国家自然科学基金(30472007)
- 作品数：8 被引量：31H指数：3
- 相关作者：江逊段小红史剑波崔鹏程许庚更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院暨南大学中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 冷冻保存人鼻中隔软骨被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨不同冷藏温度下保存成人鼻中隔软骨块活性的可行性。方法:实验于2005-03/09在解放军第四军医大学基础部病理与病理生理博士后流动站完成。取临床常规手术切除的成人鼻中隔软骨15块,切成大小约15mm×10mm,随机分成3组,每组5块。分别置入4℃,-20℃和-80℃冷冻保存,在保存24h,7d,14d,20d和30d时取材,进行软骨活性比较。①软骨样品于质量浓度为40g/L甲醛固定后制备石蜡切片,组织切片经苏木精-伊红染色和阿尔辛蓝染色后于光学显微镜下观察软骨细胞及软骨基质。②锥虫蓝排斥试验检测软骨细胞活性,根据下式求细胞活力:活细胞率(%)=活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%。结果:①软骨石蜡切片经苏木精-伊红染色和阿尔辛蓝染色后于光学显微镜下观察可见:冷冻保存24h时,各组软骨中大部分为活的软骨细胞充填软骨陷窝,软骨基质无明显变化,鼻中隔软骨活性程度较好。-80℃冷冻保存7d,-20℃保存14d及各组保存30d后,软骨细胞基本变性坏死,胞核消失,基质成份断裂、强度降低。4℃保存20d软骨中部有较多变性细胞,但软骨基质中酸性黏多糖及胶原成分无明显断裂现象。②-80℃冷冻保存软骨在保存24h时,软骨细胞活性为80%;保存7d时软骨基本失去活性,软骨细胞及基质变性坏死。-20℃保存软骨在保存24h时,软骨细胞活性为85%;14d后软骨基本失去活性。4℃保存软骨在保存24h至20d时仍保持较好活性,软骨细胞活性保持在60%以上,软骨细胞及基质成分无明显变化;保存30d时软骨活性降为20%左右。结论:4℃和-20℃在2周内保存是较好的鼻中隔软骨保存方法,而4℃保存法更具优越性,有望为临床提供一种较好的活性软骨保存方法。
- 赵大庆赵春晨江逊牛霞陈广生马钰李航李青
- 关键词：软骨鼻中隔冷冻保存
- 脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养软骨细胞的初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的:检测脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养的C57小鼠关节软骨细胞的瞬时表达及转染效率,建立原代培养的小鼠关节软骨细胞转染方法。方法:大肠杆菌中扩增pIDO-EGFP质粒,在最优化条件下通过lipofectamine2000TM转染试剂将pIDO-EGFP质粒转入原代培养的小鼠关节软骨细胞,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞术检测其转染效率。结果:质粒携带的增强型绿色荧光蛋白在转染后24h得到了明显表达,48h后流式细胞术检测其转染效率为36.43%,未影响软骨细胞贴壁过程。结论:经绿色荧光蛋白检测表明,脂质体成功地将IDO基因转染进入原代培养的软骨细胞。转染后的软骨细胞在体外仍能存活,在最优化的条件下能达到良好的瞬时转染效率,为组织工程化软骨细胞基因导入和基因修饰提供了思路。
- 段小红何贤辉崔鹏程王晓燕吴明明史剑波许庚江逊
- 关键词：软骨细胞3-双加氧酶绿色荧光蛋白
- 氨基乙酰丙酸光动力疗法对同种异体激活淋巴细胞选择性清除作用的研究被引量：7
- 2005年
- 目的探讨氨基乙酰丙酸(ALA)对同种异体活化的外周血单个核细胞(PBMCs)的清除作用,摸索最佳ALA浓度和孵育时间。方法取正常人PBMCs进行单向淋巴细胞混合培养(MLC)5d后将其分为ALA组、光照组、ALA+光照组以及对照组。ALA组和ALA+光照组分别加入ALA终浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mmol/L。将以上MLC细胞分别孵育2、4、6h后,光照组和ALA+光照组接受410nm光源照射1h。加入原去增殖的PBMCs孵育48h。使用MTT比色法进行检测,并计算ALAPDT后的单向MLC细胞对原去增殖PBMCs的杀伤率。通过杀伤率间接比较ALAPDT清除同种异体激活细胞的效果。结果ALA+光照组对刺激细胞的杀伤率明显低于光照组、ALA组和对照组,分别为(33.0±26.5)%比(87.1±2.2)%、(89.2±2.5)%、(90.3±1.9)%(P均<0.005)。2.0mmol/L、孵育4h组杀伤率最低(P均<0.005)。结论ALAPDT能够选择性清除活化的淋巴细胞,使针对同种异体、淋巴细胞介导的免疫排斥反应减轻甚至消失,从而减轻移植物抗宿主反应。
- 王一飞潘凯丽江逊冉海红
- 关键词：白细胞淋巴细胞光敏剂
- 中药喘可治对小鼠胸腺细胞抗凋亡作用研究被引量：14
- 2005年
- 目的:研究中药喘可治(CKZ)对小鼠胸腺细胞的抗凋亡作用。方法:以地塞米松(DEX )诱导小鼠胸腺细胞凋亡建模,以CKZ保护小鼠胸腺细胞;6h时点以AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术检测早期凋亡和坏死细胞、以PI染色流式细胞术检测晚期凋亡。结果:CKZ +DEX组早期凋亡比率(3 5 2 9±2 73 ) %显著低于DEX组(4 5 97±1 3 9) %(P <0 0 1) ;该两组坏死细胞比率差异不显著。DEX +CKZ组晚期凋亡百分率为(17 2 6±4 5 8) % ,显著低于CKZ组(3 3 88±5 61) % (P <0 0 1)。上述各组数据与对照组差异显著(P <0 0 1)。
