国家自然科学基金(30300260)
- 作品数：13 被引量：22H指数：3
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- 寄生性原虫病毒研究进展
- 2005年
- 刘全张西臣
- 关键词：寄生性原虫病毒研究蓝氏贾第鞭毛虫艾美尔球虫利什曼原虫原虫学
- 犬贾第虫病毒转染载体介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内的表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体。方法根据GCV基因组(DQ238861)的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件,将绿色荧光蛋白(GFP)基因替换GCV基因部分编码区,构建GCV基因与GFP基因的嵌合体,并置T7启动子之下。用T7 RNA聚合酶体外转录后经电穿孔转染犬贾第虫滋养体,并用荧光显微镜检测GFP表达情况,间接ELISA测定转染后GFP的表达量。结果构建了犬贾第虫病毒重组质粒pGCV634/GFP/GCV2174,经SacⅠ和NotⅠ双酶切得到约2.0和3.5 kb两条带,与预计值相符。由其介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内得到了高效表达,其表达量在转染后第1天达高峰(A490=1.8);以后随时间的延长而逐渐下降,14 d后绿色荧光信号基本消失。结论成功构建了犬贾第虫病毒转染载体,为贾第虫细胞基因表达调控的研究提供了方法。
- 陈丽凤李建华刘全赵月平曹利利张西臣
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 犬贾第虫携病毒株体外纯培养的建立被引量：5
- 2006年
- 目的培养一携带犬贾第虫病毒的犬贾第虫(Giardiacanis)细胞株。方法用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗过滤法纯化犬贾第虫包囊,经口接种5日龄长爪沙鼠(Merionesunguiculata),8d后于其十二指肠无菌收集犬贾第虫滋养体,置改良的TYI-S-33培养基中培养,待滋养体在培养管壁上形成细胞单层后进行传代。同时进行冻存和复苏实验,以及纯度、稳定性、细胞生物学特性、微生物污染等4项指标检测。滋养体经液氮冻融3次后3000×g离心15min,取上清,用磷钨酸负染,透射电镜观察病毒粒子。结果犬贾第虫滋养体接种14d后虫体逐渐适应了培养环境,在培养管壁上形成细胞单层,经上述4项指标检测,证明形成了稳定的犬贾第虫细胞株。电镜观察,见滋养体内有外观球形呈20面体结构、直径约为36nm的病毒样粒子。结论建立了携带GCV的犬贾第虫细胞株的体外纯培养。
- 陈丽凤李建华张西臣刘全赵月平曹利利
- 关键词：体外培养
- The Esitablishment of Cell Line ,Cloning and Prokaryotic Expression of MM/Sac-C/1 Gene of Giaraia canis
- ＜正＞Giardia lamblia which invade human and mammal can be classified into G.bovis, G.canis, G.caprae and G.cali ...
- Yongjun Zhao
- 文献传递
- 犬贾第虫纯培养的建立被引量：6
- 2005年
- 将取自一1岁自然感染犬贾第虫的雌性、德国牧羊犬的包囊利用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗滤过法进行分离和纯化,经口感染给10日龄的沙鼠幼鼠,8 d后无菌取其小肠上段,分离出滋养体,转入改良TYS-I-33培养基中进行培养,在驯化5个月之后,虫体逐渐适应了培养环境,在管壁上形成了细胞单层并进行传代,每隔48～72 h传代1次,共传18代.将培养物置肉汤及血琼脂平板培养,未见细菌及霉菌污染,为纯培养.
