国家自然科学基金(30472035)
- 作品数：14 被引量：51H指数：6
- 相关作者：刘兴汉林雪松王淑静隋丽华季宇彬更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室哈尔滨商业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 肿瘤抑素相关肽抗肿瘤活性研究被引量：4
- 2005年
- [目的]评价肿瘤抑素相关肽19肽和21肽抗肿瘤活性。[方法]已构建好的19肽和21肽重组质粒在大肠杆菌BL-21(DE3)中表达,经几丁质亲和层析柱纯化出19肽和21肽。用SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳对表达及纯化结果进行初步鉴定,进行19肽、21肽和19肽+21肽的腹水型转移型小鼠H22肝癌实体瘤模型大体抑瘤实验,并做组织病理学切片分析。[结果]经一步亲和层析可获得可溶性19肽和21肽。19肽,21肽,19肽+21肽联合用药组在小鼠抑瘤实验中抑瘤率分别达48.46%,42.86%,53.94%。组织病理学切片结果可见3种给药方式都可促进小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少。
- 王淑静付雪徐建永李冀宏陶占华刘远莉刘兴汉
- 关键词：肿瘤抑素蛋白表达蛋白纯化肿瘤
- 重组肿瘤抑素血管生成抑制相关肽对裸鼠移植性卵巢癌的抑制作用被引量：1
- 2008年
- 目的观察肿瘤抑素改造后所得血管生成抑制相关肽（21肽）的抗血管生成活性及对裸鼠移植卵巢癌的抑制作用。方法用亲和层析法纯化21肽。观察接种SKOV，细胞系的裸鼠经21肽治疗后的肿瘤生长情况，检测21肽对肿瘤组织的微血管密度和免疫组织化学指标的影响。结果经21d的治疗后，21肽组平均抑瘤率可达53．17％。21肽组肿瘤组织微血管密度（CD34表达）为6．324±1.643，与对照组（16．127±2．535）比较明显降低（P〈0．05）。21肽组肿瘤组织的增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）呈低表达（P〈0．01），而基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）呈高表达（P〈0．01）。结论21肽具有显著的抗血管生成活性，对卵巢癌具有较好的抑制作用，其抑制卵巢癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。
- 张广美隋丽华贾彤赵育帧付松滨刘兴汉于雁
- 关键词：肿瘤抑素微血管密度
- 小分子肽-肿瘤抑素19肽纯化及抗肿瘤活性研究被引量：5
- 2007年
- 目的:利用已构建好的肿瘤抑素抗肿瘤活性肽-19肽高效表达基因重组菌纯化19肽,并进行抗肿瘤活性检测。方法:经几丁质亲和层析柱纯化出19肽,SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳后用Bradford法测其浓度,进行体内活性检测。结果:19肽可促进H22小鼠肝癌细胞死亡,血管数量减少,抑瘤率达48．46%。结论:得到了具有抗肿瘤活性的肿瘤抑素相关肽—19肽,为肿瘤抑素的作用机制研究和肿瘤的临床治疗奠定了基础。
- 袁丽杰赵恒宇苏晓杰
- 关键词：肿瘤抑素蛋白纯化抗肿瘤活性肿瘤治疗
- 肿瘤抑素抗肿瘤相关肽的克隆及生物活性被引量：7
- 2005年
- 为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性19肽.利用MTT法,细胞生长曲线,小鼠H2 2腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理学切片,研究19肽的生物学活性.获得的19肽对B16小鼠黑色素瘤细胞、人SMMC 772 1肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞的生长均具有抑制作用.小鼠H2 2腹水型肝癌抑瘤率达4 8 4 6 % .病理学切片显示,19肽可促使小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少.19肽具有较强的直接抗肿瘤活性,有可能成为肿瘤治疗的一种新的有前景的药物.
