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国家高技术研究发展计划(2007AA10Z186)

作品数：18 被引量：116H指数：6
相关作者：梁利群常玉梅刘春雷池炳杰刘金亮更多>>
相关机构：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所上海海洋大学中国科学院更多>>
发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
相关领域：农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 18篇中文期刊文章

领域

  • 10篇农业科学
  • 8篇生物学

主题

  • 4篇基因
  • 3篇对转
  • 3篇性腺
  • 3篇性腺发育
  • 3篇生长激素基因
  • 3篇微卫星
  • 3篇激素基因
  • 2篇毒性
  • 2篇毒性分析
  • 2篇雅罗鱼
  • 2篇银鲫
  • 2篇食用安全
  • 2篇转基因鱼
  • 2篇微卫星分子标...
  • 2篇稀有
  • 2篇小发夹RNA
  • 2篇饥饿
  • 2篇发夹
  • 2篇分子标记
  • 2篇RNA干扰

机构

  • 14篇中国水产科学...
  • 11篇上海海洋大学
  • 4篇中国科学院
  • 2篇武汉大学
  • 2篇天津市疾病预...
  • 2篇中国科学院研...
  • 2篇河北联合大学
  • 1篇黑龙江生物科...

作者

  • 14篇梁利群
  • 11篇常玉梅
  • 7篇刘春雷
  • 6篇徐丽华
  • 6篇池炳杰
  • 6篇刘金亮
  • 5篇闫学春
  • 4篇汪亚平
  • 4篇朱作言
  • 4篇曹顶臣
  • 3篇廖兰杰
  • 3篇韩启霞
  • 3篇高国强
  • 3篇孙效文
  • 2篇钟山
  • 2篇王静
  • 2篇罗大极
  • 2篇王晓军
  • 2篇吴学工
  • 1篇葛彦龙

传媒

  • 4篇水产学杂志
  • 3篇中国水产科学
  • 3篇水生生物学报
  • 2篇华北农学报
  • 1篇生态学报
  • 1篇食品科学
  • 1篇遗传
  • 1篇湖南农业科学
  • 1篇应用生态学报
  • 1篇吉林农业大学...

