宁波市科技计划项目(2007C10057) 作品数:4 被引量:10 H指数:2 相关作者: 唐泰山 张吉红 陈圣军 孔繁德 徐淑菲 更多>> 相关机构: 厦门出入境检验检疫局 宁波出入境检验检疫局 江苏出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 厦门市科技计划项目 宁波市科技计划项目 国家质检总局科技计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
牛传染性鼻气管炎和赤羽病基因芯片检测方法的建立和应用 被引量:5 2013年 为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和赤羽病病毒(AKAV)的双重快速检测方法,本研究根据IBRV gB基因和AKAV S基因序列设计合成了2对特异引物和探针,建立了同时检测这两种病毒的基因芯片检测方法,即以合成探针的5'端添加poly T10尾并氨基化固定于经处理的玻璃基片表面作为捕捉序列,采用荧光素Cy3标记正向引物的5'端,对样品的PCR扩增产物进行检测,并通过试验确定其适宜杂交温度为38℃。该方法检测IBRV和AKAV重组质粒的灵敏度分别为3.6×103拷贝/25μL和9.26×104拷贝/25μL,同时通过对牛的腺病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒及牛白血病病毒等的检测均无交叉反应,表明其特异性强。该检测方法的建立对于加强进出口牛的IBRV和AKAV检验检疫具有十分重要的意义。 陈圣军 孔繁德 徐淑菲 张吉红 唐泰山关键词:牛传染性鼻气管炎病毒 赤羽病病毒 寡核苷酸芯片 多重PCR技术同时检测牛传染性鼻气管炎和赤羽病方法的建立和应用 为满足同时对IBRV和AKAV进行快速诊断的需要,根据牛疱疹病毒1型(BHV-1)gB基因序列和赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性... 孔繁德 陈圣军 徐淑菲 张吉红 唐泰山关键词:多重PCR 牛传染性鼻气管炎病毒 文献传递 SYBR Green I实时荧光定量PCR检测牛传染性鼻气管炎病毒 被引量:2 2013年 本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒毒(IBRV)gB基因序列设计合成了引物,PCR扩增得到目的基因片段并克隆到PGM-T载体得到质粒标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了SYBR Green I荧光定量PCR检测IBRV的方法。该方法的检测敏感性达到360copies/25μL,并具有较好的重复性和特异性。本试验方法的建立对于加强进出口牛IBRV的检验检疫具有十分重要的意义。 陈圣军 孔繁德 徐淑菲 张吉红 唐泰山关键词:IBRV 实时荧光定量PCR SYBR 多重PCR技术同时检测牛传染性鼻气管炎和赤羽病方法的建立和应用 被引量:2 2013年 为满足同时对IBRV和AKAV进行快速诊断的需要,根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列和赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:该方法能同时扩增得到2条与试验设计相符的311 bp(IBRV)和392 bp(AKAV)特异性条带;IBRV的灵敏度为0.13 pg/25μL,AKAV的灵敏度为1.04 pg/25μL。本试验方法的建立对于加强进出口牛IBRV和AKAV的检验检疫具有十分重要的意义。 孔繁德 陈圣军 徐淑菲 张吉红 唐泰山关键词:多重PCR 牛传染性鼻气管炎病毒 赤羽病SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法的建立和应用 被引量:1 2013年 本研究根据赤羽病毒(AKAV)的S基因序列设计合成了引物,RT-PCR扩增得到目的基因片段并克隆到PGM-T载体得到质粒标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测AKAV的方法。该方法的检测敏感性达到926拷贝/25μL,并具有较好的重复性和特异性。本试验方法的建立对于加强进出口牛AKAV的检验检疫具有十分重要的意义。 陈圣军 孔繁德 徐淑菲 张吉红 唐泰山关键词:实时荧光定量PCR SYBR