- 王淑静刘岩林雪松付雪徐建永刘兴汉
- 两个改造后的肿瘤抑素抗肿瘤活性肽活性研究被引量：11
- 2007年
- 为了研究改造后的肿瘤抑素2个抗肿瘤活性肽的作用机制,明确其不同的抗肿瘤活性,采用基因工程技术原理,人工合成肿瘤抑素中185～203位氨基酸所对应的19肽和T7肽(74～98位氨基酸)基础上改造的21肽碱基序列,将其与融合蛋白表达载体pTYB2重组后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用几丁质亲和层析柱一步纯化,直接获得19肽和21肽,利用MTT法、细胞生长曲线、TUNEL法、流式细胞仪早期细胞凋亡检测和细胞周期检测,小鼠H22腹水型转移型肝癌实体瘤抑瘤实验并结合组织病理学切片,来研究19肽和21肽单独应用或联合应用对肿瘤细胞和内皮细胞生长和凋亡的影响以及对体内肿瘤的抑制情况.体内外实验表明:获得的19肽抗肿瘤活性以直接作用肿瘤细胞为主,也有抑制新生血管生成的作用.基因重组21肽抗肿瘤作用是通过抑制肿瘤组织新生血管生成实现的.19肽、21肽联合应用对肿瘤细胞、内皮细胞生长抑制和促凋亡作用明显增强,抗肿瘤活性大大提高.联合用药弥补了单独用药不足,产生协同抗肿瘤作用,可能会成为今后肿瘤治疗的一个主要方向.
- 王淑静刘兴汉季宇彬陈宁
- 关键词：肿瘤抑素蛋白质表达细胞增殖细胞凋亡肿瘤治疗
- COX-2在卵巢上皮癌中的表达及其与黏蛋白MUC-1表达相关性的探讨被引量：3
- 2005年
- 目的探讨COX-2及MUC-1在卵巢上皮癌中的表达及临床意义。方法采用SP免疫组织化学方法,对39例卵巢上皮癌、11例良性卵巢上皮瘤和10例正常卵巢组织的石蜡标本作COX-2及MUC-1的检测,并分析卵巢上皮癌的临床病理资料。结果正常卵巢组织COX-2及MUC-1均呈阴性表达,良性卵巢上皮瘤COX-2呈阴性表达,MUC-1呈阳性表达。卵巢上皮癌中有COX-2及MUC-1表达,COX-2在正常卵巢,卵巢良性肿瘤与卵巢恶性肿瘤之间的表达有极显著差异(P<0.01);MUC-1在正常卵巢、卵巢良性与恶性肿瘤之间的表达有极显著差异(P<0.01);卵巢上皮癌与卵巢上皮瘤相比表达呈升高趋势,但无统计学意义(P>0.05);COX-2的阳性表达与卵巢上皮癌的临床分期、组织分化程度及病理类型无关(P>0.05);MUC-1的阳性表达与卵巢上皮癌的临床分期、组织分化程度及病理类型有关(P<0.05);COX-2及MUC-1的阳性表达与卵巢上皮癌的预后有关(P<0.05);⑷COX-2及MUC-1在卵巢上皮癌中的表达呈一致性相关,二者表达无显著性差异(P>0.05),具有相关性(P=0.012)。结论COX-2及MUC-1可能是卵巢上皮癌发生的相关基因,与肿瘤的发展及转移有关,检测COX-2及MUC-1可以估计卵巢上皮癌患者的预后,辅助指导临床化疗。
- 杨秋云赵敬河江玉红林雪松马荣隋丽华
- 关键词：卵巢肿瘤免疫组织化学预后
- 肿瘤抑素相关肽T42对人脐静脉内皮细胞和人胃腺癌细胞的抑制作用被引量：4
- 2007年
- 目的:观察大肠杆菌内表达的pTYB2-T42重组质粒经纯化后获得的肿瘤抑素相关肽T42,在体外对人脐静脉内皮细胞及肿瘤细胞的抑制作用。方法:实验于2006-06/11在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。在大肠杆菌中表达肿瘤抑素相关T42肽并用几丁质亲和层析纯化。采用四甲基偶氮唑盐比色法研究10～200mg/L肿瘤抑素相关肽T42、T19、T21、T19+T21半量联合和顺铂对人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞生长的影响,采用苏木精-伊红染色检测40mg/LT42肽作用24h后对细胞形态的影响,划痕修复实验研究40mg/LT42肽和40mg/L的T19肽+T21肽半量联合分别作用24,48h后对细胞迁移的影响。结果:①四甲基偶氮唑盐试验表明10～200mg/LT42肽对人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞有明显抑制作用且呈剂量依赖性,IC50分别为45mg/L和51mg/L。②40mg/LT42肽作用24h后可见人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃癌细胞单个凋亡细胞与周围细胞分离,细胞皱缩呈圆形或卵圆,深染,染色质边集。