西京医院科技创新基金(XJCX06M21)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：张国成曹玉红张光运李茹英丁翠玲更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 人β防御素4基因原核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2008年
- 人β防御素4(Human β defensin 4,HBD4)是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。在人体先天免疫尤其上皮及黏膜防御中起重要作用。本研究用重叠延伸PCR扩增合成HBD4cDNA全长,并克隆入pMD18-T载体,用PCR法扩增HBD4成熟肽(mature HBD4,mHBD4)编码序列并克隆入表达载体pGEX-4T-2中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导下,表达HBD4与谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)的融合多肽。用酶切鉴定、核酸测序、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳等进行鉴定。结果表明:我们成功合成了HBD4全长编码基因,构建了克隆载体pMD18-T/HBD4和原核表达载体pGEX-4T-2/mHBD4,并在大肠杆菌中成功表达融合蛋白GST-HBD4。
- 曹玉红张国成张光运徐彦鸣王立锋
- 关键词：基因合成克隆原核表达
- 人β防御素4基因的合成及其真核表达载体的构建被引量：6
- 2007年
- 曹玉红张国成张光运丁翠玲李茹英
- 关键词：重叠延伸PCR基因合成基因克隆
- 人β防御素4在大肠杆菌中的融合表达及其多克隆抗体的制备和鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:构建人β防御素4(human β defensin4,HBD4)基因的原核融合表达载体PGEX-4T-2/mHBD4,诱导GST-HBD4融合蛋白在大肠杆菌中表达,并制备其多克隆抗体。方法:从重组克隆载体PMD18-T/HBD4中扩增HBD4成熟肽编码基因,并克隆入PGEX-4T-2中,在IPTG诱导下,表达GST-HBD4融合蛋白。以表达的融合蛋白GST-HBD4作为免疫原免疫家兔制备抗GST-HBD4的抗血清,抗体效价及特异性分别用ELISA和Western blot法鉴定。结果:在大肠杆菌中成功表达Mr约为32000的融合蛋白GST-HBD4。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶128000,Western blot分析抗血清可与原核表达的融合蛋白GST-HBD4特异结合。结论:在大肠杆菌中成功表达了GST-HBD4融合蛋白,并制备了GST-HBD4的抗血清,为进一步研究HBD4蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 曹玉红张光运张国成
- 关键词：基因克隆
