国家自然科学基金(30700594)
- 作品数：12 被引量：33H指数：4
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- 相关机构：吉林农业大学吉林出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程文化科学更多>>
- 乳酸杆菌活的非可培养状态诱导条件的筛选与荧光观察被引量：7
- 2008年
- 依据逆向调整原则，设计了4套诱导乳酸杆菌进入活的非可培养（VBNC）状态的方案，同时应用LIVE／DEAD细胞染色试剂，对进入该状态的细菌进行了荧光观察，并尝试用Tween-80对VBNC状态细菌进行了复苏。结果显示，MRs液体培养基，pH2．0～3．0，4℃，兼性厌氧培养和不含半胱氨酸的MRS液体培养基，pH2．0～3．0，4℃，兼性厌氧培养均可使3株试验菌体在短期内进入VBNC状态，并且能较长时间维持这一状态；3株细菌菌体均发生萎缩、弯曲，且彼此相连，原本单在的杆菌变成了链杆菌；随着诱导时间的延长，菌体的交联程度明显增加，出现众多红绿交替的长链杆菌；Tween-80可使VBNC状态细菌恢复为可培养状态并实现复苏，而复苏后的细菌重新具备原菌的形态和生化特征。表明，乳酸杆菌具有VBNC状态，并且在此状态下呈现与正常菌体不同的形态特征。
- 李影魏忠彬钱爱东段锐
- 关键词：乳酸杆菌
- 鸡白痢沙门氏菌CVCC578标准株VBNC研究模型的建立及鉴定被引量：4
- 2010年
- 为建立活的非可培养状态(VBNC)研究模型,本研究利用液体LB和4℃联合条件对鸡白痢沙门氏菌CVCC578参考株的进行VBNC诱导,构建VBNC研究模型。同时依靠胎牛血清和程序性升温对处于该状态的菌体进行复苏,并对复苏前后的细菌进行了16SrRNA验证。结果表明:实验菌株经液体LB和4℃联合诱导后,可培养菌数在55d后降至零,总菌数在整个观察期内基本不变,而活菌数在150d后开始下降,180d后下降显著,表明实验菌株可在55d进入VBNC,而且维持时间至180d。当进入该状态后,菌体形态可由杆状变为球杆或球形,并且菌体排列可由单在变为聚集。经复苏和16SrRNA鉴定后,"变态"的细菌被证实为沙门氏菌,而非杂污染菌。该实验为规范VBNC沙门氏菌的鉴定程序以及制订相应的国家检测标准提供了实验依据。
- 李影段锐孙晓媛钱爱东王伟利
- 关键词：鸡白痢沙门氏菌
- 细菌“活的非可培养状态”核酸检测方法
- 2011年
- 自1982年,细菌活的非可培养状态（Viable but non-culturable state,VBNC）被正式提出至今其研究的实际意义越来越明显,特别是在食品检疫、水质监测等方面尤为突出。
- 李影王伟利钱爱东
- 关键词：核酸检测细菌水质监测检疫
- 适用于教学的细菌荧光染色实验指导被引量：2
- 2010年
- 依托国家自然科学基金项目,从庞大的科研体系中汲取教学素材,利用师生合力共同创新,经过多年探索,建立了一项适用于教学的细菌荧光染色实验,并列出具体实验指导与注意事项。该项实验不仅能使学生掌握细菌的分离与纯培养、平板计数、无菌取样等一些基本实验技能,而且还能使学生学会利用落射荧光显微镜观察细菌标片以及判定细菌活性状态的方法,同时学生的自主创新能力得到显著提高。实践证明,＂依靠科研,结合科研＂是为本科生设计创新性实验的重要渠道和保证。
- 李影钱爱东
- 关键词：细菌荧光染色
- VBNC细菌荧光观察技术问题分析及对策
- 2010年
- 以SYTO-9和PI两种荧光染料对细菌进行核染,以市售的黑色钢笔墨水替代伊拉克黑,利用手动压片方式对标本进行固定,自建一种"活的非可培养状态"(VBNC)细菌荧光显微镜观察技术。通过总结分析该项技术方法在应用过程中所出现的问题,如存在背景荧光、菌体聚集、荧光图像模糊、滤膜吸附能力差、菌体形态不鲜明、菌体荧光减淡等,并提出相应的解决策略,旨在给予相关研究者以帮助和启迪。
