国家高技术研究发展计划(SQ2007AA10XK140067) 作品数:6 被引量:20 H指数:3 相关作者: 陈由强 陈如凯 叶冰莹 林荣华 何文锦 更多>> 相关机构: 福建师范大学 中华人民共和国农业部 福建农林大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 福建省科技厅资助项目 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
甘蔗双低频酶cDNA-AFLP体系的优化 被引量:2 2010年 目的:建立一个适合于甘蔗(Saccharum officenarum)为研究材料的cDNA-AFLP反应的优化体系。方法:用Rever-tAidTM First Strandc DNA Synthesis Kit反转录获得第一链,用Rnase H、E.coliDNA聚合酶Ⅰ和E.coliDNA连接酶合成双链cDNA,用双低频酶EcoRⅠ和PstⅠ对dscDNA酶切,连接,预扩增,和选择性扩增的关键因素进行分析。结果:500ng的dscDNA双酶切5h,将16℃过夜连接的产物稀释1倍用作预扩增的模板,预扩增产物稀释50倍作为选择性扩增模板,6%聚丙烯酰胺凝胶检测及银染,扩增条带均匀分布,清晰可辨且主要分布在200~2000bp之间。结论:该体系具有稳定性高,重复性好等优点,可用于甘蔗cDNA-AFLP分析。 郭静 林荣华 胡薇 陈由强 陈如凯关键词:甘蔗 CDNA-AFLP 甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因中间缺失突变体的构建 被引量:1 2010年 根据NCBI中EU278617序列设计引物,利用甘蔗SPSG2菌液为模板,扩增SPS8-11并克隆到T载体后测序.通过排除野生型DNA的定点突变PCR方法获得SPS8-11中第8内含子缺失TGCATG的突变体pMD-SPS8-11-A,酶切后测序鉴定.成功构建了甘蔗SPS8-11中间缺失突变体pMD-SPS8-11-A. 宋喜梅 叶冰莹 林荣华 代容春 何文锦 陈由强 陈如凯关键词:定点突变 甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因启动子遗传转化烟草的研究 被引量:5 2010年 蔗糖磷酸合成酶(Sucrose Phosphate Synthase,SPS)是调节甘蔗蔗糖合成的关键酶之一.根据课题组已经构建的甘蔗SPS5侧翼序列驱动GUS表达的载体,通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法,转化模式植物烟草,获得26棵抗性植株.抗性植株的PCR结果表明,获得3株转基因植株.GUS染色分析说明,SPS的5侧翼序列可以驱动GUS基因表达,SPS的5侧翼序列具有启动子活性. 高玉娜 林荣华 周平 叶冰莹 陈由强 陈如凯关键词:启动子 GUS 转基因 甘蔗SPSⅢ内含子地高辛探针的制备及检测 2010年 以甘蔗SPS基因选择性剪接保留的内含子6,7,8片段为靶序列,利用PCR扩增技术分别制备出3种地高辛标记的SPS内含子探针:SPS-intron 6探针167 bp,SPS-intron 7探针93 bp和SPS-intron8探针175 bp,并通过斑点杂交实验表明这3种探针灵敏度高,都能检测到pg级的靶核酸,且特异性好,阴性对照实验显示无杂交信号. 许云珍 林荣华 何文锦 吴自明 陈由强 陈如凯关键词:地高辛标记探针 斑点杂交 甘蔗叶片总蛋白提取及双向电泳条件的改进 被引量:9 2008年 针对甘蔗叶片中含有大量酚类和色素等干扰物质的现象,通过对甘蔗叶片蛋白样品制备、上样量和电泳条件等方面做了必要改进,建立了一套适用于甘蔗叶片蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法。 郭晋隆 叶冰莹 黄庆煌 陈由强 陈如凯关键词:甘蔗 蛋白质组 双向电泳 甘蔗蔗糖磷酸合成酶磷酸化位点的突变及相应表达载体的构建 被引量:4 2010年 用Clontech公司的定点突变试剂盒TransformerTMSite-Directed Mutagenesis Kit对克隆载体pMD18T-SPS3L上的SPS基因SPS3L进行定点突变,使其459位的丝氨酸密码子分别突变为编码苏氨酸、丙氨酸和谷氨酸的密码子。然后将突变后的和未突变的SPS3L基因分别克隆至表达载体质粒pCAMBIA1301中,构建重组质粒pCAMBIA1301-SPS3L。经测序鉴定,对SPS3L基因的定点突变成功,构建表达载体pCAMBIA1301-SPS3L成功。 胡巍 张积森 叶冰莹 陈由强 陈如凯关键词:甘蔗 磷酸化位点 定点突变