国家自然科学基金(30600522)
- 作品数：12 被引量：44H指数：5
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- 相关机构：安徽医科大学第二附属医院华中科技大学安徽医科大学第一附属医院更多>>
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- HBV核心蛋白拮抗α干扰素抗病毒活性的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨HBV核心蛋白(HBc)对α干扰素(IFN-α)抗病毒活性可能存在的拮抗机制。方法以表达抗黏液病毒A蛋白(MxA)的重组质粒pcDNA3.1-Flag-MxA(野生型)转染肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞,用ELISA和real-timePCR法分别检测转染后HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg和细胞外HBVDNA。HBc核心蛋白表达质粒(pHBc-EGFP)转染HepG2细胞后,RT-PCR法分析IFN-α抗病毒蛋白MxA、双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)和2',5'-寡腺苷酸合成酶(2',5'-OAS)等mRNA水平。结果转染MxA重组质粒的HepG2.2.15细胞能够表达MxA,转染48h时HBsAg、HBeAg比空白对照组显著减少(P<0.05),HBVDNA无显著性差异。转染pHBc-EGFP的HepG2细胞,经1000IU/mlIFN-α处理后,抗病毒蛋白PKR和2',5'-OASmRNA水平未见明显改变,而MxAmRNA水平显著降低(P<0.05)。结论 HBV核心蛋白可能通过抑制抗病毒蛋白MxA的表达,而发挥对IFN-α的拮抗作用。
- 管世鹤杨凯陆应玉
- 关键词：核心蛋白干扰素MXA蛋白
- 乙型肝炎病毒及其抗原成分对干扰素信号传导途径分子和抗病毒蛋白表达的影响被引量：8
- 2011年
- 目的了解HBV及其抗原成分对干扰素（IFN） α Janus激酶-信号传导和转录激活子（JAK-STAT）信号传导途径分子和抗病毒蛋白表达可能存在的影响。方法以人肝胚瘤细胞株HepG2细胞为研究对象，分别经质粒转染（以能够表达完整HBV病毒颗粒或HBsAg、HBcAg的质粒pSM2、pHBS2-S和pHBc-EGFP）、病毒感染（以HepG2．2．15细胞培养上清液感染HepG2细胞，其含有完整HBV病毒颗粒和HBV抗原）以及与HBV抗原直接接触刺激等方式处理不同组HepG2细胞，以Northern blot和RT-PCR等方法分析各处理组HepG2细胞的IFN α应答情况，如检测抗病毒蛋白【如粘病毒抵抗蛋白A（MxA）、2＇-5＇寡腺苷酸合成酶（2＇-5＇OAS）、9-27等】和JAKSTAT信号传导途径分子（如STATl）的表达。对数据进行t检验。结果转染pSM2、pHBS2-S和pHBc-GFP质粒后，HepG2细胞能够表达完整的HBV颗粒或HBV抗原，且随着转染时间的延长，HBV颗粒或抗原表达量逐步增多，转染48、96h的细胞培养上清液中HBsAg的S／CO值为0．81±0．1l和2．35±0．33（t=lO．84，P〈0．05），HBeAg的S／CO值为0．69±0．06和1．79±0．13（t=18．82，P〈0．05）。Northemblot分析提示HepG2细胞能够表达IFNα抗病毒蛋白MxA、2’，5’OAS、9-27等，但质粒转染、病毒感染和HBV抗原直接接触刺激的HepG2细胞，IFNQ抗病毒蛋白MxA、2’，5’OAS、9-27等的表达量明显减低，且随着转染时间的延长而进一步减低；此外，STATl的表达也随着HBV颗粒或HBV抗原的表达而受到抑制。结论在体外细胞模型中，HBV及其抗原成分影响IFNα JAK-STAT信号传导途径分子和抗病毒蛋白的表达；HBV具有拮抗或反作用于IFNα抗病毒活性的机制。
- 管世鹤杨凯陆蒙吉卢银平杨东亮
- 关键词：肝炎病毒乙型干扰素Α信号传导抗病毒蛋白
- 低密度cDNAMacroarray对干扰素α抗病毒蛋白的筛选被引量：2
- 2011年
