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H_2O_2诱导胰岛RIN-m5F细胞构建氧化应激模型被引量：6: 2014年; 探讨H2O2诱导胰岛β-细胞氧化应激模型建立。以不同浓度H2O2作用于胰岛RIN-m5F细胞株12,18,24h探索氧化应激模型;显微镜观察细胞诱导后的形态学变化;采用活性氧(ROS)试剂盒DCFH-DA探针检测细胞内活性氧含量;Hochst染色后利用荧光显微镜观察H2O2诱导后的细胞凋亡情况。结果表明:随着H2O2浓度升高,细胞团块减少,崩解增多,细胞数目呈现减少的趋势,ROS含量依次升高,细胞凋亡率增加;随着诱导时间的加长,ROS含量显著增加(P<0.01)。250μmol/L H2O2诱导18h是构建氧化应激模型的最佳条件。; 杨艳刘东波康信聪李坚; 关键词：H2O2 氧化应激胰岛Β细胞

GIP受体激动剂类药物筛选模型的构建: 2017年; 目的:GIP受体激动剂类药物筛选模型的构建。方法:GIP受体激动剂能刺激胰岛素分泌,可作为治疗Ⅱ型糖尿病的潜在药物,因此,GIP受体激动剂的筛选模型十分重要。本研究采用PCR的方法扩增GIPR基因,将扩增产物酶切回收后与表达载体pCMV6-AC-GFP连接,构建pCMV6-AC-GIPR-GFP重组质粒,转化大肠杆菌DH5α经菌落扩增、质粒提取及序列测序重组质粒;利用脂质体lipofectamine2000转染重组质粒到RIN-m5F细胞中,通过抗生素G418筛选,挑单克隆得到稳定的RIN-m5F/GIPR-GFP细胞株。结果:结果表明PCR扩增获得长度为1 319 bp的GIPR基因,克隆至pCMV6-AC-GFP真核表达载体,经菌落PCR酶切鉴定及序列分析后,证实质粒pCMV6-AC-GIPR-GFP构建成功;通过荧光显微镜观察到细胞内荧光分布均匀,表明重组质粒成功转到RINm5F细胞中。该细胞株经阳性对照(D-Ala^2)GIP处理后,与对照组对比,具有荧光斑点聚集。结论:因此,GIP受体激动剂筛选模型RIN-m5F/GIPR-GFP成功构建,可用于筛选新的GIP受体激动剂,为糖尿病药物开发提供新的筛选模型。; 周海燕吴艳阳刘东波谢红旗; 关键词：药物筛选模型 GFP 质粒转染

GLP1R-GFP稳定转染Rin-m5F细胞系的构建: 2017年; 目的本研究目的是构建一种能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)人胰高血糖素样肽-1受体(GLP1R)的胰岛细胞系,用来筛选GLP1R激动剂类药物。方法使用X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent将pCMV6-AC-GLP1R-GFP质粒转染到Rin-m5F细胞,经G418筛选单克隆Rinm5F/GLP1R-GFP细胞并扩大培养。结果该细胞能稳定传代,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光分布均匀,Western blot验证GLP1R蛋白表达显著增加。在实验验证中,对照空白组中细胞绿色荧光分布均匀,阴性药物格列本脲(非GLP1R靶点药物)作用时细胞内无明显荧光斑点出现,阳性药物百泌达作用(GLP1R激动剂类药物)时细胞内出现显著荧光斑点。结论 GLP1R激动剂类药物筛选模型Rin-m5F/GLP1R-GFP成功构建。该模型能对混合物样品进行筛选,具有假阳性极低、筛选所需样本小、筛选样品量大、易标准化、筛选速度快、特异性强等优势,为GLP1R激动剂类药物的筛选奠定了基础。; 胡涌泉曾璐漫吴艳阳魏云林刘东波; 关键词：质粒转染

南方红豆杉枝叶与果实中6种紫杉烷类化合物含量分析被引量：8: 2016年; 以南方红豆杉的枝、叶、果实为材料,建立了高效液相色谱法同时测定6种紫杉烷类化合物(紫杉醇、三尖杉宁碱、7–表–10–去乙酰紫杉醇、7–表–紫杉醇、巴卡亭III、10–去乙酰巴卡亭III)含量的方法。结果表明:以甲醇–乙腈–水(体积比为25∶36∶39)为流动相,等度洗脱,检测波长227 nm,6种紫杉烷类化合物在35 min内完全分离;南方红豆杉的枝、叶、果实中6种紫杉烷类化合物含量存在差异,其中,紫杉醇和7–表–10–去乙酰紫杉醇在种胚中含量最高,分别为866.47、722.50μg/g,10–去乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和7–表–紫杉醇在叶中的含量最高,分别为301.20、234.08、11.74μg/g,三尖杉宁碱含量最高的部位是枝,为392.69μg/g。; 杨星星王仁才张家银李炎林秦宇熊兴耀; 关键词：南方红豆杉枝叶果实紫杉烷

裸仁南瓜籽油活性成分分析及抗氧化能力评价被引量：10: 2018年; 以超临界CO2萃取的裸仁南瓜籽油为研究对象,根据LS/T 3250—2017《南瓜籽油》标准检测其质量指标,运用气相色谱—质谱(GC-MS)联用仪分析脂肪酸和植物甾醇组分,高效液相色谱(HPLC)仪测定角鲨烯含量;以葡萄籽油和亚麻籽油作为对比,研究裸仁南瓜籽油对DPPH、ABTS自由基的清除能力,以评价其抗氧化活性。结果表明,超临界CO2萃取的裸仁南瓜籽油符合LS/T 3250—2017标准,裸仁南瓜籽油主要含有4种不饱和脂肪酸,总含量为74.73%,其中顺式单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量分别为29.14%,45.54%;富含植物甾醇,β-谷甾醇含量为30.75%,△-7植物甾醇含量达10.77%;角鲨烯含量为5 490μg/g,高达葡萄籽油的80倍,亚麻籽油的279倍;裸仁南瓜籽油具有良好的抗氧化活性,其抗氧化性与油浓度呈正相关,对DPPH自由基的清除能力(IC50为16.14 mg/mL)优于葡萄籽油、亚麻籽油,对ABTS自由基的清除能力(IC50为10.46mg/mL)优于亚麻籽油,裸仁南瓜籽油良好的抗氧化活性可能与其丰富的角鲨烯、植物甾醇和不饱和脂肪酸有关。; 陈田戴思慧沈鹏原贺向荣钟晴刘东波; 关键词：不饱和脂肪酸植物甾醇抗氧化活性

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国际科技合作与交流专项项目(2013DFG32060)