国家自然科学基金(30271293)
- 作品数：11 被引量：57H指数：6
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- 相关机构：第二军医大学复旦大学南京军区福州总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省农科院青年科技人才创新基金上海市科学技术发展基金更多>>
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- 人食管上皮细胞原代培养方法的改良研究被引量：8
- 2009年
- 目的探讨适合应用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法。方法对比食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM及含血清培养基DMEM中的生长情况。结果食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染。结论应用无血清培养基K-SFM培养食管上皮细胞,方法简便,适合推广应用。
- 曾志勇鲍春荣丁芳宝杨胜生庄聪文程先进梅举
- 关键词：细胞培养食管上皮细胞无血清
- 人工食管移植重建犬颈部食管的方法研究
- 2009年
- 目的建立并改进犬颈段人工食管重建的动物模型。方法实验动物麻醉后,切除4cm颈段食管,将可降解人工食管以"套入法"吻合于食管缺损,同时行胃造瘘术,术后2周禁食,经胃造瘘管予胃肠营养,2周后进流质。结果所有实验动物均存活,未发生吻合口瘘及食管狭窄。结论使用"套入法"进行食管吻合并延长术后禁食时间可有效减少吻合口瘘的发生。术后早期经胃造瘘胃肠高营养是经济、安全、有效的营养支持方法。
- 曾志勇丁芳宝鲍春荣杨胜生庄聪文程先进梅举
- 关键词：人工食管
- 人食管上皮细胞培养、冻存及复苏方法的实验研究被引量：6
- 2006年
- 目的比较K-SFM无血清培养基及DMEM有血清培养基在人食管上皮细胞培养中的作用,并比较不同冻存方法对人食管上皮细胞复苏后存活率的影响,探讨适合应用于组织工程食管研究的人食管上皮细胞培养、冻存及复苏方法。方法人食管上皮细胞来源于食管癌患者手术切除的食管。采用组织块法和消化法培养,两种方法均分别加入K-SFM无血清培养基及DMEM有血清培养基。采用直接观察、锥虫蓝染色活力鉴定及细胞计数法绘制细胞生长曲线,对比细胞在不同培养基中的生长情况。分别以两种培养基配制的冻存液进行冻存,复苏后的细胞采用锥虫蓝染色法鉴定其存活率。结果细胞呈典型“铺路石”状排列,免疫组织化学检测细胞角蛋白呈阳性结果,证明培养的细胞为人食管上皮细胞。人食管上皮细胞在K-SFM无血清培养基中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染。以K-SFM培养液配制的冻存液冻存的细胞复苏后的存活率明显高于以DMEM配制的培养液。结论应用K-SFM无血清培养基培养和冻存人食管上皮细胞的方法简便、培养效果好,适合推广应用。
- 鲍春荣丁芳宝黄盛东梅举张宝仁
- 关键词：细胞培养食管上皮细胞培养基无血清
- 体外诱导犬骨髓间充质干细胞向上皮样细胞分化的初步研究被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨体外诱导犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向上皮样细胞分化的可行性和基本条件。方法:抽取成年健康杂种犬的骨髓,用密度梯度离心及贴壁培养法分离纯化BMSCs,培养扩增后,取第2代BMSCs在以下不同培养液中诱导培养:K-SFM+EGF+BPE、DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS,观察细胞形态的变化,绘制细胞的生长曲线,诱导培养后第7、14天,用免疫细胞化学染色和流式细胞仪鉴定上皮细胞特异性标志物细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)的表达。