广州市医药卫生科技项目(2009-ZDi-05)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
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- 人增生性瘢痕中整合素连接激酶表达及与血管生成的关系被引量：8
- 2011年
- 目的探讨不同生长期人类瘢痕巾整合素连接激酶（ILK）表达及与血管生成的关系，方法（1）将笔者单位2009年12月-2010年12月收治的15例烧伤瘢痕忠背按德痕生长时间分为：小于6个月组、6～12个月组、大于12个月组．每组5例。采集各组瘢痕绀织，用免疫组织化学法观察ILK的表达分布，实时荧光定量RT—PCR法检测ILK mRNA的表达水平。（2）取小于6个月组瘢痕组织，分离培养瘢痕微血管内皮细胞（MEC），免疫磁珠法纯化后用花青类荧光染料Cy3标记的凝血因子Ⅷ进行鉴定，以人皮肤Fb为对照。取对数牛长期MEC，按随机数字表法分为3组：对照组，仪用含微m管生长添加剂的M131培养液培养；空质粒组，用空载质粒转染；ILK甄补DNA转染组，用ILK互补DNA表达质粒转染。转染24h后，实时荧光定量RT—PCR法榆测各组细胞中ILK、激胁功能区受体（KDR）、fms样酪氨酸激酶1（Flt—1）的mRNA表达情况。对数据进行单闪索方差分析．结果（1）小于6个月组瘢痕组织表皮荩底细胞、MEC及Fh胞质中均有ILK阳性表达，6～12个月组搬痕组织巾仅表皮基底细胞可见ILK阳性表达，大于12个月组瘢痕组织中ILK阳性表达不明显、（2）小于6个月组瘢痕组织中ILKmRNA表达水平（0．34±0．16）明显高于6～12个月组（0．17±0．06）及大于12个月组（0．07±0．13），F=37．007，P=0．000。（3）纯化后MEC旱铺路行样密集生长，胞质中凝血因子Ⅷ呈阳性表达；人皮肤Fb中未见凝血因子Ⅷ表达。（4）ILK瓦补DNA转染纰瘢痕MEC中ILK、KDR及FIt—1的mRNA表达水平分别为57．807±5．556、0．836±0．014、0．162±0．005，均姓著高于对照组的0．018±0．003、0．028±0．020、0．023±0．004和夺质粒组的0.042±0．005、0．039±0．007、0．046±0．003（F值分别为87．110、11．241、18．199，P值均小于0．01）。结论ILK主要表达于小于6个月的早期瘢
- 李叶扬米兰李罡林伟华孙敬恩王仁坤梁振文
- 关键词：瘢痕新生血管化病理性整合素连接激酶微血管内皮细胞
- 整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响被引量：5
- 2014年
- 【摘要】目的观察整合素连接激酶（integrin—linkedkinase，ILK）对人瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响，以探讨其在瘢痕形成中的作用。方法体外分离培养瘢痕成纤维细胞，并按下述方法处理并分组：①空白对照组，仅含有常规高糖DMEM培养液；②转染试剂jetPRIME。TM对照组（jetPRIME。TM对照组），常规高糖DMEM培养液与200μljetPRIME。TMbuffer及4txljetPRIME。TM反应试剂；③ILK小分子干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）组（ILKsiRNA组），常规高糖DMEM培养液与siRNA转染复合物；④ILK互补DNA（complementaryDNA，cDNA）组（ILKcDNA组），常规高糖DMEM培养液与cDNA转染复合物。分别检测细胞增殖、ILK信使RNA（messengerRNA，mRNA）、仅．平滑肌肌动蛋白（0I—smoothmuscleaetin，d—SMA）mRNA表达及其蛋白表达水平。结果①四唑翁盐（XTT）检测结果表明，转染后48h，各组成纤维细胞增殖水平，空白对照组为0．820±0．065，jetPRIMETM对照组为0．873±0．041，ILKsiRNA组为0．554±0．013，ILKcDNA组为1．296±0．094。各组48h内的细胞增殖曲线见，ILKsiRNA组的细胞增殖极为平缓，而ILKcDNA组的细胞增殖水平从12h开始逐渐升高。转染后48h，ILKsiRNA组细胞增殖水平明显低于其他3组（P值分别为0．021、0．034、0），ILKcDNA组细胞增殖水平明显高于其他3组（P值分别为0．017、0．009、0）。②实时荧光定量聚合酶链式反应（Real—timeqPCR）技术检测结果显示，ILKmRNA和OL．SMAmRNA的表达水平，空白对照组为0．6934-0．412和0．4224-0．037，jetPRIME“对照组为0．621±0．183和0．3884-0．005，ILKsiRNA组为0．0524-0．019和0．0734-0．023，ILKcDNA组为240．1934-35．170和138．056±24．060。ILKsiRNA组ILKmRNA和OL—SMAmRNA表达水平均显著低于其他组，差异有统计学意义（P〈0．05）；而ILKcDNA组ILKmRNA和d—SMAmRNA表达水平均显著高于其他3组，差异有统计学意义�
