国家自然科学基金(30772590)
- 作品数：48 被引量：74H指数：5
- 相关作者：王艳林韩钰曹春雨杨建林蔡富强更多>>
- 相关机构：三峡大学武汉工程大学三峡大学第一临床医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人钙网蛋白的克隆与原核表达被引量：1
- 2008年
- 目的:克隆人钙网蛋白(calreticulin,CRT)并进行原核表达和纯化。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人钙网蛋白cDNA,构建CRT原核表达质粒(pE15b/CRT)并转化E.coli的Rossetta菌株。IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,然后透析复性。分别用SDS-PAGE和Western blotting鉴定CRT表达和纯化状态结果:从A549细胞总RNA中成功获得人CRTcDNA克隆,重组质粒pET-15b/CRT构建正确。转化pET-15b/CRT的E.coliRossetta诱导性表达重组人CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化。结论:成功建立了CRT原核表达和纯化的实验方法,该方法为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础。
- 曹春雨韩钰王艳林
- 关键词：钙网蛋白原核表达蛋白纯化
- 多胺代谢与肿瘤细胞信号转导被引量：1
- 2014年
- 肿瘤细胞的快速增殖依赖于细胞内的多胺水平,耗竭细胞内多胺可抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。与此同时,细胞内多胺含量的改变可以影响肿瘤细胞内多种信号通路的活性,依据受影响信号分子功能的差异,这些信号通路活性的改变具有增强或抑制耗竭多胺产生的抗肿瘤效应的功能,从而对肿瘤细胞的生长、分化、迁移和侵袭产生不同的影响。综述多胺对肿瘤相关信号通路的影响及其分子机制。
- 王清王艳林曹春雨
- 关键词：多胺多胺代谢肿瘤信号转导
- 四丁基丙二胺对人MG63骨髓瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响被引量：6
- 2012年
- 目的分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutylpropanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。结果TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性。流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加。TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值。
- 张贺吉王凯韩钰杨建林王艳林
- 关键词：多胺多胺类似物骨髓瘤细胞
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶融合蛋白高表达对小鼠黑素瘤细胞B16-F1细胞周期的影响被引量：4
- 2011年
- 目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)与绿色荧光蛋白融合蛋白GFP-OAZ1和GFP-OAZ2高表达对小鼠黑色素瘤B16-F1细胞周期的影响。方法构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达质粒并经脂质体法瞬时转染B16-F1细胞,然后用Western blot分析法和荧光显微镜下观察融合蛋白在B16-F1细胞中的表达。流式细胞分析用于检测GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞周期的影响。Western blot分析法鉴定GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞中鸟氨酸脱羧酶(ODC)酶蛋白水平的影响。结果成功构建的GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因B16-F1细胞中正确高效表达。经流式细胞检测发现,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达导致细胞G0/G1期阻滞。当用OAZ1和OAZ2分别与ODC共转染B16-F1细胞时,OAZ1融合蛋白高表达显著性减低细胞内ODC蛋白水平,但OAZ2融合蛋白高表达无此种影响。结论成功构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达载体,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达均能将B16-F1细胞阻滞于G0/G1期,但仅OAZ1融合蛋白能显著性促进ODC降解,OAZ2融合蛋白无此种功能。
- 刘梦瑶韩钰蔡富强何玲王艳林
- 关键词：融合蛋白真核表达细胞周期
- 用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性被引量：1
- 2010年
