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国家自然科学基金(30600528)

作品数:7 被引量:5H指数:2
相关作者:李俊明万腊根王娜罗清张才成更多>>
相关机构:南昌大学第一附属医院重庆医科大学更多>>
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相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生

主题

  • 3篇细胞
  • 3篇巨噬细胞
  • 3篇核酶
  • 3篇10-23脱...
  • 2篇结核
  • 2篇分枝杆菌
  • 2篇杆菌
  • 2篇DNA
  • 2篇耻垢
  • 2篇耻垢分枝杆菌
  • 2篇催化
  • 2篇催化性
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质类
  • 1篇电穿孔
  • 1篇亚单位疫苗
  • 1篇疫苗
  • 1篇脂质体
  • 1篇治疗性

机构

  • 5篇南昌大学第一...
  • 1篇重庆医科大学

作者

  • 5篇李俊明
  • 4篇万腊根
  • 3篇罗清
  • 3篇王娜
  • 2篇张才成
  • 1篇何永林
  • 1篇朱道银
  • 1篇黄自坤
  • 1篇杨春
  • 1篇方乐
  • 1篇李娜

传媒

  • 2篇中华医学杂志
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇Chines...
  • 1篇国际免疫学杂...
  • 1篇国际生物制品...

年份

  • 1篇2011
  • 2篇2010
  • 1篇2009
  • 2篇2008
7 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
Isocitrate lyase from Mycobacterium tuberculosis promotes survival of Mycobacterium smegmatis within macrophage by suppressing cell apoptosis被引量:2
2008年
Background Isocitrate lyase (ICL) was previously demonstrated to play a pivotal role in the intracellular metabolism of Mycobacterium tuberculosis (MTB). Presently several lines of evidence suggest that ICL from MTB (MTB-ICL) may play some roles in the interaction between MTB and host macrophage. However, there has been no research on the interaction between MTB-ICL and host macrophage.Methods MTB-icl and M. smegmatis (MS)-icl genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into the E. coli-mycobacterium shuttle plasmid pUV15 to obtain recombinant shuttle plasmids pMTB-icl and pMS-icl. Following transformation into MS by electroporation, the expression of pMTB-icl and pMS-icl was verified by reverse transcriptase (RT)-PCR. The expression of recombinant plasmids derived from pUV15 when rMS was phagocytized by macrophage was also verified via fluorescence microscope. Ms 1-2c, rMS-pUV15, rMS-pMS-icl and rMS-pMTB-icl were used to infect RAW264.7 cells and the survival of intracellular MS was monitored by bacterial culture at 0, 24 and 48 hours after infection. The culture supernatants from macrophage infected by Ms 