年份

  • 1篇2012
  • 8篇2011
  • 7篇2010
  • 2篇2009
共 18 条 记 录，以下是 1-10
全选 清除 导出
排序方式：
小发夹RNA在稀有鮈鲫胚胎中的表达被引量：1
2010年
由小的干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来快速发展的一种转录后基因沉默方法,已被广泛的应用于基因功能的研究,基因网络调控的探讨以及疾病的治疗等方面。多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶Ⅲ启动子中的一种,操纵一段短发夹结构RNA(Small hairpin RNA,shRNA)在细胞或体内表达。这一类启动子主要包括人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子等。为了探明鱼类自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子是否能有效驱动shRNA在鱼体内表达,从而更好地利用RNAi进行鱼类基因功能和抗病毒研究,研究利用斑马鱼的H1和U6启动子以及草鱼的H1启动子,以草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)外衣壳蛋白VP7基因为靶基因,以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,分别构建了三个shRNA表达载体:pZH1siGCRV-CMVeGFP、pZU6siGCRV-CMVeGFP和pCH1siGCRV-CMVeGFP。通过显微注射将三种表达载体分别导入稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)受精卵中。由于siRNA片段很短,其表达检测非常困难,研究采用stem-loop RT-PCR方法,对稀有鮈鲫胚胎发育不同时期的shRNA表达进行了检测。研究结果表明,采用的三种鱼类自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子均能有效驱动GCRVsiRNA的表达;在取样的各个胚胎发育时期均能检测到GCRV siRNA的表达;stem-loop RT-PCR方法可以便捷检测siRNA的表达。研究构建的鱼类胚胎siRNA有效持续表达载体,建立的简易快捷siRNA检测方法,为进一步的抗GCRV转基因鱼研制以及siRNA的病毒复制干扰机制研究奠定了重要基础并提供有力的技术支撑。
杨琳汪亚平廖兰杰朱作言
关键词：RNA干扰小干扰RNA小发夹RNA草鱼出血病病毒
营养条件对转生长激素基因鲤生长和性腺发育的影响
2011年
运用形态学和组织学方法对转生长激素基因鲤在不同营养条件下的生长、饲料占有情况和性腺发育进程进行了研究。结果表明:正常投饲营养充分的池塘中转基因鲤与对照鲤的体重增长率分别是99.6%和68.2%;而在半饥饿饲料短缺池塘中的转基因鲤和对照鲤体重增长率分别为51.3%和49.8%。说明正常投喂饲料条件下转基因鲤的生长速度明显快于对照鲤;半饥饿饲料短缺条件下转基因鲤的体重增长速度与对照鲤无显著性差异。在7、8、9月份,对不同时期性腺发育状况检验结果表明,饲养在不同营养条件下的两种鱼的雌、雄性腺发育速度不同,但差异均不显著(p>0.05)。
刘春雷徐丽华常玉梅梁利群刘金亮池炳杰吴学工
关键词：营养条件性腺发育
东北雅罗鱼微卫星分子标记的筛选及特征分析被引量：17
2011年
通过磁珠富集法筛选东北雅罗鱼的微卫星分子标记。采用限制性内切酶Sau 3AI对东北雅罗鱼基因组DNA进行酶切,选取400～900 bp的片段进行PCR全基因组扩增,并利用生物素标记的(CAG)8、(TGA)8、(AGAT)6、(GATT)6 4个探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段与T载体连接后转入DH5α大肠杆菌中,然后以SaulA为引物对长出的菌落进行PCR扩增,挑取扩增后片段大小符合条件的菌落送生物公司测序。结果表明:1 416个阳性克隆中有1 047个克隆含有重复次数大于5次的微卫星序列,完美型占67.99%,非完美型为15.31%;混合性标记占16.70%。从中选出160个微卫星序列设计105对引物并合成,经过筛选,56对引物可扩增出清晰条带,其中23对具有多态性。选取18对多态性引物对达里湖东北雅罗鱼群体进行扩增,结果显示等位基因数为3～11,多态信息含量(PIC)为0.207 7～0.882 0,67%(12对/18对)的位点处于高度多态水平(PIC>0.5)。
刘金亮常玉梅徐丽华刘春雷梁利群韩国苍高玉奎柳玉海
关键词：东北雅罗鱼微卫星磁珠富集
转大麻哈鱼生长激素基因鲤食用安全——生殖毒性分析
2011年
以转大麻哈鱼生长激素基因鲤和普通鲤鱼肉(受试物)作为小鼠的饲料基础蛋白成分,以10%、5%、2.5%的比例掺入饲料喂饲小鼠,并以常规大鼠饲料为阴性对照,采用二代繁殖试验法观察受试物对实验动物生殖周期全过程的影响,检测转基因鲤作为食物对实验动物小鼠生殖过程的毒性作用。结果表明,对各代各剂量组试验小鼠全部生殖毒性指标的检测结果,虽然有单项指标出现统计学差异,但未见其生物学意义,未见与喂饲转基因鲤相关的异常改变。经对出现统计学差异的各单项检测指标进行统计学和生物学意义分析,对转基因鲤(阳性)各组、普通鲤(阳性对照)各组、阴性对照组各指标综合观察,未发现转基因鲤对二代雌、雄性别小鼠有生殖毒性作用。
梁利群王静常玉梅王晓军闫学春曹顶臣孙效文
关键词：食用安全生殖毒性
扁吻鱼微卫星分子标记的筛选及特征分析被引量：4
2012年
