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国家自然科学基金(81272419)
作品数:
2
被引量:4
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相关作者:
张永生
涂艳阳
张磊
张鹏幸
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第四军医大学唐都医院
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转录因子SOX9基因对脑胶质瘤干细胞干性维持的相关性研究
被引量:3
2015年
目的:应用慢病毒干扰SOX9的表达,观察其对脑胶质瘤干细胞干性维持的影响。方法:设计2条针对SOX9转录短发夹RNA(sh RNA)的DNA序列,构建慢病毒并感染胶质瘤细胞系U87、U251细胞,利用嘌呤霉素筛选稳转细胞。在转录水平及蛋白水平检测SOX9的沉默效果,利用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)及免疫荧光染色检测相应干细胞相关标志分子SOX2、Nestin的表达差异。比较诱导形成的胶质瘤干细胞成球能力(肿瘤干细胞成球的直径),同时利用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)及免疫荧光染色对干细胞相关标志物SOX2、Nestin的表达水平进行比较。结果:SOX9成功包装慢病毒并有效感染U87、U251细胞,实时荧光定量PCR检测其抑制率分别可降低83.74%和80.12%。并且在稳转细胞系水平相关干细胞标志分子表达含量有明显下降。在干细胞层面沉默SOX9可以明显抑制胶质瘤细胞诱导成球的直径(P<0.01),同时免疫荧光显示肿瘤干细胞相关干性分子SOX2、Nestin的表达水平较对照组明显降低。结论:慢病毒感染沉默SOX9基因可以抑制胶质瘤干细胞干性的维持,为胶质瘤的生物治疗提供了重要的靶点。
张磊
涂艳阳
张鹏幸
杨安钢
吴介恒
缪吉玉
温伟红
张永生
关键词:
SOX9
慢病毒
胶质瘤干细胞
MicroRNA.218通过靶向多梳家族Bmil基因抑制胶质瘤的侵袭、迁移、增殖和肿瘤干细胞样细胞的自我更新
被引量:1
2014年
目的:探讨microRNA-218抑制胶质瘤侵袭、迁移、增殖和抑制肿瘤干细胞样细胞自我更新的分子机制.方法:在胶质瘤细胞中过表达miR-218,利用定量逆转录PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Westernblotting)检测Bmil的表达水平,并利用创伤修复和体外迁移实验检测胶质瘤细胞的迁移和增殖能力;通过裸鼠移植瘤实验,检测体内过表达miR-218对胶质瘤生长的影响;利用生物信息学手段预测miR-218的直接靶标,并通过qRT—PCR、蛋白质印记技术、荧光素酶报告系统和免疫荧光实验对预测的靶标基因进行验证;以胶质瘤细胞球形成实验和极限稀释法验证miR-218对胶质瘤干细胞样细胞自我更新能力的影响;构建Broil干扰载体下调胶质瘤细胞中Bmil的表达,检测对胶质瘤迁移和增殖的影响;利用基因表达芯片分析胶质瘤细胞中miR-218对基因表达的影响.结果:Bmil是miR-218的一个直接靶标,miR-218通过下调Broil的表达来削弱胶质瘤细胞的迁移和增殖能力,并抑制胶质瘤干细胞样细胞的自我更新.另外,miR-218还参与调控一系列与胶质瘤细胞发育相关的基因.结论:作为一种肿瘤抑制因子,miR-218能阻止胶质瘤细胞的迁移、侵袭、增殖,并削弱其干细胞样特征.
涂艳阳
高兴春
李刚
付华林
崔大祥
刘辉
金卫林
张永生
关键词:
胶质瘤
迁移
增殖
自我更新
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