③40mg/L的T42肽单独作用24h或者48h均可明显抑制人脐静脉内皮细胞、人SGC-7901胃癌细胞的迁移(P<0.05),与40mg/L的T19肽+T21肽半量联合组比较对两种细胞的迁移能力没有显著影响(P>0.05)。结论:T42肽能抑制人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞的生长及迁移,其抗肿瘤细胞作用强于T21肽,抑制内皮细胞增殖作用强于T19肽,抑制细胞增殖活性与T19肽+T21肽半量联合用药基本相同。
- 栗亚刘兴汉林雪松马洪星张宇雯李冀宏刘远莉李丹
- 关键词：肿瘤
- 肿瘤抑素抗血管活性相关肽对宫颈癌Hela细胞生长和转移抑制作用的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究改造后的血管生成抑制相关肽(21肽)抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制。方法2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后,处死动物剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率。免疫组化方法检测21肽对肿瘤组织的微血管密度(MVD)、增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果21肽组平均抑瘤率可达51.89%,肿瘤组织微血管密度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);21肽组肿瘤组织的PCNA、VEGF呈低表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论21肽具有显著的抗血管生成活性,可明显地抑制裸鼠宫颈癌细胞的生长,其抑制宫颈癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。
- 张广美隋丽华郑建华赵育帧刘兴汉
- 关键词：宫颈癌肿瘤抑素血管内皮细胞生长因子微血管密度
- 肿瘤抑素抗血管活性相关肽的表达及活性研究被引量：9
- 2005年
- 目的利用大肠杆菌表达系统表达肿瘤抑素抗血管活性相关肽-21肽,检测其生物学活性。方法人工合成21肽基因序列(肿瘤抑素75～95位氨基酸),克隆到表达载体pTYB2上,转化大肠杆菌BL-21(DE_3),酶切和测序鉴定后,用IPTG诱导表达融合蛋白。经几丁质亲和层析柱纯化21肽。通过MTT实验,细胞生长曲线测定,小鼠肝癌转移瘤模型的大体抑瘤实验及组织病理学切片研究其活性。结果获得的可溶性21肽对人脐静脉内皮细胞的生长具有抑制作用。小鼠肝癌转移瘤模型的大体抑瘤实验抑瘤率达42.86%。组织病理学切片结果可见H22小鼠肝癌细胞死亡,血管数量减少。结论经初步检测获得具有抗血管活性的21肽,为进一步研究肿瘤抑素的作用机制和肿瘤的临床治疗奠定了基础。
- 付雪王淑静林雪松刘兴汉
- 关键词：肿瘤抑素蛋白表达蛋白纯化
- 肿瘤抑素19肽诱发人肿瘤细胞HepG2凋亡机制研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究肿瘤抑素19肽(T19肽)对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用并探讨其作用的分子机制,为临床联合应用抗肿瘤药物提供理论依据。方法采用亲和层析的方法提取T19肽,分离纯化后经Tricine-SDS-PAGE鉴定T19肽。MTT比色实验测定T19肽对肝癌细胞的半数抑制浓度。HE染色、AO/EB实验验证T19肽促进细胞凋亡的作用。流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化,Western blot检测细胞色素C(Cyt C)从线粒体到胞浆的易位情况。结果 T19肽对肝癌细胞HepG2有一定的抑制作用并呈剂量依赖的方式。T19肽降低了线粒体膜电位,引起Cyt C从线粒体释放到胞浆。结论 T19肽通过线粒体途径引起肝癌细胞HepG2凋亡。
- 徐晖刘兴汉
- 关键词：凋亡线粒体细胞色素C