1-2c, rMS-pUV15, rMS-pMS-icl and rMS-pMTB-icl were collected and the interferon (IFN)-y and nitric oxide (NO) concentrations were measured by ELISA or by Griess assay, respectively. The apoptosis of macrophage was assayed by the in situ TUNEL technique.Results RT-PCR showed that both pMTB-icl and pMS-icl could be expressed in MS. Fluorescence microscopic observation showed that recombinant plasmids derived from pUV15 (pUV15-iG) could also be expressed in MS when MS were phagocytized by macrophage. Bacterial culture data demonstrated that rMS-pMTB-icl exhibited significantly increased intracellular survival in the murine macrophage cell line RAW264.7 compared with Ms 1-2c, rMS-pUV15 and rMS-pMS-icl. This increased intracellular survival was not accompanied by the upregulation of IFN-y and NO in host macrophage. But a lower apoptosis rate of macrophages
LI Jun-ming,LI Na,ZHU Dao-yinWAN La-genHE Yong-linYANG Chun
关键词:MACROPHAGE
结核病治疗性疫苗的研究进展被引量:3
2010年
耐药结核分枝杆菌的出现以及由于免疫功能失衡导致的免疫耐受是阻碍结核病有效治疗的两个重要原因。治疗性疫苗能通过对已感染结核分枝杆菌的机体产生二次免疫激发,打破机体的免疫耐受,诱导保护性免疫应答而达到清除结核分枝杆菌的目的。目前,结核病治疗性疫苗研究主要集中在DNA疫苗、亚单位疫苗、减毒活疫苗和死疫苗上。因其可纠正机体失衡的免疫状态,且对耐药性的结核分枝杆菌可产生同样的清除作用,所以,近年来结核病治疗性疫苗逐渐受到人们的关注和重视并取得了较大发展。
王娜李俊明
关键词:治疗性疫苗DNA疫苗亚单位疫苗减毒活疫苗死疫苗
10-23脱氧核酶体内转染方法研究进展
2010年
10-23脱氧核酶(10-23 DNAzyme,10-23DZ)是近年来利用体外分子进化技术筛选得到的一种具有催化功能的单链DNA分子,能高效、特异催化RNA特定部位的切割反应,实现mRNA水平的基因沉默。目前,10-23DZ已被广泛应用于肿瘤、动脉粥样硬化、感染性疾病等的治疗研究,逐渐成为基因治疗研究的重要手段。如何将其有效地导人机体是10—23DZ进入临床应用的关键问题之一。目前,已有多种递送载体和方法用于10-23DZ的体内转染,如直接注射、电穿孔、脂质体、纳米颗粒、体内表达等。
罗清李俊明万腊根
关键词:DNA催化性电穿孔脂质体
结核分枝杆菌异柠檬酸裂合酶对耻垢分枝杆菌胞内存活的影响及相关机制
2008年
目的明确结核分枝杆菌(MTB)异柠檬酸裂合酶(ICL)对耻垢分枝杆菌(MS)在巨噬细胞内存活的影响,并初步探讨其可能的机制。方法构建MTB—icl基因的穿梭表达质粒pUV15-icl,电转化法导入MS中后检测MTB—ICL在MS中的表达。分别用rMS—pUV15-icl和rMS-pUV15感染鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,于感染一定时间后测定细胞内存活的细菌数,评价MTB.ICL对MS在巨噬细胞内存活的影响。分别留取上述两组巨噬细胞的培养上清液,检测干扰素γ(IFN-γ)和一氧化氮(NO)的水平,同时采用原位TUNEL技术检测两组巨噬细胞的凋亡水平,探讨MTB-ICL对MS在巨噬细胞内存活影响的可能机制。结果RT—PCR、Western印迹和荧光显微镜检测结果证实MTB-ICL可在MS中有效表达。与rMS-pUV15比较,rMS—pUV15-icl在巨噬细胞内的存活率明显高(P〈0.01),感染后24h和48h,其菌落数分别为(32.78±2.90)×10^3和(23.33±2.34)×10^3,而rMS—pUV15菌落数分别为(14.67±2.45)×10^3和(2.28±0.25)×10^3。MTB-ICL对巨噬细胞产生IFN-γ和NO没有明显影响。原位凋亡检测结果显示,与rMS—pUV15感染组比较,rMS-pUV15-icl感染组巨噬细胞的凋亡水平明显下降。结论MTB-ICL可促进MS在巨噬细胞内的存活,其机制之一可能是抑制宿主巨噬细胞的凋亡。
