国家自然科学基金(30600510)
- 作品数：16 被引量：22H指数：2
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- 亚砷酸钠联合丁基硫堇亚胺致肝细胞毒性作用
- 2010年
- 目的研究亚砷酸钠（sodium arsenite,NaAsO2）单独、以及与丁基硫堇亚胺（buthionine sulfoximine,BSO）联合对Chang liver细胞毒性作用。方法常规培养的Chang liver细胞用NaAsO2单独或NaAsO2和BSO联合染毒24h,倒置相差显微镜采集细胞图像;四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力。结果NaAsO2（0~250μmol/L）明显改变Chang liver细胞的形态并明显降低细胞生存率（P〈0.01）,且呈剂量-反应关系;NaAsO2（5,20μmol/L）和BOS（1 mmol/L）联合作用,其细胞生存率明显低于相应浓度的NaAsO2单独作用组（P〈0.01）。结论NaAsO2具有明显的细胞毒性;NaAsO2联合BSO能够加重NaAsO2对Chang liver细胞的毒性。
- 李冰李昕荣琳王惠惠朱博张新玉
- 关键词：亚砷酸钠
- 无机砷对Chang肝细胞活性氧的诱导和核转录因子表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究亚砷酸钠(NaAsO_2)对Chang肝细胞中活性氧(ROS)的诱导以及对核转录因子Nrf2的活化作用。方法体外实验采用0～10μmol/LNaAsO_2溶液对Chang肝细胞染毒2、6、12和24 h。分别用流式细胞仪和免疫印记实验(Western blot)技术检测细胞内ROS含量和Nrf2蛋白的表达。结果2.5μmol/lNaAsO_2溶液染毒6 h、5.0μmol/L NaAsO_2溶液染毒2、6、12、24h的平均荧光强度的相对比值均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);且ROS的产生量随着NaAsO_2溶液浓度的升高而增多。5.0μmol/L NaAsO_2溶液染毒12 h、5.0μmol/L NaAsO_2溶液染毒2、6、12 h的核转录因子Nrf2蛋白表达均强于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);且核转录因子Nrf2蛋白表达的活化具有时间相关性,即在NaAsO_2溶液染毒12 h时核转录因子Nrf2蛋白表达的活化出现高峰,而后逐渐降低至正常水平。结论无机砷能够诱导Chang肝细胞内ROS的生成和增强核转录因子Nrf2蛋白的表达。
- 张新玉李冰李昕朱博孙贵范
- 关键词：亚砷酸钠砷中毒
- 砷对原代培养海马神经细胞的过氧化损伤
- 2011年
- 目的观察低剂量砷对新生大鼠海马神经细胞过氧化的影响。方法对原代培养的新生大鼠海马神经细胞经提取、纯化和鉴定后分组进行染毒试验。A组(对照组)、B组(砷50μmol/L)、D组(砷100μmol/L)、F组(砷200μmol/L)、H组(砷400μmol/L),染毒时间为12 h。经超声波粉碎细胞后,测定神经细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乙酰胆碱酯酶(TChE)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组比较,各染毒组GSH-Px、S0D和TChE活性显著降低(P<0.05),CAT活性和MDA含量显著升高(P<0.05),具有明显的剂量效应。结论低剂量砷暴露可引起海马神经细胞的过氧化损伤。
- 高双宫慧芝姜泓李冰李欣
- 关键词：砷海马神经细胞过氧化
- 无机砷对红系相关因子-2及其抑制因子mRNA表达的影响
- 2011年