- 王通曾耀英俞渝
- 关键词：喘可治地塞米松抗凋亡流式细胞术动物实验
- 吲哚胺2，3-双加氧酶在移植免疫中的作用研究进展被引量：1
- 2008年
- 目的总结吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)参与免疫调节的可能机制,以及在移植免疫过程中的作用。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对IDO分布、免疫调节机制及其在移植免疫中的作用研究进展进行回顾总结与分析。结果IDO通过降解局部组织微环境中的色氨酸、抑制宿主同种异体T细胞增殖而发挥免疫调节作用。应用转基因技术将IDO基因整合至目的细胞基因中并表达IDO,体内试验表明可明显延长异体移植物的平均存活时间。结论IDO在移植免疫中有广阔的应用前景,为提高异体移植物术后长期存活率提供了新的思路。
- 段小红崔鹏程江逊
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶基因转染移植免疫
- IDO基因修饰的软骨细胞对T淋巴细胞增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 为检测吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因修饰的原代培养软骨细胞对T淋巴细胞的免疫抑制作用。将pEGFP-N1-IDO真核表达载体转染至C57小鼠原代培养的软骨细胞,体外检测IDO修饰的软骨细胞培养液中色氨酸水平的变化;使用CFSE标记技术,检测IDO修饰的软骨细胞体外混合淋巴细胞反应中对同种异体T淋巴细胞增殖的影响。结果:pEGFP-N1-IDO成功被导入原代培养的小鼠软骨细胞,荧光显微镜和流式细胞术均检测到EGFP的表达;体外实验表明,原代培养的软骨细胞上清可检测到一定量的色氨酸水平,而转染IDO 24 h后的软骨细胞上清中未检测到色氨酸,提示IDO转染的软骨细胞表达了具有活性IDO;使用CFSE标记技术,检测IDO修饰的软骨细胞体外混合淋巴细胞反应中对同种异体T淋巴细胞增殖的影响,发现IDO基因转染组96 h后总体增殖指数为1.122±0.017,单纯淋巴细胞阴性对照组为1.026±0.016,阳性单纯软骨细胞组为1.201±0.026,较阳性对照组,IDO基因组同种异体T淋巴细胞增殖得到明显抑制。IDO基因修饰的软骨细胞可以抑制T淋巴细胞的增殖。
- 段小红江逊何贤辉郑德育王晓燕史剑波许庚崔鹏程
- 关键词：软骨细胞吲哚胺2,3-双加氧酶混合淋巴细胞反应
- 成纤维细胞生长因子和胰岛素促小鼠软骨细胞增殖分化的效应(英文)被引量：1
- 2005年
- 背景:根据软骨为单一类型细胞组成的无血管组织,对氧和营养的供应要求较低,同种免疫性较低,体内功能较简单,易于在体外构建成可供移植的人工移植细胞系等特点,从建立用于组织工程的通用人类同种软骨细胞系着手,为人工组织和人工器官走向标准化和批量生产奠定基础。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和胰岛素在原代培养软骨细胞的增殖过程中的效应,为组织工程中细胞因子的应用与作用进行评估。设计:以细胞为研究对象,分组对照重复观察测量。单位:一所大学的组织移植与免疫实验室。材料:实验于2002-11/2003-05在暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室完成,研究对象为随机获取的培养的软骨细胞。方法:在低血清培养基培养条件下进行小鼠原代软骨细胞培养,采用WST1比色法和荧光染色法观察不同浓度bFGF和胰岛素对软骨细胞增殖的影响。主要观察指标:主要结局:①bFGF对小鼠原代软骨细胞增殖影响。②胰岛素对小鼠原代软骨细胞增殖的影响。次要结局:软骨细胞形态学观察。结果:原代软骨细胞在4g/L胎牛血清培养基培养条件下,不同浓度的bFGF和胰岛素对软骨细胞的增殖有剂量相关性。形态学观察表明,bFGF和胰岛素不仅促进细胞增殖,而且可使细胞分泌基质增多。
- 史剑波江逊狄静芳许庚崔蕴霞
- 关键词：软骨细胞碱性成纤维细胞生长因子胰岛素
- 体外培养人鼻中隔软骨细胞合成硫酸糖胺多糖的检测被引量：3
- 2008年
- 背景:软骨细胞的培养及稳定传代是转基因、构建组织工程化软骨组织及异体移植的前提条件。目的:定量检测体外培养人鼻中隔软骨细胞合成分泌硫酸糖胺多糖的变化情况,评价其对不同代次软骨细胞生物学功能活性。设计、时间及地点:对比观察的细胞学实验,于2004-01/2005-07在暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室完成。材料:人鼻中隔软骨细胞来自鼻中隔偏曲患者手术切除的软骨组织,患者对实验内容知情同意。方法:胶原酶消化分离原代人鼻中隔软骨细胞传代培养至第7代。主要观察指标:阿尔新蓝比色法测定各代细胞外基质的硫酸糖胺多糖含量,光镜观察甲苯胺蓝染色后细胞形态。结果:原代软骨细胞具有最高的硫酸糖胺多糖分泌活性,至第4代则出现了非常明显的下降,第4代以后很低下。甲苯胺蓝染色显示原代细胞对甲苯胺蓝呈明显的蓝色异染反应,第3代异染反应明显减弱,第4代以后异染反应微弱,其结果与硫酸糖胺多糖含量变化相一致。结论:人鼻中隔软骨细胞在体外培养过程中,随传代次数的增加而功能活性逐渐降低,第3代以后的细胞不适于作为人软骨组织工程种子细胞和用于细胞生物学等方面研究。
- 江逊段小红狄静芳史剑波许庚崔鹏程
- 关键词：软骨细胞细胞外基质