结果:K-SFM+EGF+BPE组诱导培养第7天,少量细胞形态变为圆形或椭圆形,有突起,第14天圆形或椭圆形细胞明显增多;诱导培养过程中DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS组细胞形态无明显变化。CK免疫细胞化学染色结果提示:K-SFM+EGF+BPE组诱导培养第7天,少量细胞呈阳性表达,第14天,阳性细胞明显增多;DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS组细胞均呈阴性表达。流式细胞仪检测发现K-SFM+EGF+BPE组诱导培养第14天,部分细胞CK和EMA呈阳性表达(>7%),DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS组细胞均为阴性。结论:本实验提示K-SFM+EGF+BPE联合培养液能够在体外诱导犬BMSCs向上皮样细胞分化。
- 韩桂林丁芳宝梅举黄盛东龚德军刘晓红刘艳玲
- 关键词：骨髓间质干细胞上皮样细胞细胞分化
- 聚乳酸-聚乙醇酸可降解支架构建组织工程食管
- 2009年
- 目的：观察人食管上皮细胞在聚乳酸-聚乙醇酸（PLGA）支架上的贴附和生长情况，利用组织工程技术培养工程化人工食管。方法：制作PLGA三维细胞支架；分离培养成人食管上皮细胞，体外扩增后种植到PLGA支架上。在体外和裸鼠体内分别培养食管上皮细胞-支架复合物，分期终止培养，进行组织学染色、扫描电镜、细胞角蛋白免疫组织化学检测。结果：体外培养显示，人食管上皮细胞在支架材料上贴附生长良好，长期培养仍保持食管上皮细胞特性，裸鼠体内培养4周后可形成食管黏膜样组织。结论：PLGA支架适合食管上皮细胞黏附生长，可作为食管组织工程的细胞载体。
- 曾志勇鲍春荣丁芳宝杨胜生梅举
- 关键词：食管上皮细胞聚乳酸-聚乙醇酸
- 一种新型可注射性组织工程水凝胶的双组分引发体系细胞毒性的负协同效应被引量：6
- 2005年
- 化学交联水凝胶有望成为一类新型可注射性组织工程水凝胶, 但是合适的、低毒性的引发体系是其瓶颈. 为了考察此类化学交联水凝胶的可行性, 本文对过硫酸铵(APS)/四甲基乙二胺(TEMED)氧化还原引发体系的体外细胞毒性进行了初步研究. 首先考察了不同引发剂浓度对大单体自由基聚合反应速率的影响, 以保证所考察的引发体系的剂量足以导致在体温和水环境中迅速凝胶化. 采用 MTT 定量检测和光学显微镜直接观察的方法研究了引发体系对 NIH/3T3 细胞的细胞毒性. 发现上述两种化学物质的细胞毒性呈现负协同效应, 即 APS/TEMED 组在高剂量时的细胞毒性比单独使用 APS 或 TEMED还要低.
- 段世锋朱文俞麟丁建东
- 关键词：体外细胞毒性可注射性水凝胶高剂量NIH/3T3细胞双组分
- 人工生物可降解支架聚乳酸-聚乙醇酸种植人食管上皮细胞的实验研究被引量：11
- 2006年
- 目的研究人食管上皮细胞在聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)三维支架上的贴附和生长情况,利用组织工程技术培养工程化人工食管。方法制作PLGA三维细胞支架;分离培养成人食管上皮细胞,体外扩增后种植到PLGA支架上。在体外和裸鼠体内分别培养食管上皮细胞-支架复合物,分期终止培养,进行组织学染色、扫描电镜、细胞角蛋白免疫组织化学检测。结果体外培养发现,人食管上皮细胞在支架材料上贴附生长良好,长期培养仍保持食管上皮细胞特性,裸鼠体内培养4周后可形成食管黏膜样组织。结论PLGA支架适合食管上皮细胞黏附生长,可作为食管组织工程的细胞载体。利用组织工程的方法可获得适于移植的工程化人工食管。
- 鲍春荣景殿英丁芳宝丁建东梅举黄盛东张宝仁
- 关键词：食管上皮细胞聚乳酸聚乙醇酸
- 人食管上皮细胞原代培养方法的研究被引量：6
- 2005年
