国家高技术研究发展计划(2002AA214181)
- 作品数：8 被引量：47H指数：5
- 相关作者：管晓虹冯振卿仇镇宁徐明王晓婷更多>>
- 相关机构：南京医科大学哈佛大学江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金World Health Organization更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大容量天然人源Fab抗体库的构建及日本血吸虫抗独特型抗体的筛选、鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的:构建大容量天然人源Fab抗体库,筛选全人源日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:采集15位健康成人的骨髓淋巴细胞,构建天然人源Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了2×109大容量天然人源Fab抗体库,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过6轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取80个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(C12、C19、D1、D2),其中C12经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了大容量天然人源Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体C12,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。
- 张慧林焦永军朱进冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫噬菌体抗体库抗独特型抗体抗体FAB段
- 日本血吸虫NP30抗体检测方法的优化被引量：4
- 2006年
- 目的为了提高单克隆抗独特型抗体NP30抗体检测系统在大山区日本血吸虫病疫区的诊断效能,在原有的双抗体夹心ELISA方法的基础上对其进行优化、改良,建立间接ELISA血清学诊断方法。方法通过正交设计,选用L27(313)正交表,对NP30腹水包被酶标板的浓度、血清浓度、血清孵育时间和辣根过氧化物酶标记抗人IgG的二抗孵育时间共4个因素的3个水平进行不同组合的实验,确定该间接法的最佳实验条件。并用建立的方法对50份云南大山区日本血吸虫粪孵阳性病人血清样本和50份非疫区正常人血清样本进行检测,评价其敏感性和特异性。结果确定的该间接法最佳检测条件为:NP30腹水4μg/ml包被酶标板,血清浓度为1∶100,37℃孵育60min,二抗为37℃孵育30min。该方法的敏感性和特异性分别为88%和96%。结论该方法具有较高的诊断价值,可用于大山区日本血吸虫病疫区的诊断检测。
- 许宁吴玉龙仇镇宁陈凤李远林方文杨杰冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫病正交试验酶联免疫吸附试验
- 日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区应用效果的评价被引量：9
- 2006年
- 目的评价日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区血吸虫病流行现场的应用效果。方法对云南大山区血吸虫病流行区的506位居民进行粪检,同时用NP30抗体检测法和血吸虫抗体ELISA检测试剂盒(SEA-ELISA)分别对其血清进行检测,评价NP30抗体检测法的敏感性;同时检测非流行区的100份血清确定其特异性。结果NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的粪检阳性符合率分别为87.80%(144/164)和84.76%(139/164);两者的特异性分别为96.00%(96/100)和94.00%(94/100),差异均无显著性(P均>0.05),但在粪孵阴性人群血清样本中,NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的检出率分别为44.15%(151/342)和70.47%(241/342),差异有显著性(P<0.05)。结论NP30抗体检测法可用于云南大山区血吸虫病筛查。
- 吴玉龙许宁仇镇宁陈凤李远林方文杨杰冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫病抗独特型抗体抗体检测
- 钙纳米粒子的制备及表征鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的:制备钙纳米粒子并进行表征鉴定。方法:采用液相沉淀法,在不同温度、缓冲液、液体混合方式下制备钙纳米粒子,并用透射电镜(TEM)、粒度分布仪、X射线能谱仪(XPS)等测试手段对该纳米粒子的结构、大小和形状等进行表征。结果:低温下向柠檬酸钠中匀速缓慢加入等量氯化钙和磷酸氢二钠并搅拌,可得到颗粒状钙纳米粒子,平均粒径260 nm,XPS结果显示其化学成分为磷酸钙。结论:通过液相沉淀法,成功制备了大小、形态较理想的钙纳米粒子。
- 郑金榆蔡振戚晓红李玉华李芸茜王祝鸣冯振卿