- 李影段锐钱爱东
- 关键词：荧光显微镜
- “活的非可培养状态”细菌荧光显微镜检测技术被引量：2
- 2010年
- 以细菌活的非可培养状态(VBNC)领域中常用的SYTO-9和PI替代吖啶橙和萘啶酮酸,以市售的黑色钢笔墨水替代伊拉克黑,自行建立了一套VBNC细菌荧光显微镜检测方法,以期简化现行技术的操作流程,克服现有技术的适用范围狭窄、取材困难、观察结果不准确等缺点,旨在解决细菌VBNC研究领域中的技术难题,提高同业者的实践操作水平。
- 李影段锐钱爱东
- 关键词：荧光显微镜
- 细菌通气培养与取样装置的改进
- 2010年
- 针对细菌在通气培养与取样过程中存在的不方便、不灵活、易污染等问题,提出了改进办法,并自主设计了一套既可用于单独培养或取样,也可同时用于培养与取样的实验装置,并对此装置的特征以及优点进行了阐述。实践表明,该装置的研制不仅能使学生从微生物学常规的经典实验中建立创新意识,而且还能使学生树立自主知识产权的保护意识,极大地推动了创新性实验与基础性实验的有机结合。
- 李影魏忠彬孙晓媛侯凤钱爱东
- 关键词：细菌通气培养
- 流式细胞仪检测活的非可培养状态大肠杆菌被引量：7
- 2009年
- 流式细胞仪和荧光染色联合对经酸和低温联合诱导的大肠杆菌活的非可培养状态(VBNC)进行检测。流式细胞仪分析结果表明:当可培养菌数降为零时,与正常状态细菌相比,诱导后菌株多数仍为呈现绿色荧光的活菌,活菌数远远超过死菌数。并且菌体形态多样,每份样品中至少存在两种不同"颗粒"。结合荧光图像可以确知是杆状、球状或球杆状的菌体。由此表明,实验菌株在可培养数为零时就已进入了VBNC状态。
- 李影王伟利段冶钱爱东
- 关键词：流式细胞仪大肠杆菌
- 鸡白痢沙门氏菌活的非可培养状态相关基因ybbB和rh1B的鉴定被引量：3
- 2011年
- 为鉴定细菌活的非可培养状态(VBNC)下的转录基因,本研究采用液体LB培养基在4℃条件下诱导鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)CVCC578株进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示RT-PCR技术(DDRT-PCR)分析S.pullorum VBNC状态与正常状态所表达的差异基因。结果表明,在S.pullorum的VBNC状态下克隆得到两个转录基因片段,分别为422 bp和573 bp。序列分析表明:422 bp的cDNA片段与不同沙门氏菌株的tRNA硒尿核苷合成酶(tRNA 2-selenouridine synthase)的ybbB基因的核苷酸和氨基酸同源性均为99%;573 bp的cDNA片段则与不同菌株S.pullorum的ATP依赖性的RNA解旋酶基因(rh1B)的核苷酸同源性为95%～100%,氨基酸同源性为98%以上。在VBNC状态下这两个转录基因的发现,将为S.pullorum的VBNC机理研究奠定基础。
- 李影段锐孙晓媛钱爱东王伟利
- 关键词：鸡白痢沙门氏菌
- 畜产品相关食源性致病菌“活的非可培养状态”的检测策略被引量：4
- 2009年
- 细菌活的非可培养状态(VBNC),是细菌在不良环境中,失去生长繁殖能力,但仍旧存活的一种特殊存在形式。当食源性细菌进入这一状态后,无法用依照培养技术所建立起来的各种检测方法进行检验。针对此种情况,本文着重提出了两点解决策略即RT-PCR法和种群基因检测法,并对目前国内外建立VBNC细菌检测标准等问题向我国检疫与质量监督部门提出了建议。
- 李影王伟利钱爱东
- 关键词：食源性致病菌
