黑龙江省自然科学基金(C201110)
- 作品数：5 被引量：28H指数：4
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- 钙离子在介导SA诱导白桦悬浮细胞三萜合成途径中的作用被引量：10
- 2014年
- 为探讨Ca2+作为信号分子在水杨酸(SA)诱导白桦悬浮细胞三萜合成中的作用,本文用SA、Ca2+及Ca2+阻断剂对白桦悬浮细胞进行处理,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定细胞中总三萜及其组分的积累量;同时利用荧光定量PCR方法检测了白桦细胞中三萜合成途径关键酶基因(FPS、SS、SE、BPW、BPY、CAS)和钙调蛋白基因表达变化。结果显示:水杨酸可诱导白桦悬浮细胞三萜物质(总三萜、齐墩果酸、白桦脂醇、白桦脂酸)的合成及相关基因的上调表达,且Ca2+的加入使得这种诱导效应更为显著,暗示白桦细胞中钙信号分子介导了水杨酸诱导三萜物质的合成。而对SA与各种Ca2+阻断剂互作处理结果显示,Ca2+抑制剂的加入抑制了SA对细胞中三萜合成的诱导效果,表明Ca2+作为信号分子介导了SA诱导白桦悬浮细胞三萜物质的合成。
- 王艳尹静马泓思詹亚光苏欣梁甜张梦岩
- 关键词：白桦关键基因钙调蛋白
- Ca^(2+)在介导MeJA诱导白桦悬浮培养三萜合成中的作用被引量：6
- 2015年
- 以白桦细胞为试材,通过在悬浮培养第七天进行Me JA、Ca Cl2及其互作处理,研究Ca2+在Me JA诱导白桦三萜合成中的作用。结果表明,Me JA处理后显著促进白桦细胞中总三萜和齐墩果酸的合成,分别于48 h达到最高积累量46.90和1.31 mg·g-1。Me JA+EGTA和Me JA+La Cl3·7H2O处理,均降低了Me JA对三萜合成的促进作用,仍显著高于对照。抗逆酶结果显示,Ca Cl2和Me JA+Ca Cl2处理均不同程度的提高了CAT、PAL和APX的活性,而SOD的活性则受到Ca2+的抑制;两种钙离子抑制剂加入后显著影响抗逆酶的活性。Me JA处理早期(2 h),三萜途径各关键酶基因FPS、SS、SE、BPW、BPY显著上调表达。Me JA+La Cl3·7H2O处理早期(2 h)除BPW降低外,BPY、BPX2、SS和SE表达量均高于Me JA单独处理;而同Me JA处理相比,Me JA+EGTA处理2 h,BPW、BPX2、SS、SE和FPS表达量均下调。暗示Ca2+参与了Me JA诱导白桦防御系统启动和三萜物质合成,但两种Ca2+抑制剂EGTA和La Cl3在三萜合成中的作用效果和机制存在差异。
- 马泓思潘亚婕王艳尹静詹亚光赵微张梦岩梁甜
- 关键词：白桦MEJA三萜化合物CA2+
- 白桦植株中三萜前体及不同三萜分支产物积累特征被引量：7
- 2013年
- 目的 以三年生白桦为试材，研究白桦植株中三萜合成前体及其三萜组分积累变化，并对白桦植株中三萜组分积累消长特征进行分析。方法 利用高效液相色谱仪及紫外分光光度计对白桦枝皮和叶进行总三萜、白桦脂醇和黄酮等8种成分检测。结果 白桦植株枝皮和叶中三萜物质各组分积累特征显著不同。在生长季节（5～9月）枝皮中2, 3-氧化角鲨烯、白桦脂酸、白桦脂醇、齐墩果酸、达玛烯二醇、固醇及总三萜积累高峰基本为7～9月，其中2, 3-氧化角鲨烯量较低，最高为0.067 mg/g（7月），白桦脂酸量达8.34 mg/g，而齐墩果酸量高达37.51 mg/g（9月）；达玛烯二醇量最高为14.18 mg/g，总三萜量达168.17 mg/g（7月）。