国家自然科学基金(81272444)
- 作品数：7 被引量：33H指数：4
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- 1型糖尿病、2型糖尿病及2型糖尿病伴动脉硬化患者外周血白细胞端粒长度的研究被引量：11
- 2016年
- 目的:检测1型糖尿病(T1DM)、2型糖尿病(T2DM)、2型糖尿病伴动脉硬化(DAS)患者外周血白细胞端粒长度,分析糖尿病患者端粒长度变化的因素。方法:选择T1DM患者30例、T2DM患者60例、DAS患者40例和健康对照(NC组)40例,分别提取外周血白细胞,然后提取基因组DNA进行real-time PCR检测端粒长度。利用多元线性回归分析影响端粒长度变化的因素。结果:T1DM组、T2DM组和DAS组的端粒长度均小于NC组(P<0.05);T1DM组端粒长度短于T2DM组和DAS组;DAS组较T2DM组更短。多元线性回归分析显示,T1DM组中,年龄与端粒长度呈负相关(P<0.05);T2DM组中,年龄、体重指数(BMI)与端粒长度呈负相关(P<0.05);DAS组中,患病时间、BMI与端粒长度呈负相关(P<0.05)。结论:糖尿病患者的外周血白细胞端粒长度明显短于正常人,并且T1DM患者端粒长度短于T2DM;在2型糖尿病的对比中,DAS患者的端粒长度明显短于T2DM。患者的年龄、患病时间、BMI与端粒长度的缩短有密切的关系。
- 王建飞董旭张毅曹丽曹若琼孙阳阳王建国钟理王君边志颖
- 关键词：端粒长度糖尿病动脉硬化
- 应用改进的多聚组氨酸标签T7表达载体构建肺癌cDNA文库被引量：1
- 2013年
- 应用噬菌体C端展示系统构建的cDNA文库缺乏开放阅读框筛选机制,文库中多数噬菌体克隆展示框外非天然短肽,给后期蛋白质的筛选带来了不便.为实现噬菌体的ORF筛选功能,利用PCR技术对已有载体T7Select10-3b进行改造,在MCS处外源cDNA插入位点的3'端引入6聚组氨酸筛选标签,经包装后挑取成功表达的单克隆构建肺癌cDNA文库.经镍柱亲和层析后,收集文库中表达组氨酸的克隆,利用化学发光免疫试验进行筛选效果鉴定.结果显示,改造的新型载体可成功表达组氨酸标签,以此构建的肺癌cDNA文库经筛选后,含ORF插入的克隆由筛前的6%提高至70%,本研究为提高cDNA文库的质量提供了一种简便可行的方法.
- 董晓民钟理樊江平张旭朏
- 关键词：组氨酸标签开放阅读框
- T7噬菌体表达载体的组氨酸改造及应用
- 2013年
- 利用基因重组技术,对已有载体T7 Select10-3b进行改造,得到被组氨酸标签标记(His-Tag)的新型表达载体,并利用该载体构建cDNA文库,为后期开放阅读框的筛选提供更为简便有效的方法。以T7 Select10-3b载体为出发材料,将复性得到组氨酸标签表达序列插入其多克隆位点处。再利用包装蛋白包装重组DNA,得到有侵染活性的重组T7噬菌体。用该载体构建乳腺癌cDNA文库,过镍柱,筛选开放阅读框(open reading frame,ORF),计算ORF重组率。测序结果显示该标签已经成功插入,化学发光免疫检测显示该标签在T7中表达。重组T7噬菌体文库的ORF筛选率由筛选前的5.6%提高到82%。T7噬菌体中插入的His标签对提高cDNA文库中ORF的重组率具有重要意义。
- 樊江平钟理董晓民张旭朏王志强
- 关键词：CDNA文库ORF
- 非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察被引量：7
- 2016年
- 目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。
- 曹丽孙阳阳曹若琼张毅王建飞钟理
- 关键词：蛋白激酶基因非小细胞肺癌
- 肺癌T7噬菌体文库中MUC1蛋白抗原模拟表位的筛选被引量：6
- 2016年
- 目的利用噬菌体表面展示技术,从肺癌T7噬菌体展示文库中筛选MUC1蛋白抗原的模拟表位。方法以MUC1单克隆抗体为靶分子,对肺癌T7噬菌体文库进行淘洗筛选,得到的阳性克隆进行测序并推导其氨基酸序列,对得到的阳性噬菌体克隆进行鉴定。结果经3轮淘选,得到20个阳性克隆。测序获得AAPDFRP、SAPDDRP 2种氨基酸序列,对MUC1单抗的抑制率均在50%以上,与肺癌血清结合特异性较高,此2种蛋白序列可模拟MUC1蛋白抗原表位。结论通过噬菌体展示技术成功筛选到MUC1蛋白的模拟表位序列XAPDXRP(X为任意氨基酸),对肺癌的早期诊断有一定的参考价值。
