别比相应浓度的GST对照组的OD值减少20.5%、23.7%、32.2%和36.8%,P<0.05;蛋白浓度为100μg/ml时,GST-S100A6组的细胞数在前2d与GST组相似,第3、4、5d的细胞数分别降低到GST组的59%、46%、48%,P<0.05;GST-S100A6干预3d后细胞凋亡率增高3.16倍,P<0.01;免疫细胞化学法测得经GST-S100A6处理3d后β-catenin的平均光密度值比GST组增加22.9%,P<0.01;经携带S100A6基因的重组腺病毒(Ad-S100A6)处理3d后,Westernblot法检测细胞中β-catenin的校正灰度值为1.4204±0.1999,比对照组(Ad-GFP组,0.9996±0.1000)显著增高,P<0.01。结论:外源性S100A6能够抑制U2OS细胞的增殖、促进其凋亡和增加U2OS细胞中β-catenin水平。; 陈英华卫佳李星星吴丽美马闻张彦何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤

重组人S100A6促进人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移侵袭并抑制其凋亡被引量：8: 2011年; 该研究旨在探讨重组人S100A6蛋白对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。利用原核表达制备重组人S100A6蛋白(GST-hS100A6),SDS-PAGE显示其大小为36 kDa,Western blot显示其可以被S100A6抗体特异识别,BCA法测定1 L菌液共收获约16.7 mg蛋白;将其作用于人乳腺癌细胞MCF-7,MTT显示细胞培养48 h时,浓度为100μg/mL和300μg/mL的GST-hS100A6组的D_(492)值较GST组增加29.1%和84.6%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞增殖;平板克隆形成实验显示GST-hS100A6组的克隆形成率较GST组高38.7%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7的克隆形成;Hoechst染色显示GST-hS100A6组在24 h时细胞凋亡率较GST组减少67.8%(P<0.05),48 h时细胞凋亡率较GST组减少58.4%(P<0.05),提示S100A6抑制MCF-7细胞凋亡;划痕实验显示在24 h时GST-hS100A6组的划痕愈合率为GST组的2.2倍(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞迁移;Transwell显示GST-hS100A6组在24 h时穿膜细胞数较GST组增加88.1%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞侵袭。以上结果显示S100A6对人乳腺癌具有一定的促进作用,有可能成为乳腺癌分子诊断的标志物和治疗的新靶标。; 游莉徐兰兰郭元元孙双双邹正渝黎玉叶罗进勇何通川周兰; 关键词：S100A6 乳腺癌增殖凋亡迁移

hS100A6抑制卵巢癌细胞HO8910和HO8910 PM增殖、促进凋亡并上调其Wnt/β-catenin活性被引量：2: 2012年; 目的研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响。方法通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响。结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P<0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的凋亡(P<0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位。结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径。; 邹正渝陈英华孙双双黎玉叶叶立伟段亮武睿杨霞罗进勇周兰; 关键词：S100A6 卵巢癌

GST-hS100A9融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：3: 2011年; 目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(GS4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36 000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20 mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖。结论成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用。; 游莉徐兰兰郭元元邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：蛋白纯化蛋白鉴定

外源性hS100A6对骨肉瘤细胞MG63的作用研究: 目的:研究外源性hS100A6对人骨肉瘤细胞系MG63增殖、凋亡及迁移的作用,并探讨其对Wnt/β-catenin信号途径的影响。方法:制备携带人S100A6基因的重组融合蛋白GST-hS100A6及其对照蛋白GST,使...; 陈英华卫佳李星星苗静琨吴丽美马闻何通川周兰; 关键词：S100A6 生物学作用骨肉瘤; 文献传递

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