叶中总三萜量为8月份较高，达126.11 mg/g，而2, 3-氧化角鲨烯、白桦脂醇和齐墩果酸量均极低，甚至未能检测到。枝皮和叶片中黄酮积累高峰分别为5月和8月，其中2个月份质量分数分别为53.02 mg/g和58.49 mg/g。消长分析表明，白桦枝皮和叶中三萜组分积累与总三萜积累规律不相吻合，枝皮总三萜、达玛烯二醇、齐墩果酸、白桦脂酸呈S型曲线，白桦脂醇积累呈倒“V”曲线，且黄酮积累与总三萜积累趋势相反。叶中总三萜和黄酮物质积累趋势相近，达玛烯二醇和2, 3-氧化角鲨烯积累趋势相近。结论 明确了三年生白桦枝条和叶片中三萜及黄酮物质积累、分布特征，为白桦枝条皮和叶中三萜资源的挖掘、可持续利用及代谢调控奠定了基础。
- 苏欣尹静孙建广詹亚光马泓思王艳梁甜
- 关键词：白桦次生代谢总三萜白桦脂酸
- 温度胁迫对白桦悬浮细胞中三萜积累及防御酶活性的影响被引量：7
- 2013年
- 以白桦悬浮培养细胞为试材,悬浮培养第7d进行高温(50℃热处理1h)和低温(4℃冷胁迫3h)胁迫处理,此后不同时间(0h～7d)收获白桦细胞,研究细胞干重、三萜积累及防御酶活性的变化。研究结果表明,高温和低温胁迫后均表现在24h～3d收获细胞显著促进了白桦总三萜的合成,且以高温处理效果最佳,48h收获细胞时分别比对照(25℃)和冷胁迫处理提高36.4%和12.87%;而在冷胁迫处理后4d～7d表现显著刺激了总三萜的合成,其中在第7d总三萜的含量比对照增加了22.1%,且两温度胁迫处理后15h～4d显著促进了齐墩果酸三萜的积累,24h收获时,热处理和冷胁迫均比对照提高38.1%和39.65%。两温度胁迫后不同程度促进了超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸裂解酶(PAL)、过氧化物酶(POD)活性提高及丙二醛的积累,但各酶活性出现高峰及变化规律存在差异,明确各酶相互协调、补充是保证细胞适应温度胁迫,减轻自由基伤害,并促进次生产物合成的原因。
- 赵微尹静詹亚光任春林王艳马泓思苏欣
- 关键词：温度胁迫防御酶
- 白桦环阿齐醇合成酶(CAS)基因与达玛烯二醇合成酶(DS)基因的双基因RNA干扰载体构建被引量：3
- 2015年
- 环阿齐醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)和达玛烯二醇合成酶(Dammarenediol synthase,DS)为白桦三萜合成过程分支途径关键酶基因,对CAS和DS基因的抑制或沉默将有利于三萜前体-2,3氧化角鲨烯向目标产物白桦脂醇和齐墩果酸合成。利用同源序列PCR方法及pRNAi-GG新型载体,进行DS单基因RNAi及DS与CAS双基因RNAi载体的构建。结果显示,分别克隆获得CAS和DS c DNA序列长度为300和509 bp,Blast同源序列比对与已知日本白桦BPX1和OSCBPD相似度为100%和92%。依据基因RNAi引物设计及pRNAi-GG使用原则,分别将CAS、DS的正向片段和反向片段有序地连接到pRNAi-GG载体PDK内含子两侧,并转化大肠杆菌Trans1-T1中,经PCR及克隆测序验证,获得白桦DS单基因和CAS、DS双基因干扰载体,并通过三亲杂交方法分别获得含有两个RNAi载体的工程农杆菌菌株。该研究为进一步通过基因工程手段阻断白桦三萜分支途径及促进前体物质向目标产物白桦酯醇和齐墩果酸方向合成奠定了基础。
- 梁甜马泓思尹静詹亚光张梦岩
- 关键词：白桦RNA干扰载体
