重庆市自然科学基金(2006BB5035)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：许峰王昱卢仲毅朱宇熹方芳更多>>
- 相关机构：重庆医科大学第三军医大学西南医院重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高氧暴露对早产鼠AECⅡ生长增殖的影响及CGRP的干预作用被引量：10
- 2009年
- 目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对600 mL/L氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)生长增殖的影响.方法:原代分离培养孕19 d早产鼠AECⅡ,随机分为4组:空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组.空气组,高氧组分别在氧体积分数为210 mL/L的空气和600 mL/L的氧气中暴露24 h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP;高氧CGRP拮抗剂组在暴露前同时加入CGRP和CGRP受体拮抗剂,再置于氧体积分数为600 mL/L的氧气中培养24 h.采用MTT比色法和流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光技术测定表面活性蛋白C(SPC)的mRNA及蛋白表达.结果:与空气组比较,高氧组细胞存活率下降,G0/G1期细胞比例增高,G2/M及S期细胞比例降低,SPC mRNA及SPC蛋白表达低下(P均<0.01).而CGRP干预可促进高氧暴露AECⅡ的增殖能力,使S及G2/M期细胞增多,并提高AECⅡ的SPC mRNA及SPC蛋白表达水平.结论:600 mL/L氧暴露24 h可抑制早产鼠AECⅡ增殖分化,而CGRP可促进AECⅡ生长,部分解除高氧对AECⅡ的抑制作用.
- 付红敏许峰黄波方芳黄栋匡凤梧
- 关键词：高氧早产
- hOGG1基因高表达A549细胞株的构建及其对氧化应激的影响
- 2010年
- 目的 构建人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶（hOGG1）基因高表达细胞株,并初步探讨该细胞株对DNA氧化损伤与修复作用的影响.方法 提取人血液淋巴细胞总RNA,设计hOGG1特异性引物,RT-PCR扩增后构建pcDNA3.1（＋）/Myc-His A/hOGG1载体.经EcoRI和KpnI酶切,凝胶电泳及DNA测序证实建立成功后,稳定转染A549细胞,Western blot法检测转染阳性细胞hOGG1蛋白表达的改变.以构建的hOGG1基因高表达细胞株为研究对象,H2O2为受试物,彗星试验检测比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况.结果 成功构建pcDNA3.1（＋）/Myc-His A/hOGG1质粒并转染目的 细胞,Western blot法检测转染靶细胞中hOGG1蛋白表达比空白组和阴性对照组明显增加（P〈0.05）.相同H2O2浓度下,转染细胞彗星细胞率和Olive Tail Moment明显低于空白组和阴性对照组,且修复完成率高,修复时间缩短（P〈0.05）,提示细胞对抗DNA损伤和修复能力均显著增高P〈0.05）.结论 hOGG1基因的高表达可确切减轻细胞氧化损伤敏感性并提升DNA的修复能力.hOGG1基因高表达细胞株的成功构建,为基因水平的靶向治疗研究提供了一种有效手段.
- 王昱卢仲毅许峰朱宇熹
- 关键词：真核表达载体彗星试验DNA修复
- DNA氧化损伤修复基因hOGG_1高表达细胞株的建立被引量：3
- 2010年
- 目的联合pcDNA3.1(+)/Myc-HisA-hOGG1和pGL3promoter荧光质粒稳定转染人肺腺癌A549细胞获得hOGG1基因高表达细胞株,并初步探讨转染细胞生物学特性的变化。方法成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A载体后,大量抽提阳性重组子并在Fu GENE6的介导下联合pGL3promoter荧光质粒转染A549细胞(转染组),同时设空白对照组(A549)和阴性对照组[PGL3+pcDNA3.1(+)/Myc-HisA转染的A549细胞]。生物荧光检测转染细胞hOGG1mRNA表达的改变,蛋白质免疫印迹法检测转染细胞hOGG1蛋白表达水平。将3组细胞于不同高氧条件下培养,相差显微镜观察形态学变化,彗星试验比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况,同时测定DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的变化。结果转染细胞荧光素酶稳定表达,蛋白印迹检测转染组hOGG1蛋白明显高于两对照组细胞,提示hOGG1基因高表达细胞株建立成功。相同高氧条件下,转染组形态学变化明显减轻,彗星细胞率和olive tail moment明显低于空白组和阴性对照组,修复完成率高,修复时间缩短(P<0.05),测定氧化损伤标志物8-OHdG明显下降,提示细胞对抗DNA损伤和修复能力均增高(P<0.05)。结论 hOGG1基因的高表达可减轻细胞对DNA氧化损伤的敏感性,提升细胞DNA的修复能力。
- 王昱卢仲毅许峰朱宇熹
- 关键词：共转染彗星试验DNA损伤修复
