湖南省卫生厅科研基金(B2005-178)
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 相关作者：段晓明贺修胜黄璐曾治中程元星更多>>
- 相关机构：南华大学长沙市第四医院长沙市中心医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HA纳米载体介导转hGM-CSF基因的HepG2疫苗诱导的抗瘤效应研究被引量：2
- 2011年
- 目的:观察HA纳米颗粒载体介导转染hGM-CSF基因的HepG2细胞疫苗体外抗肿瘤效应,为hGM-CSF基因修饰的HepG2细胞疫苗的临床应用提供依据。方法:HA纳米颗粒载体介导hGM-CSF基因转染HepG2细胞制备转GMCSF基因的HepG2细胞疫苗。密度梯度离心法分离人PBMC,体外诱导人PBMC。WST-1法测定PBMC的增殖活性及对HepG2细胞的杀伤效应,流式细胞术分析CD4+和CD8+的阳性表达率,ELISA法测定INF-γ的分泌。结果:WST-1结果显示,转基因HepG2组疫苗能诱导PBMC增殖,其增殖率优于野生型疫苗(p<0.05);其诱导的PBMC对HepG2的杀伤率高于各野生型疫苗组和各空白对照组(p<0.05)。FCM结果显示,转基因HepG2疫苗组PBMC中CD4+和CD8+阳性表达率均高于各野生型疫苗组和各空白对照组(p<0.05)。ELISA结果显示,转基因组PBMC培养上清中IFN-γ含量为1989.76±254.21pg/ml,高于各野生型疫苗组和各空白对照组(p<0.05)。结论:HA纳米颗粒载体介导转染hGM-CSF基因能增加HepG2细胞疫苗的免疫原性,转hGM-CSF基因HepG2细胞疫苗可有效诱导PBMC增殖、分化,增加INF-γ的分泌,提高其对HepG2细胞的杀伤作用。
- 曾治中段晓明程元星黄璐贺修胜
- 关键词：肿瘤疫苗粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 转hGM-CSF基因HepG2细胞疫苗侵袭性和生长活性初步检测
- 2011年
- 目的:探讨经60Co处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗的侵袭性和生长活性变化。方法:体外培养三种肝癌细胞(①野生型HepG2肝癌细胞②转染hGM-CSF基因的HepG2肝癌细胞③60Co射线处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗)采用MTT方法检测三种细胞在24h、48h、72h的OD值并绘出生长曲线;利用transwell小室进行体外侵袭实验来观察上述三种细胞侵袭性;用RT-PCR技术检测上述三种细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)在mRNA水平上表达的变化;结果:经60Co照射处理的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗组OD值在相同培养时间点较其他两组明显变小且差异有显著性(P<0.05)。三种细胞(上述①②③种细胞)transwell侵袭试验显示:③组穿过人造基底膜的细胞数量明显少于前两组;PT-PCR示:③组细胞的MMP-2的mRNA的表达明显低于①②。结论:经过60Co处理过的转hGM-CSF基因的HepG2肝癌疫苗的侵袭性和生长活性均明显降低。
- 程元星段晓明曾治中黄璐贺修胜
- 纳米羟基磷灰石研究进展被引量：6
- 2011年
- 羟基磷灰石是人骨中无机质重要的组成成分（hydroxyapatite HA），分子式是Ca10（PO4）6（OH）2，由美国牙科医师Brown和Chow于1987年首先发现，因其具有良好的生物相容性，生物活性和安全性，无论在基础研究及临床应用中都展现出诱人的前景。
- 黄璐段晓明
- 关键词：纳米羟基磷灰石生物相容性组成成分生物活性分子式
- HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗的抗肿瘤活性研究被引量：2
- 2012年