- 目的观察亚砷酸钠(NaAsO2,sodium arsenite)对Chang肝细胞株核转录因子红系相关因子(nuclear factor ery-throid 2-related factor 2,Nrf2)及其胞浆抑制因子Keap1(Kelch-like ECH-associated protein 1)的mRNA表达水平的影响。方法分别以不同浓度NaAsO2(0、50、200、400μmol/L)暴露人类Chang肝细胞株12 h,采用AlamarBlue法测定细胞增殖活性,采用RT-PCR法测定Nrf2和Keap1的mRNA表达水平。结果 50μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而200μmol/L和400μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性均显著低于对照组(P<0.05);50、200、400μmol/L的NaAsO2暴露12 h,Nrf2和Keap1的mRNA表达水平与对照组比较均显著下降(P<0.05),且呈剂量-反应关系。结论高浓度无机砷暴露能抑制Chang肝细胞株Nrf2和Keap1的mRNA表达水平,并可能与无机砷造成机体的高氧化应激水平有关。
- 李冰李昕刘丹邢晓越王欣孙贵范
- 关键词：亚砷酸钠NRF2KEAP1
- 亚砷酸钠对人类黑色素瘤G361细胞系酪氨酸酶mRNA表达的影响
- 2008年
- 目的研究亚砷酸钠（NaAsO2）对人类黑色素瘤G361细胞系酪氨酸酶（TYR）mRNA表达的影响。方法将体外培养的G361细胞分别暴露于短时（12、24、48h）低剂量（0．1、1．0μmol／L）、短时（3,6、12、24、48h）高剂量（5．0、10．0μmol／L）及长时（8、16周）低剂量（0．1μmol／L）下，以荧光实时定量PCR方法测定细胞TYRmRNA表达水平。结果染毒剂量较低（0．1、1．0μmol／L）、作用时间较短（12、24、48h）时，黑色素瘤G361细胞TYRmRNA表达水平同一时段各剂量组间比较差异无统计学意义（F值分别为0．173、0．687、2．869，P〉0．05）。染毒剂量较高（5．0、10．0μmol／L）、作用12、24、48h时，细胞TYRmRNA表达水平同一时段各剂量组间比较差异有统计学意义（F值分别为81．056、7．616、24．132，P〈0．05或〈0．01）；其中，与对照组比较，除5．0、10．0μmol／L组3、6h及5．0μmol／L组12h外，其余各组TYRmRNA相对表达水平比同一时段的对照组明显降低（P〈0．05），0．1μmol／L组染毒8周时细胞TYRmRNA表达水平（138．71±4．56）明显高于对照组（100．00±8．06），两组比较差异有统计学意义（t=-7．238，P〈0．叭）。结论NaAsO2暴露可通过引起色素代谢关键酶TYRmRNA表达水平改变而影响色素代谢过程。
- 李昕李冰孙贵范
- 关键词：砷酪氨酸酶细胞系黑色素瘤
- 无机砷对Chang liver细胞血红素单加氧酶-1表达的活化作用
- 2009年
- 目的观察无机砷（NaAsO2）对正常人肝细胞株Changliver细胞血红素单加氧酶-1（hemeoxygenase-1，HO-1）表达的活化作用。方法采用细胞培养的方法，将Changliver细胞分别暴露于10μm01／LNaAsO：后0（对照）、2、6、12、24h和0（对照）、5、10、25、50μmol／L后12h，收集细胞，Westernblot技术检测细胞内HO-1蛋白的表达。结果Changliver细胞染砷10μmol／L，体外培养6、12、24h，细胞内HO-1蛋白表达（3．97±0．72、12．92±2．98、23．29±3．82）明显高于对照组（1．00±0．00），组间比较和各组分别与对照组比较，差异有统计学意义（F=85．83，P〈0．01；￡值分别为-9．42、-8．95、-13．83，P〈0．05或〈0．01）。染砷5、10、25、50μmol／L．体外培养12h，细胞内HO-1蛋白表达（6．34±0．25、7．75±0．39、7．93±0．14、12，48±0．35）明显高于对照组（1．00±0．00），组间比较和各组分别与对照组比较，差异有统计学意义（F=709．66，P〈0．01；t值分别为-36．25、-30．19、-86．40、-56．40，P〈0．01）。结论无机砷能够诱导ChangLiver细胞内HO-1的活化，促进蛋白表达，并且具有时间和剂量效应。
- 张新玉李冰李昕朱博侯永永薛鹏孙贵范
- 关键词：亚砷酸钠CHANG