- 目的探讨适用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法。方法对比食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM及含血清培养基DM EM中的生长情况。结果食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染。结论应用无血清培养基K-SFM培养食管上皮细胞,方法简便,适合推广应用。
- 鲍春荣丁芳宝黄盛东梅举张宝仁
- 关键词：细胞培养食管上皮细胞无血清
- 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-凋亡相关蛋白配体双功能蛋白抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨利用基因重组技术合成的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA4）-凋亡相关蛋白配体（FasL）双功能蛋白预防小鼠角膜移植术后免疫排斥反应发生的疗效及其作用机制。方法为实验研究。建立小鼠穿透性角膜移植动物模型，供体为C57BL／6小鼠（45只），受体为BALB／c小鼠（90只）。利用随机分组法将实验动物分为3组，每组30只，A组即对照组（不进行任何治疗），B组即环孢素A缓释系统（CsADDS）前房植入组，C组即10μg／ml CTLA4-FasL双功能蛋白浸泡角膜植片组。术后比较3组间角膜植片的存活时间，并分别利用免疫组织化学检测CD4＋T细胞，逆转录PCR（RT—PCR）检测CD80、CD86、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）、干扰素γ（IFN-γ）mRNA，DNA原位末端标记（TUNEL）检查凋亡的发生情况。结果A、B、C组角膜植片的存活时间分别为（14．3±1．3）、（58．0±2．8）、（106．3±17．5）d。C与A组、C与B组、B与A组进行组间两两比较，差异均有统计学意义（均P=0．000）。术后A组角膜植片中炎性细胞数量不断增加，以CD4＋T细胞浸润为主；B组角膜植片中未见明显炎性细胞浸润；C组角膜植片中浸润的CD4＋T细胞数量在术后7d达到最多，之后发生骤减。RT，PCR检查可见在术后3dA组和B组角膜和虹膜组织表达CD86 mRNA，术后7d表达CD80 mRNA，而在相同时间点上C组均减弱表达CD86和CD80 mRNA。术后14d，A组发生排斥的角膜中可检测到IL-10、TNF—α、IFN-γ mRNA，B组和C组则检测不到上述细胞因子的表达。TUNEL检查显示术后7dC组角膜和虹膜组织中分布着大量发生凋亡的单核细胞，而A、B组均未观察到细胞凋亡现象。结论CTLA4-FasL双功能蛋白既能阻断T细胞活化所需的CD28-CD80／CD86共刺激信号途径，又能诱导T细胞凋亡，通过双重作用机制发挥免疫抑制作用，从而有效地延长角�
- 陈敏史伟云王富华谢立信
- 关键词：膜糖蛋白类小鼠
- 人工生物可降解支架构建组织工程食管的实验研究被引量：9
- 2006年
- 目的研究食管上皮细胞在聚乳酸-聚乙醇酸[po ly(lactic-co-g lyco lic ac id),PLGA]三维支架材料上的黏附和生长情况,探索利用组织工程技术构建组织工程食管的可行性。方法应用粒子浸出-常温模压法制作PLGA三维多孔支架材料;分离培养6只犬食管上皮细胞,体外扩增后,种植到预涂Ⅳ型胶原的PLGA支架材料上。在体外和犬腹腔内分别培养食管上皮细胞-支架复合物,分期终止培养,体外培养3 d,1、2、3和4周,其中将体外培养3 d后细胞-支架复合物植入同只犬腹腔内,于体内培养1、2、3和4周后行组织学、扫描电镜观察,以及细胞角蛋白抗体免疫组织化学检测。结果分离培养的犬原代食管上皮细胞呈铺路石样,体外可大量扩增,细胞角蛋白抗体免疫组织化学染色呈阳性;体外及体内培养可见食管上皮细胞在支架材料上黏附、生长良好,持续培养仍保持食管上皮细胞特性;犬腹腔内培养4周后,可形成食管黏膜样组织。结论预涂Ⅳ型胶原的PLGA支架材料适合食管上皮细胞黏附生长,可作为组织工程食管的支架材料。利用组织工程的方法在体外和犬腹腔内培养有可能获得适于移植的组织工程食管。
- 鲍春荣丁芳宝梅举黄盛东张宝仁景殿英丁建东
- 关键词：食管上皮细胞聚乳酸聚乙醇酸