- 目的 基于低密度cDNAMacroarray技术筛选出差异表达的干扰素（IFN）仅抗病毒基因，以探讨IFNα抗病毒蛋白的表达与HBV复制的关系。方法以一定浓度的IFNa处理肝胚瘤细胞株HepG2和HepG2．2．15细胞6h，用cDNAMacroarray分析比较两细胞株IFN仅抗病毒基因表达谱，并筛选出差异表达的IFNa抗病毒基因。将表达HBV核心蛋白（HBc）的质粒DHBc-EGFP转染HepG2细胞，RT-PCR法分析HBc对IFN仅抗病毒基因表达的影响。将表达抗黏病毒A蛋白（MxA）的表达质粒pcDNA3．1Flag-MxA转染HepG2．2．15，以酶联免疫吸附试验、Dotblot、Southernblot等方法分别检测HepG2．2．15细胞表达释放的HBsAg与HBeAg、细胞外HBVDNA和细胞内HBVDNA复制中间体（松弛环状DNA、双股线性DNA），以判断HBV复制情况。两组间数据比较采用t检验，组间不同时间点数据比较采用单因素方差分析。结果cDNAMacroarray分析显示HepG2和HepG2．2．15细胞的抗病毒基因表达谱具有差异性：IFNa抗病毒基因中干扰素诱导跨膜蛋白（IFITM）1、IFITM2、IFITM3、RING4等在HepG2．2．15细胞的表达被部分抑制，而重要的抗病毒蛋白MxA表达被完全抑制。HBc转染组细胞中MxAmRNA表达的相对水平为0．31±0．05，低于空白对照组的0．74±0．04，差异有统计学意义，P〈0．05。MxA蛋白转染HepG2．2．15细胞48、72h后，MxA转染组细胞上清液中HBsAg的S／CO值分别为1．42±0．21和1．58±0．18，HBeAg的s／co值为1．44±0．14和2．28±0．24，而空白对照组细胞上清液中HBsAg的S／CO值为1．92±0．19和2．79±0．25，HBeAg的S／CO值为2．31±0．46和3．37±0．29，两组细胞上清液中HBV抗原的s／CO值差异均有统计学意义，P值均〈0．05。细胞外HBVDNA、胞内HBV复制中间体DNA均无明显变化。结论HBV及其抗原成分的复制和表达影响着IFNa抗病毒蛋白的表达；HBV通过抑制IFNd抗病毒蛋白的表达而发挥拮抗IFNa的抗病毒活
- 管世鹤杨凯王琴程中乐潘颖吴园园杨东亮
- 关键词：干扰素抗病毒蛋白CDNAMACROARRAY
- Src蛋白及其生物学特性的研究进展被引量：9
- 2011年
- Src家族激酶（SFKs）由9个成员组成,分别是：LYN、FYN、LCK、HCK、FGR、BLK、YRK、YES和c-Src。其中,Src蛋白是目前研究最多的成员,也是与人类疾病联系最为密切的蛋白。Src广泛存在于组织细胞中,通过与信号转导通路中重要分子的相互作用,参与细胞的代谢过程,调控细胞的生长、发育和分化等过程,同时也与一些疾病的发生有着密切的联系。
- 潘颖管世鹤
- 关键词：生物学特性信号通路
- 乙型肝炎病毒抑制α-干扰素诱导抗病毒蛋白表达的研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)对α-干扰素(IFN-α)诱导抗病毒蛋白表达的影响及其机制。方法以人肝胚瘤细胞株HepG2为研究对象,将能够表达完整HBV病毒颗粒的质粒pSM2转染HepG2细胞,再将0～1 000 IU/ml浓度IFN-α处理细胞6 h,运用ELISA和Southern blot技术分析转染细胞上清HBV抗原和细胞内HBV DNA以判断HBV复制情况;以Northern blot技术分析转染前后HepG2细胞的IFN-α应答情况,检测抗病毒蛋白(如MxA、2',5'-OAS等),并进一步分析IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子STAT1的表达。结果转染HBV全基因组序列表达质粒pSM2的HepG2细胞能够表达完整的HBV颗粒,且随着转染时间的延长,HBV颗粒或抗原表达量逐步增加。Northern blot分析提示HepG2细胞能够表达IFN-α抗病毒蛋白:MxA、2',5'-OAS,但转染pSM2质粒的HepG2细胞,IFN-α抗病毒蛋白MxA、2',5'-OAS表达量明显减低;同时重要的IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子STAT1表达也随着HBV颗粒的表达而受到抑制。结论 HBV可能通过下调IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子STAT1的表达,从而抑制抗病毒蛋白如MxA、2',5'-OAS的表达,这很可能是HBV拮抗IFN-α抗病毒活性的重要机制之一。
- 管世鹤杨凯潘颖
- 关键词：乙型干扰素Α
