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长期培养的黄瓜毛状根中外源基因遗传稳定性分析被引量：6: 2012年; 对在固体培养基上培养3年的黄瓜转gfp基因毛状根进行gfp和rol位点系列基因的PCR扩增、gfp的荧光定量PCR、Western blot杂交以及荧光观察分析。结果显示,由组成型启动子35S驱动的gfp在转录水平上能正常表达,而且能够翻译出编码蛋白;此外,培养3年后的毛状根,能扩增出与毛状根形态构成有关的rol系列基因。本研究结果表明长期培养的毛状根能保持其遗传稳定性,这为利用毛状根长期工厂化生产外源基因表达的蛋白产物和药用植物的活性成分提供了理论依据。; 曹庆丰向太和孟莎莎王沙沙陆文怡; 关键词：黄瓜毛状根基因稳定性

发根农杆菌K599对菊花活体转化及其高效再生被引量：6: 2011年; 发根农杆菌K599侵染菊花无菌苗刻伤的叶片形成转基因不定根,生根频率为88.0%;不定根经过诱导培养形成愈伤组织,并再生完整植株,愈伤组织诱导率和分化率分别为75.0%和63.3%。诱导的不定根和再生植株经过PCR鉴定含有K599 Ri质粒中的rolC基因,qRT-PCR检测显示rolC基因在再生转基因植株中实现了正常表达。再生植株表现出矮缩、多毛状根特征,并能正常开花。建立的利用活体材料直接作为发根农杆菌K599侵染的受体诱导不定根的遗传转化体系,能克服假阳性不定根的出现;同时,利用不定根繁殖过程中顶端生长点区域无菌的特点,通过截取不定根顶端靠近生长点区域进行继代培养,结合使用头孢霉素杀菌,能达到有效抑制和杀灭农杆菌的目的,在随后的不定根诱导愈伤及分化过程中无须再使用抗生素杀菌,提高了转基因再生效率,为菊花的矮化育种和目标基因的转移提供了良好的试验体系。; 向太和王琳蒋欢田璟鸾; 关键词：菊花发根农杆菌不定根

一种利用黄瓜苗繁殖根结线虫的方法被引量：4: 2011年; 为建立繁殖根结线虫的新方法,利用黄瓜实生苗为宿主,在透明的玻璃瓶中成功繁殖了南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫,为有效分离根结线虫提供了一条新途径.该方法不仅丰富了繁殖根结线虫的宿主,而且便于随时观察线虫侵染根形成根结的动态过程,也避免了在繁殖过程可能造成线虫逃逸对周围土壤的污染问题.; 孟莎莎向太和程慢成; 关键词：黄瓜根结线虫繁殖

矮牵牛矮小突变体Pdrawfl的初步分析: 从矮牵牛QL01自交结实的后代中获得了一个自然突变体,植株矮小,尤其是花特别小,但种子大小与亲本未见差异,将该突变体命名为Petunia hybrida drawfl(简称:Pdrawfl)。将矮牵牛突变体Pdrawfl...; 向太和张婷张粒; 关键词：矮牵牛突变体; 文献传递

黄瓜多抗自交系NC-46转基因不定根的高频诱导及其cDNA文库的构建被引量：1: 2010年; 利用发根农杆菌K599(带有质粒pBIN-35S-GFP),以具有抗爪哇根结线虫和花生根结线虫等多种抗性基因的黄瓜自交系NC-46离体子叶为外植体,高效诱导出转基因不定根(诱导率达76.7%);并在此基础上成功构建了转基因不定根的cDNA文库。构建的cDNA文库重组率为98.3%,原始库容量达2.02×106cfu,其中基因的完整性比率为47.6%,Unigene比例为66.7%。选用转基因不定根构建根的cDNA文库,克服了实生苗难以获得大量均一状态根的缺陷;克服了实生苗根受到土壤根际微生物、线虫等对根生理状态的影响以及对提取RNA的污染问题;利用改良的SmartcDNA文库构建法,获得的文库克隆含有完整的5′端非翻译区的全长cDNA;此外,构建的文库由于利用改良的pUC19载体替代了λTripIEx2噬菌体载体,获得的克隆无需再将插入到噬菌体载体上的cDNA转染到质粒载体,可直接用于杂交和测序筛选,因此在基因克隆筛选时更加方便。; 孟莎莎向太和王琳; 关键词：黄瓜转基因毛状根 CDNA文库

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浙江省自然科学基金(Y3080184)