辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(05L485)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：范红杰于维东胡新华杨军张强更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目国家自然科学基金辽宁省博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Survivin基因真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建pcDNA3.1-Survivin基因的真核表达载体并鉴定。方法提取大鼠肝细胞总RNA,RT-PCR法扩增SurvivincDNA片段,双酶切构建pcDNA3.1-Survivin,重组载体。结果重组真核表达载体经PCR、酶切鉴定及测序证实正确。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-Survivin。
- 范红杰于维东何志义
- 关键词：SURVIVIN基因
- 蛋白激酶B短发夹环RNA表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖活性的影响被引量：1
- 2007年
- 目的构建靶向蛋白激酶B基因的短发夹环RNA表达载体,观察其对血管平滑肌细胞增殖活性的影响。方法设计多个针对大鼠蛋白激酶B基因的短发夹环RNA序列,化学合成方法合成并经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN,包装后获得蛋白激酶B的逆转录表达载体,感染血管平滑肌细胞,Northern blot和Western blot法检测蛋白激酶B及其下游底物的表达变化,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测血管平滑肌细胞增殖活性的改变。结果成功构建蛋白激酶B基因的逆转录病毒载体并包装,感染血管平滑肌细胞,证实其能显著抑制蛋白激酶B的mRNA和蛋白产物表达,下游的p70s6k表达相应减少;被感染血管平滑肌细胞的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在G0/G1期。结论成功构建蛋白激酶B基因逆转录病毒RNA干扰表达载体,感染血管平滑肌细胞能够明显抑制其分裂、分化和增殖。
- 于维东胡新华范红杰杨军张强
- 关键词：病理学与病理生理学增殖活性蛋白激酶B短发夹环RNA
- 骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及survivin、caspase-3蛋白表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及存活蛋白(survivin)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达的影响。方法健康SD大鼠42只,随机分为假手术组(n=6)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=18)和MSC组(n=18)。PBS组和MSC组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,假手术组除不插入尼龙线外,其余步骤相同。PBS组和MSC组分别于建模成功后3h分别经尾静脉注射等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSC悬液。每组于脑缺血90min再灌注1d、3d、6d时分别采用Western blot及免疫组化方法检测缺血侧脑组织survivin和caspase-3蛋白的表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果假手术组无神经功能缺损,未见细胞凋亡及未见survivin和caspase-3蛋白表达。与PBS组比较,MSC组于脑缺血90min再灌注1d开始,caspase-3蛋白表达减少,再灌注3d开始,神经细胞凋亡数较少,神经功能缺损评分较低,survivin蛋白表达较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞移植能改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能,上调survivin蛋白表达,下调caspase-3蛋白表达,减少神经细胞凋亡,推测可能是其作用机制之一。
- 王宗立范红杰庞超健马玉朝
- 关键词：骨髓间充质干细胞缺血再灌注凋亡存活蛋白
- 环氧合酶2基因在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及意义被引量：2
- 2007年
- 目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤过程中环氧合酶2基因的表达及其意义。方法采用栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。随机分为8组:假手术组,缺血2h组,缺血再灌注3h、6h、12h、24h、48h、72h组,每组10只。评定神经功能损伤,HE染色观察脑组织形态学改变。Northern blot、Western blot和免疫组织化学染色方法检测脑组织环氧合酶2 mRNA和蛋白产物表达。结果神经功能缺损表现随缺血再灌注时间的延长而逐渐加重。缺血2h组环氧合酶2 mRNA和蛋白产物表达比假手术组明显增加(P<0.01),再灌注后表达逐渐增强,再灌注12h环氧合酶2的mRNA表达达高峰(0.92±0.30),再灌注24h环氧合酶2的蛋白产物表达达高峰(0.72±0.18),与其它组比较差异有显著性(P<0.01)。结论环氧合酶2基因在局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达呈动态变化过程,环氧合酶2可能与缺血再灌注后迟发性神经细胞死亡有关。
- 于维东杨军范红杰胡新华
- 关键词：神经病学环氧合酶局灶性脑缺血再灌注损伤
- RNA干扰沉默蛋白激酶B基因表达对血管平滑肌细胞增殖活性的影响被引量：2
- 2007年
- 目的构建靶向蛋白激酶 B(PKB/Akt)基因的逆转录病毒 RNA 干扰表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性的影响。方法针对大鼠 PKB/Akt 基因序列(NM_033230)设计多个短发夹环 RNA(shRNA)序列,化学合成法合成单链寡核苷酸序列,pGEM-T 载体克隆后双酶切,将 cDNA 序列插入逆转录病毒载体 pLXIN,脂质体介导转染包装细胞 PT67后获得 PKB/Akt的重组逆转录病毒 RNA 干扰载体,感染血管平滑肌细胞(VSMC),Northern blot 和 Western blot 法检测 Akt 及其下游底物-核糖体蛋白 S6激酶(p70s6k)等表达的变化,流式细胞仪检测 VSMC 细胞周期的变化,噻唑盐(MTT)比色法检测 VSMC 增殖活性的改变。结果 shRNA 序列经 T 载体克隆,酶切确定该片段为 PKB/Akt 基因 shRNA 序列;感染 VSMC,证实其能够显著抑制 PKB/Akt 的 mR-NA 和蛋白产物表达,下游的 p70s6k 表达相应减少;被感染 VSMC 的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在 Go/G_1期。结论成功构建 PKB/Akt 基因逆转录病毒 shRNA 载体,感染 VSMC 能够明显抑制其分裂、分化和增殖。
- 于维东胡新华范红杰杨军李铁民张强
- 关键词：蛋白激酶B短发夹环RNA血管平滑肌细胞
- Survivin基因转染对骨髓间充质干细胞体外抗凋亡能力的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察存活素(Survivin)基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞的体外抗凋亡作用。方法 PCR扩增Survivin全长编码基因,通过脂质体介导将Survivin基因转染至骨髓间充质干细胞,RT-PCR检测转染后Survivin mRNA的表达,Annexin V/PI双标法检测去血清诱导后细胞凋亡比例。结果 RT-PCR显示转染组有效表达Survivin mRNA,转染组去血清培养后的早期凋亡率较未转染组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Survivin基因转染对骨髓间充质干细胞有保护性作用,可增强其抗凋亡能力,延长其存活时间。
- 范红杰王倩冯娟于维东张强
- 关键词：骨髓间充质干细胞SURVIVIN基因转染凋亡
