国家自然科学基金(30271247)
- 作品数：12 被引量：26H指数：4
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- CD137/CD137L信号通路在体外T细胞增殖反应和体内SGVHD诱导中的作用被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨抗CD137L单克隆抗体在体外、体内阻断CD137/CD137L信号通路对T细胞体外增殖的影响以及对小鼠同基因型移植物抗宿主病(syngeneic graft versus host disease,SGVHD)的作用。方法:体外混合淋巴细胞反应中加入不同浓度的抗CD137L单克隆抗体,观察抗体对T细胞增殖的影响。同基因骨髓细胞移植给致死剂量X射线照射的受体小鼠后,腹腔注射环孢素A(cyclosporine A,CsA)诱导SGVHD,并于诱导治疗的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗。观察各组小鼠的临床症状(体重下降,腹泻),组织病理学和细胞因子改变。结果:体外用抗CD137L单抗阻断CD137/CD137L通路后,可抑制淋巴细胞的增殖和IL-2的产生。体内注射抗CD137L单抗,小鼠SGVHD的发生率为25%,显著低于诱导组小鼠SGVHD 67%的发生率,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12I、FN-γ、TNF-αmRNA水平升高。而抗体治疗组小鼠组织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12I、FN-γ、TNF-αmRNA水平较低或检测不到,而IL-4mRNA水平升高。结论:单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在体外可明显抑制混合淋巴细胞反应,在体内可明显抑制小鼠SGVHD的发生。
- 刘兴田张利宁张蘋王玉坤王群孙汶生
- 关键词：抗体共刺激分子
- 4-1BBL研究进展被引量：5
- 2003年
- 4 1BBL属于肿瘤坏死因子配体超家族 ,它所介导的协同刺激信号可促进T淋巴细胞的活化、增殖、分化 ,在免疫应答、免疫调节以及肿瘤、病毒感染、移植排斥的免疫治疗等方面发挥了重要的作用。对 4 1BBL的深入研究 。
- 王群
- 关键词：免疫应答免疫调节免疫治疗
- 小鼠同基因型移植物抗宿主病发生机制及其意义
- 2005年
- 目的：初步探讨小鼠同基因型移植物抗宿主病(SGVHD)的发生机制,为研究移植物抗白血病效应奠定基础。方法：用同基因骨髓细胞重建致死剂量X线照射的小鼠,用环孢素A(CsA)腹腔注射诱导治疗21d。停药后每日观察小鼠临床症状,在小鼠出现GYHD样症状时,取肝脏、结肠、耳朵、皮肤和胸腺进行组织学检查,并检测肝脏、结肠组织细胞因子和协同刺激分子的表达。结果：67％(19／28)的模型组小鼠产生GVHD样症状,组织病理检查发现GVHD样小鼠结肠和肝脏有组织坏死和大量炎细胞浸润,而移植对照组均未出现GVHD样症状,组织学未见明显异常。R7-PCR检测发现GVHD样小鼠结肠和肝脏组织中共刺激分子CD137mRNA水平和细胞因子IL-12、IFN-Υ和TNF-α mRNA水平较移植对照组小鼠的水平升高。结论：CsA可诱导同基因型骨髓移植小鼠产生GVHD样症状,Th1类细胞因子参与了SGVHD的发生,为进一步研究$GVHD的抗肿瘤机制建立了技术平台。
- 刘兴田张利宁王玉坤王晓燕高丽芬王群李娜张蘋高飞
- 关键词：细胞因子抗肿瘤
- 应用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路抑制小鼠SGVHD的发生
- 2006年
- 目的:探讨抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在小鼠同基因型移植物抗宿主病(SGVHD)诱导中的作用,以阐明SGVHD的发生机制。方法:用致死剂量的X射线照射受体小鼠后,移植同基因骨髓细胞,从移植的当天开始连续21天腹腔注射环孢素A(CsA)诱导SGVHD。于诱导的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗。观察各组小鼠的临床症状(体重下降,腹泻)、组织病理学和细胞因子改变。结果:抗CD137L单克隆抗体治疗组小鼠SGVHD的发生率明显低于诱导组小鼠SGVHD的发生率(25%vs 67%),两者差异具有统计学意义(P<0.01)。SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-αmRNA水平升高。而抗体治疗组小鼠织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFNγ-、TNF-αmRNA水平较低或检测不到。结论:单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路可明显抑制小鼠SGVHD的发生,提示CD137/CD137L信号通路在小鼠SGVHD免疫反应中是较为重要的通路之一。