通过磁珠富集法筛选扁吻鱼的微卫星分子标记。利用限制性内切酶Sau3AI对扁吻鱼的基因组DNA进行酶切,并选取片段大小在250～750 bp间的片段,利用PCR技术进行全基因组扩增,采用生物素标记的(CA)8探针对微卫星片段进行富集。富集后的片段与T载体连接后利用DH5α大肠杆菌进行转化,然后以Sau3AI为引物对菌落进行PCR扩增,扩增后选片段大小符合条件的菌落挑取至测序板,进行测序。结果表明:PCR筛选共获得563个阳性克隆,其中测序192个阳性克隆后发现有53个微卫星序列;序列分析表明,完美型占67.92%,非完美型为22.64%;混合性标记占9.43%。根据测序结果设计微卫星引物24对,经PCR扩增筛选,琼脂糖凝胶电泳结果显示,其中22对引物可扩增出清晰的条带,其中具有多态性的13对。利用13对多态性引物对扁吻鱼野生群体进行扩增,PCR扩增结果显示,等位基因数为3～6,多态信息含量(PIC)为0.625 3,12个位点处于高度多态水平(PIC>0.5)。
郝卓然梁利群常玉梅任波
关键词：扁吻鱼微卫星分子标记
两种不同终止子在转基因鲤鱼中的促生长效应被引量：4
2009年
转基因构建体中启动子的选择会直接影响转植基因的活性,近年来有研究表明转基因构建体中终止子的选择会一定程度地影响转植基因的活性。为了更好地筛选转基因构建体和培育快速生长的转"全鱼"生长激素(Growth hormone,GH)基因鱼,文章用鲤鱼β-actin基因终止子和生长激素基因终止子分别构建了转基因构建体,显微注射得到转"全鱼"GH基因鱼P0代养殖群体,比较两种不同终止子构建体的活性。统计分析发现,生长激素基因终止子构建体的养殖群体的体重频率呈正态分布且平均体重显著高于β-actin基因终止子构建体的养殖群体,β-actin基因终止子构建体的养殖群体的体重频率呈右倾趋势的非正态分布。值得一提的是在混合养殖组中得到一条生长最为快速的鲤鱼证实为转基因阳性且为生长激素基因终止子构建体的转基因鲤鱼。该结果表明转"全鱼"生长激素基因鲤鱼可快速生长,并能将转植基因向下代遗传。实验结果提示生长激素基因终止子构建体比β-actin基因终止子构建体表现的促生长活性要强。
钟山罗大极吴刚徐婧汪亚平朱作言
关键词：生长激素基因转基因鱼终止子
饥饿对转基因鲤与野生鲤生长竞争和性腺发育的影响
2010年
为研究转大麻哈鱼(Oncorhynchus keta)生长激素基因鲤(转基因鲤)在不同食物含量条件下的生长竞争(主要是生长、生殖),实验设定两个实验组,分别为正常投饲组和半饥饿实验组,每组的饲养池大小相同、混养的转基因鲤和对照鲤初始总体重相等。连续3个月定期采样后,处理数据并拟合体重体长方程,从形态学和组织学入手对转基因鲤和对照鲤(Cyprinus carpio)的生长状况、饲料占有情况和性腺发育状况开展研究。结果表明,正常投饲组的转基因鲤和对照鲤体重相对增长率分别为127.9%和70.6%,而半饥饿实验组的转基因鲤、对照鲤的体重相对增长率分别是72.3%和52.2%,表明无论在饱食还是在饲料短缺情况下,转基因鲤显示出快速生长的优势;通过比较两组转基因鲤和对照鲤的肠道充塞度,发现正常投饲组的转基因鲤和对照鲤的肠道食物充塞度差异不显著(P>0.05),半饥饿组中的两种鱼的肠道食物充塞度差异不显著(P>0.05),但是转基因鲤的肠长/体长比大于对照鲤,差异显著(P<0.05),表明转基因鲤可能对饲料具有较强的消化、吸收能力;总体来看,两组实验鱼的性腺发育进程无明显差异(P>0.05),但在部分月份转基因鲤和对照雌、雄鲤的相对性腺重差异显著(P<0.05),无论在饱食还是在半饥饿情况下,转基因鲤的性腺发育情况略好于对照鲤。
刘春雷常玉梅梁利群徐丽华刘金亮闫学春
关键词：性腺发育
AFLP技术的优化及在三倍体银鲫DNA指纹图谱中的应用被引量：3
2010年
扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)技术具有多态性丰富,所需DNA量少,灵敏度高等优点,但流程繁琐,花费时间长。本文根据AFLP技术的特点,在酶切-连接和聚丙烯酰胺凝胶的制备,这两方面做了很大改进。采用优化的AFLP技术分析三倍体银鲫的DNA指纹图谱,不仅缩短了实验所需时间,而且获得了稳定清晰的扩增带型。
韩启霞高国强刘春雷徐丽华池炳杰梁利群
关键词：AFLP标记聚丙烯酰胺凝胶电泳银鲫
两种鲤鲫杂交回交子代染色体核型分析及比较被引量：3
2011年
采用PHA和秋水仙素体内注射制备两种鲤鲫杂交回交子代鱼(鲤鲫杂交♀×德国镜鲤♂;鲤鲫杂交♀×鲤♂)的染色体。结果表明:两种鲤鲫杂交回交子代染色体组由150条染色体组成,按着丝粒位置染色体组型可分为四组,每个染色体小组均由三条同源染色体组成。其中鲤鲫杂交♀×鲤♂回交的染色体数目为3n=150,染色体臂数NF=234,其核型公式为:3n=60m+24sm+36st+30t;鲤鲫杂交♀×德国镜鲤♂回交染色体数目为3n=150,染色体臂数NF=258,其核型公式为:3n=63m+45sm+12st+30t。
闫学春梁利群葛彦龙
关键词：德国镜鲤远缘杂交回交子代染色体
饥饿状态下转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素的表达研究被引量：2
2009年
研究采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)技术,比较分析了转GH基因鲤鱼和对照鲤鱼在饥饿和饱食状态下血清生长激素水平的变化规律,并探讨其可能机制。实验结果表明,在投喂实验中,转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素水平均无明显变化,但转基因鲤鱼血清生长激素远高于对照鲤鱼,分别为(142.0±4.9)ng/mL和(1.6±0.2)ng/mL,转基因鲤鱼体重增长速率显著高于对照鱼。在饥饿实验中,转基因鲤鱼的血清生长激素迅速下降,从(142.0±4.9)ng/mL降至(46.0±3.2)ng/mL,而后稳定在这一较低水平;对照鲤鱼血清生长激素持续上升,从(1.6±0.2)ng/mL升至(10.9±1.4)ng/mL,体重负增长速率没有显著差异。研究结果提示,转GH基因鲤鱼血清生长激素的调控机制与对照鲤鱼的不同,其表达水平不受脑垂体反馈抑制调控机制的影响,而与重组GH基因中β-actin基因启动子的调控模式相关。
钟山罗大极汪亚平陈竹管波廖兰杰朱作言
关键词：生长激素饥饿ELISA
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