- HBV对HepG2.2.15细胞α干扰素的JAK-STAT信号转导途径分子及MxA mRNA表达的影响被引量：8
- 2010年
- 目的研究乙型肝炎病毒(HBV)对α干扰素(IFN-α)JAK-STAT信号转导途径分子及MxAmRNA表达的影响。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IFN-α处理的HepG2.2.15细胞在不同处理时间点的STAT1、STAT2、IS-GF3γmRNA表达水平,并比较分析干扰素抗病毒蛋白MxAmRNA在HepG2和HepG2.2.15细胞中的表达。结果RT-PCR显示经IFN-α处理后HepG2.2.15细胞STAT1、STAT2、ISGF3γmRNA表达水平明显升高,表明转染HBV全基因组并能分泌完整HBV病毒子的HepG2.2.15对IFN-α有应答。抗病毒蛋白MxAmRNA在HepG2.2.15细胞中未检测到表达,而在HepG2细胞中却能表达。结论HBV或其抗原成分并不影响IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子mRNA表达,但影响抗病毒蛋白如MxAmRNA的表达。
- 杨凯管世鹤徐元宏张振华
- 关键词：干扰素Α
- HBx蛋白对α干扰素诱导的MxA蛋白表达的影响被引量：5
- 2011年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)HBx蛋白(HepatitisB virus X protein)对α干扰素(IFN-α)诱导的抗病毒蛋白的影响及相关机制。方法以表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞,经IFN-α处理后,RT-PCR法分析细胞内抗病毒蛋白MxA和JAK-STAT信号转导途径分子STAT1 mRNA表达水平,同时运用免疫印迹检测细胞内HBx、p-ERK、p-STAT1和t-STAT1等蛋白的表达。结果转染细胞内MxA、STAT1的mRNA和p-STAT1、t-STAT1的蛋白表达水平明显减少(P<0.05);而ERK抑制剂PD98059预处理后,转染细胞内MxA、STAT1 mRNA水平能够恢复至转染前的表达水平。结论 HBx蛋白很可能通过影响IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子而抑制抗病毒蛋白MxA的表达;ERK信号转导途径的活化可能参与这一抑制过程。
- 管世鹤潘颖杨凯沈继龙杨东亮
- 关键词：乙型HBX蛋白干扰素MXA蛋白信号转导途径
- 2种检测系统检测部分生化项目结果的比对被引量：5
- 2011年
- 目的对2种检测系统检测部分生化项目结果进行比对实验,研究其测定结果是否在允许范围内。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件,每天取患者样本8份,分别在2种检测系统Beckman DXC 800全自动生化仪和Dimension全自动生化仪中测定血清胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、钾(K)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等生化指标,并以美国临床实验室修正法CLIA′88规定的室间评估的允许误差(Ea)为判断依据,判断Dimension全自动生化仪的临床可接受性。结果 Di-mension全自动生化仪与Beckman DXC 800全自动生化仪具有良好的相关性。Dimension全自动生化仪的系统误差(Se)未超过Ea,即Dimension全自动生化仪属可接受。结论 Beckman DXC 800全自动生化仪和Dimension全自动生化仪测定血清CHO、TG、K、BUN、Cr等生化指标的结果基本一致。Dimension全自动生化仪对以上生化指标的测定结果可接受。
- 管世鹤杨凯
- 关键词：偏倚
- 拉米夫定单独和与α干扰素序贯处理的人肝胚瘤细胞株HepG2．2．15HBV差异复制的研究
- 2011年