李俊明万腊根朱道银李娜何永林杨春
关键词:分枝杆菌结核耻垢巨噬细胞
新型10-23脱氧核酶表达载体的构建及其效能研究
2009年
目的构建一种新型10-23脱氧核酶(DZ)真核表达载体,并鉴定其在细胞内表达10—23DZ的能力以及10-23DZ抑制巨噬细胞TACO表达的效果。方法设计1条寡脱氧核糖核苷酸ODN—PSL,其序列包含鼠莫洛尼白血病病毒逆转录酶(MLV—RT)的引物结合序列、1个多克隆酶切位点(MCS)及1个逆转录终止信号序列。将ODN—PSL插入框架质粒pBUDCE4.1中启动子PCMV的下游,获取重组质粒pBUD—PSL。将MLV—RT的编码基因克隆至pBUD—PSL中另一启动子PEF-1a的下游,构建重组质粒pSDE01。将pSDE01转染入鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,采用RT—PCR方法鉴定细胞中MLV-RT的表达及其表达产物的逆转录酶活性。通过计算机软件模拟巨噬细胞TACOmRNA的二级结构,以此确定10-23DZ的作用靶位并设计一相应的10—23DZ——DZ1,将DZ1表达序列插入pSDE01中ODN—PSL的MCS中,获取重组表达载体pSDE01-DZ1。将pSDE01-DZ1转染入RAW264.7细胞,并设未转染对照组。转染后48h,采用PCR法和斑点杂交方法鉴定DZ1在细胞中的表达;并分别采用半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测TACO mPNA和蛋白的表达,各组实验均独立重复3次。结果限制性内切酶酶切及测序结果显示pSDE01构建成功,将其转染入RAW264.7细胞后检测到MLV-RT的表达,而且表达产物具有逆转录酶活性。pSDE01-DZ1转染入RAW264.7细胞后48h,PCR和斑点杂交方法均检测到DZ1的表达;半定量RT-PCR和蛋白质印迹检测结果显示,与未转染组相比,pSDE01-DZ1转染后48h巨噬细胞TACOmRNA表达水平下降了77.7%(0.193±0.008比0.864±0.005,P〈0.05),TACO蛋白表达量下降了73.3%(0.114±0.051比0.427±0.043,P〈0.05)。结论成功构建了一种操作简便的新型10—23DZ表达载体,所携带的特异性10-23DZ可在细胞内有效表达,并抑制相应靶基因的表达。
李俊明万腊根张才成王娜罗清
关键词:微丝蛋白质类巨噬细胞
构建及鉴定TACO特异性10-23DRz表达载体重组耻垢分枝杆菌
2011年
目的 构建一种可表达特异性10-23脱氧核酶(deoxyribozyme,DZ)的巨噬细胞靶向性细菌载体疫苗,并鉴定其在巨噬细胞表达10-23DZ的能力以及抑制靶基因表达的效果.方法 采用亚克隆方法将分枝杆菌复制子oriM克隆入10-23DRz真核表达载体pSDE01中,获取可在分枝杆菌和真核细胞中穿梭的重组质粒pSDE02.在前期研究基础上选择一有效的针对巨噬细胞taco基因的10-23DZ--DZ1,根据DZ1序列设计并制备DZ1的双链表达序列,插入pSDE02中获取重组质粒pDZM01.将pDZM01经电穿孔方法转化入耻垢分枝杆菌Ms1-2c株构建重组耻垢分枝杆菌rMS-DZ1.分别采用Ziehl-Heelson染色法和直接荧光观测法鉴定重组耻垢分枝杆菌的巨噬细胞靶向性.用rMS-DZ1感染巨噬细胞株RAW264.7,分别于感染后的24 h和48 h采用斑点杂交方法检测rMS-DZ1在巨噬细胞中表达DZ1的情况,再分别采取RT-PCR和免疫印迹方法检测巨噬细胞TACO表达的差异.结果 限制性内切酶酶切、菌落PCR及测序结果显示pSDE02、pDZM01和rMS-DZ1构建成功.rMS-DZ1感染RAW264.7细胞后24 h和48 h,经点杂交方法均检测到了DZ1的表达.半定量RT-PCR和免疫印迹检测结果显示,与未感染组比较,rMS-DZ1感染后24 h和48 h时巨噬细胞TACOmRNA分别下降了67.90%和57.14%,TACO蛋白水平分别下降了53.85%和68.92%.同时,表达对照寡脱氧核糖核苷酸DZ1U的重组耻垢分枝杆菌rMS-DZ1U感染RAW264.7细胞后,其TACOmRNA和TACO蛋白水平与未感染组比较均无明显差异.结论 本研究成功构建了一种可表达特异性10-23DZ的巨噬细胞靶向性重组耻垢分枝杆菌的载体,可在巨噬细胞内表达并抑制相应靶基因的表达,可作为研制治疗用疫苗的基础,这也是国内外首次报道可表达10-23DZ的细菌性载体.
李俊明王娜罗清方乐黄自坤万腊根张才成
关键词:10-23脱氧核酶重组耻垢分枝杆菌巨噬细胞
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