- 邱宇曹丽郝晓宁王建飞董旭祖金池钟理丁浩
- 关键词：肺癌模拟表位噬菌体文库
- 埃克替尼片治疗ⅢA-N2期非小细胞肺癌的临床研究被引量：4
- 2018年
- 目的观察埃克替尼片治疗ⅢA-N2期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效及安全性。方法将56例ⅢA-N2期NSCLC患者随机分为对照组28例和试验组28例。对照组予以60~75 mg·m^(-2)多西他赛,1周1次,静脉滴注,或500 mg·m^(-2)培美曲塞,每3周1次,静脉滴注;试验组予以埃克替尼片125 mg,tid,口服。2组患者均治疗至疾病进展或药物不良反应不能耐受时停药。比较2组患者的临床疗效、外周血树突状细胞亚群,以及药物不良反应的发生情况。结果治疗后,试验组和对照组的客观缓解率分别为89.29%(25例/28例)和71.43%(20例/28例),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组和对照组的树突状细胞(DC)计数分别为(15.44±2.08)和(12.83±1.71)×10~6/L,树突状细胞与单个核细胞比值(DC/PBMC)分别为(0.62±0.08)%和(0.57±0.07)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组患者的药物不良反应主要有皮疹、腹泻和轻度肝功能异常。试验组和对照组的总药物不良反应发生率分别为46.43%和42.86%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论埃克替尼片治疗ⅢA-N2期NSCLC的临床疗效确切,且不增加药物不良反应的发生率。
- 王建国王淑仙王淑仙王岩王岩黄胜楠
- 关键词：安全性
- IL-7联合IL-2对脐血CD4^+CD25^-T细胞体外诱导扩增影响的研究被引量：4
- 2014年
- 目的:初步探讨IL-7联合IL-2对脐血CD4+CD25-T细胞体外扩增的促进作用,建立稳定的体外培养扩增脐血CD4+CD25-Tregs的培养体系,比较诱导扩增后的CD4+CD25+Tregs和自然分选的CD4+CD25+Tregs对PBMCs功能活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法分选出脐血CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞;加入不同浓度的细胞因子IL-7结合适当浓度的IL-2作为诱导剂,分析IL-7体外诱导CD4+CD25-T细胞增殖的有效性及最适浓度。我们利用流式细胞术检测体外扩增后的CD4+CD25-T细胞表型变化;MTS法检测体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs分别对成人外周血中单个核细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法分析体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs FOXP3基因、IL-10基因和TGF-β基因的cDNA表达的变化。结果:经3周体外培养、各组细胞均有明显的扩增。IL-7诱导组的扩增最强。体外抑制试验显示体外扩增的Tregs对成人外周血中单个核细胞有明显的抑制作用,IL-7联合IL-2诱导CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs具有较自然分选的CD4+CD25+Tregs稍弱的免疫抑制功能,其中IL-7浓度为4 ng/ml,IL-2浓度为2 000 U/ml时诱导CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs杀伤活性最强。结论:成功建立了CD4+CD25+Tregs的体外培养体系,联合应用IL-7、大剂量的IL-2和CD3/CD28单抗是体外诱导扩增CD4+CD25-T细胞成为CD4+CD25+Tregs的优选方法,并且扩增倍数高、可持续高表达CD4及CD25细胞表型。
- 仉洁郝京生李俊甫邢龙龙刘志文钟理刘薇
- 关键词：脐血CD4^+CD25^+T细胞