- 目的:评价HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗的抗肿瘤活性。方法:SCID小鼠20只腹腔内注射健康志愿者外周血淋巴细胞(1×107/ml)1.0 ml,同时背部皮下接种人肝癌HepG2细胞(1×107ml)0.2 ml。当皮下移植瘤体积长至100 mm3时,随机分四组:Ⅰ组,60Co照射的转染GM-CSF基因的HepG2细胞组,Ⅱ组,60Co照射的HepG2细胞组,Ⅲ组,生理盐水组,Ⅳ组,接种前,每组5只。MTT法检测各组小鼠脾细胞CTL活性,ELISA法检测血清IL-4和IL-12的水平。结果:转染GM-CSF基因的HepG2疫苗组小鼠脾细胞CTL活性明显高于其余组(P<0.05);同时血清Th1类细胞因子IL-12的水平明显升高(P<0.05),而Th2类细胞因子IL-4的水平无统计学意义(P>0.05)。结论:HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗可刺激机体产生特异性免疫反应。
- 苏小芳段晓明黄璐曾治中程元星贺修胜
- 关键词：GM-CSF基因肿瘤疫苗
- HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗联合多柔比星抗肝癌作用
- 2014年
- 目的:评价HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗联合多柔比星治疗肝癌的效果。方法:建立Hu-PBL-SCID HepG2荷瘤小鼠模型,待皮下种植瘤长至100-150mm3时,随机分为5组,每组5只:对照组(PBS);化疗组(多柔比星DOX);疫苗组(60Co照射的转染GM-CSF基因的HepG2细胞);先疫苗后化疗组;先化疗后疫苗组。末次治疗后第5天处死各组小鼠,用MTT法测定脾脏CTL活性及肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)杀伤活性;取肿瘤组织行HE染色及CD8+T细胞免疫组化检查。结果:化疗组的CTL活性与对照组相比无显著变化(P>0.05)。疫苗组和先疫苗后化疗组及先化疗后疫苗组的CTL活性显著强于上述两组(P<0.05),该3组两两之间也存在显著差异(P<0.05),而先化疗后疫苗组的CTL活性增强最为明显,明显高于其他两组(P<0.05)。该组的TIL活性同样强于其他各组。同其它组相比,先化疗后疫苗组的瘤体内可见大量肿瘤细胞坏死,CD8+T细胞浸润显著增加。结论:HA纳米载体转染hGM-CSF基因的HepG2疫苗的主动免疫联合多柔比星化疗具有协同抗肝癌作用,为肿瘤免疫联合化疗治疗肿瘤提供了实验依据。
- 赵祺段晓明苏小芳邓彦君杨陈贺修胜
- 关键词：肝癌肿瘤疫苗多柔比星免疫化疗
- 羟基磷灰石纳米颗粒载体介导hGM-CSF基因转染HepG2细胞及对其生长的影响被引量：13
- 2008年
- 目的:研究羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)纳米颗粒载体携带人粒-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte mac-rophage colony stimulating factor,hGM-CSF)基因转染HepG2细胞,以及其对细胞生长的影响,为基因修饰的肝癌肿瘤疫苗的临床研究奠定基础。方法:采用MTT法检测HA纳米颗粒载体对HepG2细胞生长的影响;采用HA纳米颗粒载体转染技术,将携带有hGM-CSF基因的表达质粒导入HepG2细胞中,G418筛选抗性细胞,限制性稀释法挑选单克隆;RT-PCR法鉴定hGM-CSF的整合和表达,ELISA法测定细胞培养液中的hGM-CSF分泌量和持续的时间;FCM法分析hGM-CSF基因对HepG2细胞生长的影响。结果:MTT结果提示HA纳米颗粒混悬液浓度在80μg/mL以下对HepG2细胞生长的影响与对照组比较差异无统计学意义。RT-PCR结果显示hGM-CSF基因在HepG2细胞中已整合并稳定表达。ELISA检测结果显示转入hGM-CSF基因的HepG2细胞能稳定分泌hGM-CSF,其分泌量为(216.22±45.78)ng/106cells每24h。FCM检测结果则显示hGM-CSF基因不促进细胞凋亡,且对细胞的生长周期无明显影响。结论:HA纳米颗粒载体可以安全地将目的基因hGM-CSF导入HepG2细胞中且稳定表达,其对细胞的生长无明显影响,为基因修饰的肝癌疫苗的后继研究提供了实验基础。
- 郭淦华段晓明刘晓宇曹建国贺修胜
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子转染生物相容性材料