- 关键词：沉淀法微结构
- 日本血吸虫多价DNA疫苗免疫保护作用的研究被引量：11
- 2006年
- 目的研究日本血吸虫多价DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法65只BALB/c雌性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别肌肉注射纯化的质粒DNApcDNA3.1(对照组)、pcDNA3.1-TPI(TPI)、pcDNA3.1-(CDR3)6[(CDR3)6]、pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6(TLC)和pcDNA3.1-(CDR3)6-linker-TPI(CLT),每鼠100μg。每隔2周加强免疫1次,共3次。末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45±1)条日本血吸虫尾蚴,45d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2天及感染前2天经尾静脉采血检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1、IgG2a。末次免疫后2周取小鼠脾脏制备单个脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果TPI、TLC组和CLT组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2a/IgG1的比值分别为1.71、2.71和4.70,而其他两组则未检测到特异性IgG抗体;TPI、TLC组和CLT组小鼠的IL-2、IFN-γ较对照组均有不同程度的升高,IL-4则无明显差异。多价DNA疫苗TLC组和CLT组减虫率分别达到37.30%、39.09%,减卵率分别为41.61%、49.54%,均显著高于TPI组和(CDR3)6组(P均<0.05)。结论多价DNA疫苗相对于单价DNA疫苗能诱导小鼠产生较高的免疫保护作用,且诱导宿主产生较高的以Th1为主的免疫应答。
- 王晓婷朱荫昌管晓虹D.A.Harn司进赵松徐明殷旭仁梁幼生何伟
- 关键词：日本血吸虫多价DNA疫苗免疫保护作用
- 日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链(CDR3)_6基因的构建表达及初步鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的设计、构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链(H链)CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6,并对表达产物进行初步鉴定。方法克隆NP30H链(CDR3)6基因,导入PET-28(a)载体并在E.coliBL21中表达;表达产物经纯化后用ELISA方法测定活性。结果(CDR3)6基因被成功构建、表达,表达产物经ELISA检测证实其可与抗NP30抗体NP48及日本血吸虫病人血清反应。结论(CDR3)6部分保留了抗独特型抗体表位的亲和性和特异性。
- 焦永军岳国锋徐玮宋晓彤朱进管晓虹冯振卿
- 关键词：日本血吸虫抗独特型抗体CDR3
- 日本血吸虫多价DNA疫苗的构建及鉴定被引量：13
- 2005年
- 目的构建含日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(TPI)基因和日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30H链CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6的多价DNA疫苗,并观察该融合基因在真核细胞中表达。方法设计合成连接肽(Gly4Ser)3基因的两条互补单链,退火成双链后克隆到真核表达载体pcDNA3.1,改建为pcDNA3.1-linker。分别将SjCTPIDNA片段及NP30的(CDR3)6DNA片段克隆到连接肽的上游或下游,构建pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6和pcD-NA3.1-(CDR3)6-linker-TPI2种多价疫苗。设计引物分别扩增TPI-linker-(CDR3)6和(CDR3)6-linker-TPI,再分别插入真核表达载体pEGFP-N1多克隆位点,绿色荧光蛋白基因的上游,重组质粒用脂质体导入真核细胞COS-7,观察插入基因在真核细胞的表达。结果经双酶切及测序鉴定证实多价疫苗pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6和pcDNA3.1-(CDR3)6-linker-TPI构建成功;构建的pEGFP-N1-TPI-linker-(CDR3)6和pEGFP-N1-(CDR3)6-linker-TPI在导入COS-7细胞后能成功表达。结论日本血吸虫TPI和NP30-(CDR3)6的多价DNA疫苗构建成功,且该融合基因能在真核细胞中表达。
- 王晓婷朱荫昌管晓虹司进赵松D.A.Harn殷旭仁何伟梁幼生徐明
- 关键词：日本血吸虫磷酸丙糖异构酶多价DNA疫苗
- 钙纳米粒子急性毒性及长期毒性试验被引量：5
- 2005年
- 李玉华郑金榆彭韬陈汝炎仇镇宁冯振卿管晓虹
- 关键词：急性毒性长期毒性