- 目的研究LAM单独和与IFN-序贯处理对人肝胚瘤细胞株HepG2．2．15细胞的HBV复制的影响，探讨LAM与IFN—α在体外抑制HBV复制的差异。方法以未处理的HepG2．2．15细胞作为对照组；以1000IU／ml浓度IFN—α连续处理HepG2．2．15细胞10d为单独IFN—α处理组；以0．2、1、5、20、100mol／L的LAM处理HepG2．2．15细胞为单独LAM处理组；序贯处理组则以浓度为0．0d、0．2、5、25、125、200Ixmol／L的LAM连续处理HepG2．2．15细胞7d，再补充1000IU／mlIFN—α与LAM联合处理3d，然后停止LAM处理，再单独以1000lU／mlIFN—α连续处理细胞10d；分别用ELISA法、点杂交和Southern杂交分析不同处理时期、不同处理组HepG2．2．15细胞分泌的HBV抗原、细胞外HBVDNA、细胞内HBV复制中间体DNA以判断HepG2．2．15细胞内HBV复制情况。结果LAM连续处理至10d时，单独LAM处理组HepG2．2．15细胞分泌的HBsAg分别是1．77±0．22、1．65±0．25、1．95±0．19、1．34±0．11、1．07±0．05，分泌的HBeAg是1．41±0．13、1．37±0．09、1．63±0．07、1．26±0．12、1．05±0．09，对照组分泌的HBsAg和HBeAg分别是3．34±0．15和3．33±0．05，单独LAM处理组与对照组相比分泌的HBsAg和HBeAg下降，差异有统计学意义（HBsAg的t值为10．21、10．0d、9．94、18．62、24．86，HBeAg的t值为23．87、32．97、34．22、27．57和38．35，P均〈0．05）。点杂交、Southern杂交分析显示LAM连续处理10d后，单独LAM处理组的细胞外HBVDNA和细胞内HBV复制中间体DNA不能被检测到。停止LAM处理并代之以1000Iu／mlIFN—α序贯处理10d，序贯处理组均有细胞内HBV复制中间体DNA的出现，且细胞外HBV抗原和HBVDNA恢复表达；即HBV颗粒在HepG2．2．15细胞内又重新恢复复制状态并分泌至细胞外。结论LAM与IFN-α在体外细胞模型中具有不同的抗病毒效应，导致HepG2．2．15细胞内HBV复制的差异性。
- 管世鹤杨凯卢银平杨东亮
- 关键词：拉米夫定干扰素Α
- SOCS1对α干扰素调节乙肝病毒复制作用的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究细胞因子信号阻抑蛋白1(SOCS1)对α干扰素(IFNα-)调节乙型肝炎病毒(HBV)复制作用的影响。方法 HepG2.2.15细胞按处理方法分为3组:空白组(未加IFNα-处理)、对照组(加空质粒转染)、实验组(加pcD-NA3.1-SOCS1转染),转染后检测对照组与实验组有质粒表达后,用1000 IU/ml IFNα-处理实验组与对照组的细胞株48 h,通过化学发光法检测3组中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的分泌量,用荧光定量PCR技术检测HBV DNA水平。结果研究发现IFNα-可以抑制HepG2.2.15细胞的HBV复制,转染pcDNA3.1-SOCS1重组质粒的HepG2.2.15细胞能够表达SOCS1蛋白。与对照组相比,实验组细胞分泌HBsAg、HBeAg、HBV DNA增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SOCS1对IFN-α抑制病毒复制作用有影响,并为进一步研究HBV可能存在的拮抗IFN作用提供了依据。目的研究细胞因子信号阻抑蛋白1(SOCS1)对α干扰素(IFN-α)调节乙型肝炎病毒(HBV)复制作用的影响。方法 HepG2.2.15细胞按处理方法分为3组:空白组(未加IFN-α处理)、对照组(加空质粒转染)、实验组(加pcD-NA3.1-SOCS1转染),转染后检测对照组与实验组有质粒表达后,用1 000 IU/ml IFN-α处理实验组与对照组的细胞株48 h,通过化学发光法检测3组中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的分泌量,用荧光定量PCR技术检测HBV DNA水平。结果研究发现IFN-α可以抑制HepG2.2.15细胞的HBV复制,转染pcDNA3.1-SOCS1重组质粒的HepG2.2.15细胞能够表达SOCS1蛋白。与对照组相比,实验组细胞分泌HBsAg、HBeAg、HBV DNA增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SOCS1对IFN-α抑制病毒复制作用有影响,并为进一步研究HBV可能存在的拮抗IFN作用提供了依据。
- 程中乐管世鹤杨凯潘颖
- 关键词：干扰素Α细胞因子信号转导蛋白抑制因子