- 刘兴田张利宁王玉坤王群高立芬李娜张刘军莉高飞
- 关键词：抗体骨髓移植
- sGVHD小鼠结肠IEL细胞CD137和Th1细胞因子的表达被引量：1
- 2005年
- 目的研究协同刺激分子CD137和Th1类细胞因子在小鼠同基因型移植物抗宿主疾病(sGVHD)中的作用。方法受体鼠用同基因型骨髓移植后,用环孢菌素A(CsA)诱导3周建立小鼠sGVHD模型;从小鼠结肠中分离上皮内淋巴细胞;用流式细胞术测定细胞亚群,RT-PCR方法检测CD137和Th1类细胞因子的表达,3H掺入法测定T细胞增殖的抑制。结果sGVHD时,小鼠病变器官结肠上皮内淋巴细胞(IEL)中CD137及Th1类细胞因子(IL-12,IFN-γ,TNF-α)表达较正常,而移植对照组明显增高(P<0.01);IFN-γ的增高始于环胞霉素A诱导治疗后3周,而CD137和IL-12、TNF-α表达增高仅在出现GVHD样症状时,Th2类细胞因子(IL-4I、L-10)在GVHD的诱导和发生中均无明显改变。
- 张利宁刘星霞王晓燕王群张艹频宋静孙汶生
- 关键词：细胞因子
- 肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系被引量：6
- 2007年
- 目的研究肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系。方法采用小鼠肝癌细胞系H22接种BALB／c小鼠,建立肝癌模型;采用流式细胞术方法检测CD4^＋ CD25^＋T／CD4^＋T细胞的比例;以RT-PCR和流式细胞术检测Foxp3基因的表达。以免疫磁珠分选法纯化CD4^＋CD25^＋T和CD4^＋CD25^-T细胞;在体外,用3H-TdR掺入法检测T细胞的增殖情况;在体内,观察荷瘤小鼠来源的CD4^＋CD25^＋T细胞对肿瘤生长的作用。结果（1）荷瘤小鼠在引流淋巴结中,CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4＋T细胞（18．80％±0．06％）比例增高,与对照组（9．50％±0．03％）相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;在非引流淋巴结（LN）和脾脏（SP）中,荷瘤小鼠CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T比例分别为16．28％±0．02％和17．28％±0．06％,与对照组9．50％±0．03％和11．08％±0．04％相比,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;同时,调节性T细胞特异性标志Foxp3 mRNA的表达也升高。在同一只荷瘤小鼠中,引流淋巴结中CD4^＋CD25^＋T细胞数量（18．8％±0．06％）较对侧非引流淋巴结（16．28％±0．02％）略有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）从荷瘤小鼠中纯化的CD4^＋CD25^＋T细胞,在体外对抗CD3单抗的刺激无反应,但能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。（3）CD4^＋CD25^＋T／CD4＋T比例与肿瘤大小呈正相关,并且可以抑制CD4^＋CD25^-T细胞的抗肿瘤效应。结论肝癌细胞在小鼠体内的生长可以提高调节性T细胞的数量,其数量的高低与肿瘤的大小呈正相关,提示清除调节性T细胞将是肿瘤免疫治疗的策略之一。
- 张蘋张利宁朱法良王群王晓燕李海艳刘春梅高飞刘成虎
- 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞FOXP3
- 人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点被引量：5
- 2003年
- 目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点。方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达。结果:诱导培养5～7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%。结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加。为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础。