- 赵永军张西臣刘全李建华尹继刚杨举吴涛
- 关键词：纯培养
- 检测蓝氏贾第鞭毛虫病毒表达的绿色荧光蛋白间接ELISA方法的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立蓝氏贾第鞭毛虫病毒(GLV)介导的绿色荧光蛋白(GFP)表达定量检测方法,为GFP在寄生性原虫病毒研究中的应用奠定基础。方法以GFP兔抗血清为一抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔血清为二抗,建立GFP定量检测的间接ELISA方法。结果定量检测GFP的间接ELISA方法最适反应条件为以10%正常胎牛血清作为封闭剂,一抗的最佳稀释度为1∶3200,二抗的最佳稀释度为1∶1600。结论以GFP兔抗血清为一抗成功建立GFP定量检测的间接ELISA方法,检测结果能正确反映GLV介导的GFP表达情况。
- 刘全张西臣李建华尹继刚赵永军
- 关键词：绿色荧光蛋白ELISA
- 蓝氏贾第虫病毒体外转录体转染条件的研究
- 2005年
- 目的 确定蓝氏贾第虫病毒体外转录体电穿孔转染的最佳条件。方法 以不同的电击缓冲液、电压及脉冲时间应用GLV和GFP嵌合体体外转录体电穿孔转染蓝氏贾第虫,测定转染虫体的存活率及GFP表达量。结果 在不同转染条件下GLV和GFP嵌合体体外转录体均能成功转染蓝氏贾第虫,且在cytomix缓冲液、10 0 0V/cm、8ms电击条件下,对虫体损伤最小,GFP表达量最高。结论 本试验确定的蓝氏贾第虫病毒体外转录体电穿孔转染最佳条件是电击缓冲液为cytomix缓冲液,电压为10 0 0V/cm、脉冲时间为8ms。
- 刘全张西臣李建华尹继刚赵永军
- 关键词：电穿孔绿色荧光蛋白ELISA
- 犬贾第虫病毒(长春株)全基因组序列分析被引量：2
- 2006年
- 根据已报道的人源蓝氏贾第虫病毒序列设计了互相重叠的6对特异性引物,以犬贾第虫(长春株)纯培养滋养体总核酸为模板进行RT-PCR。PCR产物连接到pMD18-T载体进行测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAMAN分子生物学软件进行分析。结果测得我国犬贾第虫病毒(长春株)基因组全长为6 276bp(DQ238861),编码1个有887个氨基酸残基的衣壳蛋白和1 056个氨基酸残基的融合蛋白,这2个阅读框被-1核糖体移码框分开,重叠处有220 nt。基因组中G+C占49.62%。其序列与国外报道的人源蓝氏贾第虫病毒(L13218)序列同源性为94.62%,编码的氨基酸同源性为93.50%;与国内人源蓝氏贾第虫病毒(AF525216)序列同源性为98.88%,编码的氨基酸同源性为98.30%。
- 陈丽凤李建华张西臣刘全赵月萍曹利利陈超
- 关键词：全长CDNA序列基因组
- 犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体切割效果的研究被引量：1
- 2007年
- 目的检测犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对犬贾第虫滋养体核仁功能性蛋白KRR1基因体外转录体切割效率。方法将两端携带反义KRR1基因的锤头状核酶(ribozyme,R酶)插入犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体中,构建两个核酶嵌合型犬贾第虫病毒载体:短反义序列,上游及下游均为21个碱基,形成重组质粒KRzS;长反义序列,上游为288个碱基,下游为507个碱基,形成重组质粒KRzL。另设两种阴性对照,即重组质粒TRzL(即R酶两端含虫体反义磷酸丙糖异构酶基因,上游为324个碱基,下游为380个碱基)和重组质粒PKR(即犬贾第虫病毒转染载体中仅有KRR1基因的反义片段而无R酶功能区)。应用荧光实时定量RT-PCR法检测嵌合型锤头状核酶体外对KRR1基因mRNA切割活性。结果KRzS、KRzL转录体对KRR1基因体外转录RNA切割效率分别达到74.0%和81.1%。而PKR对KRR1 mRNA反转录的影响较小,RT-PCR效率仅降低12.0%。TRzL对KRR1 mRNA反转录几乎无影响。结论犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体能进行有效切割,为以后的体内锤头状核酶对KRR1基因表达抑制试验提供依据。
- 陈丽凤李建华邹亚学赵月平曹利利张西臣
- 关键词：锤头状核酶
- Identification,Full-length cDNA Construction and Expression of Part Coat Protein Gene of Giardiavirus in Giardia lamblia Isolated from Human in China
- ＜正＞Giardiavirus were discovered firstly in Giardia lamblia isolated from human in China.The characterization o...
- Zongzheng Tian
- 文献传递
