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抗Caspase-3核酶的体外制备与活性鉴定被引量：9: 2000年; 目的：研究针对大鼠凋亡基因Caspase-3设计的核酶（Rz107和Rz544）的体外转录，切割及活性鉴定。方法：大鼠Caspase-3基因的PCR片段克隆于T载体T7 启动子下游，32P标记的体外转录物作为靶RNA。设计合成并克隆针对大鼠Caspase-3 mRNA的核酶（Rz107和Rz544），32P标记转录,核酶与靶RNA按一定比例进行体外切割实验。结果：Rz107 在37℃有活性。在一定温度范围内，其切割效率随温度升高而升高，最适温度为50℃。其米氏常数（Km）为14.13nmol/L, 酶催化反应速度常数（kcat）为2.31/min。而Rz544则无切割活力。结论：体外制备的Rz107具有良好的特异催化切割活性，它有望通过切割Caspase-3而抑制凋亡发生，可发展为新一代抗肝内炎症的核酸药物。; 徐人欢周霞秋谢青金由辛廖丹; 关键词：RNA 活性鉴定肝细胞凋亡

U6嵌合型抗caspase-3核酶的体外及体内活性鉴定被引量：2: 2001年; 为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３基因在细胞凋亡中的作用，及不同表达核酶的载体在体内的表达效果，本研究对比了３种表达核酶的真核质粒，包括ＲＮＡ聚合酶Ⅱ启动的ｐｌ．５ＲＺ１０７（自我剪切）和ｐＲＺ１０７及ＲＮＡ聚合酶Ⅲ启动的嵌合于Ｕ６中的ｐＵ６ＲＺ１０７在体外和在肝细胞ＢＲＬ－３Ａ内的活性，以期获得细胞内切割活性较高的的核酶载体方面的信息．结果显示，具有自我剪切功能的质粒ｐ１．５ＲＺ１０７在体外切割靶ＲＮＡ的效率最高，几达８０％；而体内ｃａｓｐａｓｅ－３在ＲＮＡ，蛋白水平及蛋白功能活性上均显著下降，证明核酶在体内均可有效地表达并切割底物，以ｐＵ６ＲＺ１０７切割效率最高，约达６５％，ｐＲＺ１０７次之，ｐｌ．５ＲＺ１０７最低．结果表明，Ｕ６嵌合型核酶ｐＵ６ＲＺ１０７体内可有效地表达核酶及下调靶ＲＮＡ水平，这不仅为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３在凋亡途径中的作用，也可为今后的基因治疗提供研究基础．; 徐人欢刘静徐丰江舸江舸谢青周霞秋金由辛; 关键词：核酶细胞凋亡体外活性体内活性

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上海市高等学校青年科学基金(98QN60)