- 目的探讨精脒/精胺乙酰转移酶(Spermidine/Spermine N1-Acetyltransferase,SSAT)基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株。用10μmol·L-1CPENSpm处理对照细胞24h可使SSAT mRNA水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响。细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性显著性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,10μmol·L-1CPENSpm处理细胞48h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。
- 韩钰任玉珊曹春雨任东明周永芹王艳林
- 关键词：多胺类似物肺癌细胞株药物敏感性
- 多胺调控细胞生长机制的研究进展被引量：4
- 2014年
- 多胺(腐胺、精脒、精胺)是真核细胞体内重要的多聚阳离子,对细胞的生长增殖发挥重要作用。快速生长的细胞内含有高浓度的多胺,降低多胺含量将抑制细胞的生长,阻滞细胞周期,而升高多胺含量则会促进细胞快速生长增殖。对多胺的调控已经成为研究细胞生长增殖调控的切入点之一。
- 张军韩钰王艳林
- 关键词：多胺细胞生长细胞增殖
- 新多胺类似物四丁基丙二胺对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响。方法 MTT比色法分析细胞增殖影响,流式细胞术检测细胞周期改变,Transwell体外迁移/侵袭实验检测迁移侵袭能力的变化,Western Blot用于分析细胞多胺代谢相关蛋白精胺氧化酶(SMO)的表达水平,化学发光法测定SMO活性,反相高效液相色谱法分析TBP对细胞多胺含量的影响。结果 TBP有效抑制HepG2细胞增殖水平,对细胞的侵袭、迁移能力也有明显抑制作用。TBP抑制细胞DNA复制,导致S期细胞比例显著性下降,G0/G1期细胞比例升高。细胞浆中SMO含量明显升高,但其酶活性下降。TBP显著性增加了细胞的腐胺水平,但对精脒和精胺无影响。结论 TBP能够抑制人肝癌HepG2细胞增殖、降低HepG2细胞侵袭和迁移的能力,其机制可能与影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布有关。
- 杨建林韩钰王凯张贺吉张军王艳林
- 关键词：多胺类似物TBPHEPG2细胞
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶I与多胺代谢被引量：4
- 2011年
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶I(ornithine decarboxylase antizyme 1,OAZ1)是调节细胞内多胺含量的重要因子,参与细胞生长与分化、胚胎发育、基因表达调控等重要生理过程,也是抗肿瘤治疗的潜在分子靶点。简要综述鸟氨酸脱羧酶抗酶I在结构与功能,及其调控多胺代谢机制方面的研究进展。
- 蔡富强王艳林
- 关键词：多胺代谢调控肿瘤
- siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1的表达抑制黑素瘤细胞增殖被引量：1
- 2011年
- 目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-1及对照psilenc-er2.1-U6/scrambled质粒,脂质体转染法将质粒转染入B16-F1细胞,Western blotting和定量PCR检测B16-F1细胞中OAZI-1的表达。MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/OAZI-1对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响;MTT法检测干扰OAZI-1表达后B16-F1细胞对抗肿瘤药物紫杉醇(docetaxel)的敏感性。结果:成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/OAZI-1质粒的B16-F1细胞(B16/OAZI-1细胞),B16/OAZI-1细胞中OAZI-1 mRNA和蛋白表达分别为阴性对照B16/scrambled细胞的25.0%和18.9%。干扰OAZI-1的表达抑制B16-F1细胞的增殖,G0/G1期细胞比例增加[(57.0±0.8)%vs(63.5±0.7)%,P<0.01],而S期和G2/M期细胞比例减少[(31.5±0.7)%vs(27.5±0.3)%,P<0.05;(11.5±0.3)%vs(9.1±0.6)%,P<0.01]。干扰OAZI-1的表达能降低B16-F1细胞对紫杉醇的敏感性。结论:siRNA干扰OAZI-1的表达能抑制黑素瘤B16-F1细胞的增殖,并降低其对紫杉醇的敏感性。
- 何玲韩钰刘梦瑶蔡富强王艳林
- 关键词：RNA干扰技术黑素瘤细胞
- 多胺类似物BENS对黑素瘤B16-F1细胞生长的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨多胺类似物N1,N11-bis(ethyl)norspermine(BENS)对黑素瘤B16-F1细胞生长及凋亡的影响。方法:BENS处理B16-F1细胞,MTT法检测细胞存活率,FCM法检测细胞凋亡率,荧光染色法检测线粒体膜电位的变化,DNA片段化检测细胞凋亡,Western印迹法检测凋亡相关蛋白的含量。结果:多胺类似物BENS能显著抑制B16-F1细胞增殖,抑制率呈药物浓度依赖性。BENS可诱导DNA片段化,导致FCM分析中出现典型的亚凋亡峰,同时伴有细胞线粒体膜电位降低、细胞色素C由线粒体向细胞质释放和Bax由细胞质向线粒体转移等凋亡相关性改变。结论:多胺类似物BENS抑制黑素瘤B16-F1细胞生长,并能诱导该细胞凋亡,具有潜在的临床应用价值。
- 任玉珊韩钰曹春雨王艳林
- 关键词：细胞生长细胞凋亡
