国家自然科学基金(30600601) 作品数:6 被引量:51 H指数:4 相关作者: 李新营 王志明 刘剑鸣 李劲东 李萃 更多>> 相关机构: 中南大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
甲状腺癌的外科治疗:附487例报告 被引量:27 2010年 目的探讨甲状腺癌的诊断、治疗以及手术并发症的防治等。方法对1990年3月—2006年7月收治的487例甲状腺癌手术治疗的临床资料进行回顾性分析。结果术前和术中诊断甲状腺癌分别为279例(57.3%)和162例(33.3%),术后确诊46例(9.4%);再次手术140例(28.7%),发现残癌79例(56.4%);487例手术患者无1例院内死亡,17例术后出现短暂性声嘶,2例永久性声嘶,14例出现低钙抽搐或肢端麻木。413例患者获随访,其中颈部淋巴结复发者33例,局部复发者24例,远处转移者17例。分化型甲状腺癌,髓样癌和未分化癌术后5年生存率分别为99.8%,95.8%和87.0%。结论甲状腺结节伴钙化者应怀疑甲状腺癌可能,术中冷冻快速切片有助于甲状腺癌的诊断和术式的选择。应充分重视首次手术,术中应常规显露喉返神经。术后患者坚持终生服用甲状腺素片有助于预防复发和转移。 李新营 王志明 黄云 陆晔斌 李劲东 周乐杜 张鸽文 吕新生关键词:颈淋巴结清扫术 预后 人PAX8与PPARγ的融合基因(PPFP)的克隆及其重组质粒的构建 被引量:2 2009年 目的探讨人PAX8/PPARγ融合基因(PPFP)表达质粒在甲状腺上皮细胞中的表达及作用。方法从含有PAX8基因和PPARγ基因的质粒克隆模板PAX8-pOTB7及PPARγ-pCMV-SPORT6中,利用PCR方法调取目的基因PAX8和PPARγ,将PAX8和PPARγ定向连接后克隆到pEGFP-C1载体上,构建融合基因的真核表达质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ,在大肠杆菌E.coli DH5α中转化并提取质粒,通过PCR和测序、分析比对验证PPFP融合基因后,将真核表达载体pEGFP-C1-PAX8/PPARγ的质粒用脂质体包合并转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1,通过RT-PCR和Western blot鉴定PPFP融合基因于靶细胞内在mRNA和蛋白水平上的表达。结果构建的质粒通过鉴定证实正确;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后,经验证显示PPFP融合基因在mRNA和蛋白水平上顺利表达。结论成功克隆了PPFP融合基因并构建其重组质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后可顺利表达PPFP蛋白,为进一步研究PPFP基因致瘤作用的分子机制提供了实验基础。 刘剑鸣 王志明 李新营 李劲东 李萃 段朝军 汤参娥关键词:甲状腺肿瘤 融合基因 重组质粒 人PPFP基因的重组慢病毒载体的构建和表达 被引量:7 2009年 目的构建含人PAX8/PPARγ融合基因(PPFP)基因重组慢病毒载体并检测其表达性能。方法从已构建好的含PPFP的质粒克隆模板PEGFP—C—PPFP中,利用聚合酶链反应(PCR)方法钓取目的基因PPFP,将该基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC—FU(含Flag基因)中,得到重组的pGC—FU—PPFP,通过PCR、酶切、测序和分析比对验证PPFP基因后,将pGC—FU—PPFP质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞株293T细胞,获得携带PPFP基因和Flag基因的重组慢病毒,收集并浓缩病毒上清液,测定重组病毒的滴度。通过Western blot鉴定PPFP—Flag融合蛋白在靶细胞内的表达进一步验证目的基因在靶细胞中的表达。结果经PCR扩增获得2591bp的目的基因片段,构建的重组质粒经PCR、酶切及测序和分析比对鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达3.5×10^7转导单位TU/ml;感染的293T细胞,Western blot结果显示条带大小为90KDr,可判断目的基因PPFP在293T细胞中表达。结论成功构建PPFP基因慢病毒载体质粒pGC—FU—PPFP,并建立慢病毒过表达系统。 王志明 刘剑鸣 李萃 段朝军 黄云 李新营关键词:慢病毒载体 滤泡状甲状腺癌 甲状腺癌分子生物学的研究进展 被引量:12 2010年 甲状腺癌相关基因和肿瘤标志物的研究对于揭示甲状腺癌的发病机制和指导临床诊治均有重要意义。笔者就近年来研究较多且与甲状腺癌密切相关的基因,包括ras,BRAF,Ret/PTC,PAX8/PPARγ,p53和p27;以及肿瘤标志物,包括Gal-3,HBME-1,CK19,MMPs,VEGF,端粒酶和端粒酶逆转录酶等进行综述。 刘剑鸣 王志明 李新营关键词:甲状腺肿瘤 癌基因 肿瘤标志物 NF-κB在肝细胞癌组织中的表达及意义 被引量:5 2006年 目的探讨NF-κB基因在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、W estern-blot免疫组织化学技术检测3 2例肝癌组织及癌旁肝组织中的NF-κB基因的mRNA和蛋白表达水平及蛋白定位。结果NF-κB基因在肝癌组织中的表达较癌旁肝组织显著性增高(P<0.0 5)。免疫组化结果显示,NF-κB蛋白在肝癌细胞胞浆和胞核中均有表达,而在癌旁肝细胞中仅在胞浆中有表达。结论NF-κB基因在肝癌组织中呈显著高表达,提示其可能参与了肝癌的发生发展。NF-κB表达定位在癌细胞和癌旁肝细胞中的差异,提示NF-κB活化后,进入胞核,通过调节下游基因的转录,促进肝癌的发生。 梁帅 王志明 吕新生 李劲东 周乐杜 李新营关键词:NF-ΚB 基因表达 PPFP基因促进人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1增殖和迁徙运动能力的体外实验研究 被引量:1 2010年 目的:研究PPFP基因对人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1生物学特性的影响,以明确PPFP是否具有致瘤作用。方法以我们前期实验构建的PPFP基因慢病毒载体稳定转染细胞株Nthy-ori 3-1PPFP、空白慢病毒载体稳定转染细胞株Nthy-ori 3-1Vector和未转染细胞株Nthy-ori 3-1为研究对象,以MTT法检测细胞增殖情况,平板克隆形成实验检测克隆形成数,软琼脂集落形成实验检测集落形成率,划痕愈合实验观察各组细胞体外迁徙运动能力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡和细胞周期。结果以Nthy-ori 3-1Vector组和Nthy-ori 3-1组细胞为对照组,Nthy-ori 3-1PPFP组细胞较对照组在细胞增殖能力、平板克隆形成数、软琼脂集落形成率、体外迁徙运动能力均明显提高或增强,而细胞凋亡率明显下降,G0/G1期细胞明显减少,S期及G2/M期细胞则显著增加。结论PPFP基因可显著促进人正常甲状腺细胞Nthyori 3-1的增殖能力,并显著抑制其凋亡和促进其迁徙运动能力,提示该基因可能在滤泡状甲状腺癌恶性增殖和侵袭转移过程中起关键性作用。 刘剑鸣 王志明 李萃 段朝军 李新营关键词:基因转染 滤泡状甲状腺癌