- 王群张利宁肖东杰丁培芳宋静孙汶生
- 关键词：树突状细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素4
- 重组人白细胞介素18对小鼠骨髓细胞移植后急性移植物抗宿主病的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨重组人白细胞介素18(rhIL-18)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响,为rhIL-18用于临床移植免疫提供理论基础。方法:受体鼠(BALB/c)接受9.0Gy剂量的X-射线照射之后,通过其尾静脉注射供体鼠(C57BL/6)的骨髓细胞和脾细胞,并于移植的-2^+2d腹腔注射rhIL-18。移植后观察受体鼠的临床症状和存活状况,同时检测其肝脏、结肠和耳朵的病理变化。结果:移植后aGVHD期内,用rhIL-18治疗的受体鼠GVHD症状积分较未接受rhIL-18治疗的受体鼠低(P<0.05),肝脏和结肠的病理变化轻(P<0.05),短期存活时间延长(P<0.05),但对长期生存率无明显影响。结论:受体鼠早期接受rhIL-18治疗,可在移植后aGVHD期内降低aGVHD的病变程度,为rhIL-18在临床上预防和治疗aGVHD提供了实验依据。
- 刘兴田张利宁王玉坤王晓燕高丽芬王群李娜刘军莉
- 关键词：白细胞介素18骨髓移植移植物抗宿主病
- 小鼠CTLA4-Ig融合蛋白的表达、纯化及活性测定
- 2004年
- 目的:在真核细胞中表达CTLA4鄄Ig融合蛋白,获得纯品并测定其生物学活性。方法:用电转染的方法将真核表达载体pREP7鄄CTLA4鄄IgG2c转染SP2/0细胞,经300μg/ml的潮霉素筛选得到阳性克隆;大量培养后收集含有重组CTLA4鄄IgG2c的细胞培养上清,用rProteinA亲和层析柱纯化CTLA4鄄Ig。用还原和非还原性SDS鄄PAGE和蛋白印迹进行鉴定。采用单向混合淋巴细胞培养(3H掺入法)测定CT鄄LA4鄄Ig对T细胞增殖的抑制效应。结果:阳性克隆大量培养的细胞上清经rPrtoteinA亲和层析后得到纯化CTLA4鄄Ig。还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot的结果显示在55KD出现目的蛋白条带;在非还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot在130KD处出现目的蛋白条带。混合淋巴细胞培养5d的结果显示,CTLA4鄄Ig浓度为10μg/ml时可以抑制T细胞的增殖;20μg/ml时抑制达到最大程度(P<0.05);继续增加CTLA4鄄Ig的浓度,其抑制作用不再增强。3、7d时的抑制作用不明显。结论:在SP2/0中表达了小鼠CTLA4鄄Ig融合蛋白,该融合蛋白能抑制T细胞的增殖。
- 张蘋张利宁刘军莉王群宋静王晓燕
- 关键词：CTLA4融合蛋白混合淋巴细胞培养增殖
- 人CD137L在肿瘤细胞上的表达及其功能研究被引量：3
- 2003年
- 为研究不同来源人肿瘤细胞系表面cD137L的表达和功能。采用RT-PCR、FACS方法检测人CD137L在肿瘤细胞的表达,运用ELISA的方法检测CD137L对T细胞释放IFN-γ的影响及对肿瘤细胞分泌IL-8的影响。结果:来源于肝癌、肺癌、结肠癌、白血病的9种人肿瘤细胞系均可不同程度表达CD137L,但CD137L的表达水平与肿瘤细胞系的来源无相关,同一组织来源的细胞系,有的高表达,有的低表达。胚胎细胞系ECV 304中度表达CD137L,而正常新分离的PBMC不表达。功能研究发现:L78肿瘤细胞上表达的CD137L在CD3单抗存在的情况下与T细胞上的CD137L结合,能提高T细胞释放IFN-γ的水平,其作用具有剂量依赖性,这种作用可被抗-CD137L阻断;而CD137L表达水平与L78相似的Hep G2.2.15细胞在CD3单抗存在下并不能增强T细胞IFN-γ的分泌,进一步分析发现Hep G2.2.15同时表达较高水平的CD137(大约为91.6％),而L78几乎不表达CD137。肿瘤细胞上CD137L与表达在CHO细胞表面的CD137相互作用对肿瘤细胞分泌IL-8的水平产生不同的影响,使Hep G2.2.15分泌IL-8的水平约增加2倍(从15 pg/ml增加到30 pg/ml),但对肿瘤细胞HLE、A2分泌IL-8没有明显影响。CD137L在肿瘤细胞上的表达是普遍现象,其表达可能与细胞的快速生长有关;某些肿瘤细胞系表达的CD137L是有功能的。
- 张利宁李长菲王振光曹英林马春红孙汶生
- 关键词：肿瘤细胞CD137白细胞介素8Γ-干扰素