- 叔丁基对苯二酚对亚砷酸钠致Chang liver细胞毒性的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2)致Changliver细胞毒性的影响。方法Changliver细胞培养48h后分别以20、40、60和80μmol/L的NaAsO2染毒24和48h,作为NaAsO2单独作用组。以5和20μmol/L的tBHQ预处理Chang liver细胞24h,以40和60μmol/L的NaAsO2染毒24和48h,作为tBHQ预处理组;对照组处理同NaAsO2单独作用组。每个浓度设3个复孔。用Alamar Blue法检测细胞活力。结果NaAsO2单独作用24和48h组Alamar Blue还原率显著下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);且NaAsO2单独作用48h组的Alamar Blue还原率均显著低于24h组,差异有统计学意义(P<0.01)。5μmol/L的tBHQ预处理组与对应的60μmol/LNaAsO2单独作用24h组相比,显著提高了Alamar Blue还原率(P<0.01);20μmol/L的tBHQ预处理组的AlamarBlue还原率均显著高于相对应NaAsO2单独作用24h组(P<0.05)。5μmol/L的tBHQ预处理组的Alamar Blue还原率均显著高于相对应NaAsO2单独作用48h组(P<0.01);20μmol/L的tBHQ预处理组与对应的40μmol/LNaAsO2单独作用48h组相比,显著提高了Alamar Blue还原率(P<0.01)。结论tBHQ能够降低NaAsO2致Changliver细胞的毒性,增强细胞对NaAsO2毒性的抵抗能力。
- 朱博李冰张新玉李昕孙贵范
- 关键词：亚砷酸钠叔丁基对苯二酚CHANG
- 叔丁基对苯二酚对亚砷酸钠致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨叔丁基对苯二酚（tBHQ）对亚砷酸钠（NaAsO：）致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用。方法Chang肝细胞用tBHQ[0（对照）、5、25Ixmol／L]预处理24h，再用5Ixmol／LtBHQ和NaAs02[O（对照）、30、40、50、60μmol／L]共同作用24h，采用刃天青钠（Alamarblue）还原法检测细胞活力，结果用实验组Alamarblue还原率与对照组Alamarblue还原率的相对比值表示；Chang肝细胞用tBHQ[0（对照）、5、25μmol／L]预处理24h，再用5μmol／LtBHQ和NaAs02[0（对照）、40、50μmol／L]共同作用24h，采用荧光探针2’，7＇-二乙酰二氯荧光素（DCFH—DA）检测细胞内活性氧（ROS）的生成，结果用实验组平均荧光强度与对照组平均荧光强度的相对比值表示。结果30、40、50、60μmol／L的NaAsO：暴露能够显著降低细胞活力，而tBHQ预处理（5、25μmol／L）则可明显恢复细胞活力，NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为566．57、55．09、14．50，P均〈0．05）；5、25μmol／LtBHQ预处理的30、40、50、60Ixmol／LNaAs02组细胞活力（0．75±0．02、0．70±0．04、0．59±0．03、0．43±0．03和0．75±0．02、0．734-0．03、0．654-0．02、0．50-t-O．02）较相应NaAs02单独作用组（0．70±0．03、0．644-0．03、0．43±0．03、0．33±0．01）显著升高（P均〈0．05），25μmol／LtBHQ预处理的50、60μmol／LNaAsO2组细胞活力高于相应5μmol／LtBHQ预处理组（P均〈0．05）。40、50μmol／L的NaAsO2能显著诱导Chang肝细胞内ROS的产生，而tBHQ预处理（5、25μmol／L）则可使NaAs02诱导产生的细胞内ROS水平显著下降，NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为181．78、60．55、4．93，P均〈0．05）；5、25μmol／LtBHQ预处理的40、50μmol／LNaAs02组细胞内ROS水平（1．87±0．09、1．80±0．07和1．36±0．1l、1．44±0．12）较相应NaAs02单独作用�
- 李冰李昕朱博张新玉邢晓越刘丹王欣孙贵范
- 关键词：亚砷酸盐类叔丁基对苯二酚活性氧
- 叔丁基对苯二酚对Chang肝细胞无机砷甲基化代谢的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)对Chang肝细胞无机砷甲基化代谢的影响。方法将Chang肝细胞密度调整为1×105个/ml,采用25μmol/L tBHQ溶液预处理24 h后,再用5μmol/L的tBHQ溶液和0.1、0.5、1.0和5.0μmol/L亚砷酸钠溶液联合染毒24 h;并采用0.1、0.5、1.0和5.0μmol/L亚砷酸钠溶液单独染毒24 h;并设溶剂对照(三蒸水)。采用超低温捕集-氢化物发生-原子吸收分光光度法分别测定细胞内和培养液中的无机砷(inorganicarsenic,iAs)、一甲基砷(monomethylated arsenic,MMA)和二甲基砷(dimethylated arsenic,DMA)含量,并计算一甲基化率(primary methylation index,PMI)和二甲基化率(secondary methylation index,SMI)。结果随着亚砷酸钠染毒剂量的增加,亚砷酸钠单独染毒组和tBHQ+亚砷酸钠染毒组Chang肝细胞内tAs和iAs含量及Chang肝细胞和培养液中的总MMA含量均升高;亚砷酸钠单独染毒组细胞+培养液总DMA含量之间无差异;tBHQ+亚砷酸钠染毒组细胞+培养液总DMA含量呈上升趋势;0.5μmol/L亚砷酸钠单独染毒组和tBHQ+亚砷酸钠染毒组细胞+培养液中的PMI最高,然后随着亚砷酸钠染毒浓度的升高而逐渐降低;亚砷酸钠单独染毒组细胞+培养液中的SMI呈逐渐降低,而tBHQ+亚砷酸钠染毒组细胞+培养液中的SMI呈逐渐升高趋势。此外,与相同浓度的亚砷酸钠单独染毒组比较,tBHQ+0.5,1.0、5.0μmol/L亚砷酸钠染毒组Chang肝细胞内的tAs和iAs含量较低(P<0.05),而细胞+培养液中总DMA含量、PMI和SMI则较高(P<0.05)。结论高浓度砷暴露能够抑制砷的二甲基化过程;而tBHQ预处理能够增加砷的甲基化代谢,降低肝细胞内砷含量,从而增强Chang肝细胞对无机砷暴露的解毒能力。
- 李冰李昕朱博刘博莹王达刘丹邢晓越孙贵范
- 关键词：叔丁基对苯二酚无机砷甲基化
- 无机砷对Chang肝细胞核转录因子Nrf2及其下游抗氧化酶mRNA表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察亚砷酸钠(NaAsO2)对Chang肝细胞株核转录因子Nrf2及Nrf2调控的下游抗氧化酶醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)mRNA表达的影响。方法分别以不同浓度NaAsO2(5、10、25和50μmol/L)染毒人类Chang肝细胞株6h,采用RT-PCR法测定Nrf2、NQO1和HO-1的mRNA表达水平。结果 5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露6h,Nrf2的mRNA表达分别为对照组的(100.74±3.70)%、(105.96±1.75)%、(101.76±1.01)%和(101.81±6.33)%,与对照组比较,差异未见统计学意义(P>0.05);各暴露组NQO1的mRNA表达均较对照组相比显著增加(P<0.05),分别为对照组的(106.52±3.11)%、(113.27±2.84)%、(111.96±6.96)%和(107.33±2.76)%;NaAsO2暴露还能够显著诱导HO-1的mRNA表达增强,且具有剂量-效应关系,差异具有统计学意义(P<0.01)。5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露,HO-1的mRNA表达分别为对照组的(186.92±1.75)%、(194.08±2.75)%、(196.93±2.55)%和(200.02±0.83)%。结论无机砷暴露未显著增强Chang肝细胞核转录因子Nrf2的转录,却能够显著提高Nrf2调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的mRNA表达水平。
- 李冰李昕张新玉朱博刘丹邢晓越王欣马莹孙贵范
- 关键词：砷亚砷酸钠肝细胞