- 林伟华李叶扬米兰李罡孙敬恩王仁坤梁振文
- 关键词：瘢痕成纤维细胞
- 整合素连接激酶对增生期瘢痕血管生成的调控作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨整合素连接激酶（intergrin—linked kinase，ILK）对增生性瘢痕血管生成的影响及调控机制。方法收集6例增生期的瘢痕组织标本，体外分离培养瘢痕微血管内皮细胞（HSMECs），取2—4代生长状态良好的细胞，并分成4组：空白对照组，常规细胞培养；阴性对照组，只加入Lipo2000转染试剂；LY294002组，加入终浓度50nmol／L的LY294002；ILK siRNA组，加入终浓度为20nmol／L的ILK siRNA。转染48h后，采用RT—PCR法及Western Blot法检测ILK mRNA和蛋白表达的变化。利用Transwell法，收集转染后的4组HSMECs，用不含血清的DMEM重悬，种入上层小室，下层加完全培养基，10h后终止实验，计算各组细胞迁移数，观察不同处理因素对HSMECs迁移能力的影响。将冻融的ECMatrix基质胶在冰面上均匀的铺人预冷的48孔板中，37℃温箱孵育使其凝胶，然后取转染后的4组细胞种人胶面上，8h后终止实验，依据血管形成模式评分表随机选择8个视野进行评分，分析各组细胞的体外血管形成能力。结果①与空白对照组（ILK mRNA=0．829±0．109、ILK蛋白=1）相对比，ILK siRNA组HSMECs内ILK mRNA表达水平（ILK mRNA=0．002±0．000；t=13．151，P=0．006）及蛋白表达水平（ILK蛋白=0．096±0．049；t：36．656，P=0．000）均明显受到抑制，而LY294002组ILK的表达虽略有降低，但差异无统计学意义。②ILKsiRNA组与LY294002组在10h时的细胞迁移数分别为88．111±3．079、138．667±2．404，较空白对照组322．333±3．712显著降低（P〈0．05）。③在体外血管形成8h时，ILK siRNA组（2．625±0．125）和LY294002组（3．125±0．250）与空白对照组（4．333±0．191）相比，体外血管形成受到明显的抑制，无法形成完整的复杂网络结构（P〈0．05）。结论在ILK表达下调的情况下，HSMECs的迁移能力与体外血管形成能力均受到明显抑制，推论ILK可能参与对瘢痕血�
- 王仁坤李叶扬李罡林伟华孙敬恩梁振文王晓红
- 关键词：整合素连接激酶瘢痕内皮细胞细胞运动
- 整合素连接激酶在瘢痕转化生长因子-β1/Smad3信号通路中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的 观察整合素连接激酶（ILK）在转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad3信号通路中的作用,探讨ILK对瘢痕成纤维细胞分化影响的作用机制.方法 体外分离培养瘢痕成纤维细胞后,实验分为4组：对照组、ILK小分子干扰RNA（siRNA）组、TGF-β1组、ILK siRNA＋TGF-β1组.采用荧光标记的免疫细胞化学法检测各组成纤维细胞中ILK的表达变化,应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测各组成纤维细胞中ILK mRNA、Smad3 mRNA及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA的表达.结果 免疫荧光图像显示,经siRNA沉默后,成纤维细胞的ILK表达水平下调;经TGF-β1（5μg/L）刺激后,ILK表达水平明显上调.FQ-PCR检测结果显示：经ILK siRNA转染后,成纤维细胞的ILK mRNA（0.522±0.113）、Smad3 mRNA （0.222±0.089）及α-SMA mRNA（0.118±0.080）表达水平同时下降;应用TGF-β1刺激后,成纤维细胞的ILK mRNA （2.233±0.511）、Smad3 mRNA（2.891±0.475）及α-SMA mRNA（2.581 ±0.826）表达水平重新上升,与对照组及ILK siRNA组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 在瘢痕成纤维细胞中,Smad3及α-SMA的mRNA水平可以被ILK上调,而TGF-β1又可以诱导ILK的表达,ILK可能参与Smad蛋白的调控,对TGF-β1/Smad3信号通路诱导的促成纤维细胞分化作用产生影响.
- 林伟华李叶扬米兰李罡孙敬恩王仁坤
- 关键词：整合素连接激酶增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子-Β1
- 整合素连接激酶对人瘢痕成纤维细胞中创面收缩相关因子mRNA表达的影响被引量：5
- 2012年
- 创面愈合后瘢痕形成及挛缩可致各种畸形，造成严重功能障碍。创面收缩主要缘于Fb与胶原以及ECM之间的相互作用，创面愈合后这种作用持续存在，导致瘢痕挛缩。
- 孙敬恩李叶扬米兰李罡王仁坤戴丽冰
- 关键词：创面收缩瘢痕成纤维细胞整合素连接激酶MRNA表达创面愈合后瘢痕挛缩
