天津市科技发展战略研究计划项目(033182911)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 治疗性基因沉默在神经系统疾病中的研究
- 2006年
- 唐晓燕汤华
- 关键词：RNA干扰神经系统疾病基因沉默
- MicroRNA在6种肿瘤细胞中的表达差异被引量：10
- 2007年
- 目的:利用生物芯片技术分析6种不同器官肿瘤细胞中microRNA(miRNA)的表达差异。方法:将210个与已知人类和小鼠miRNA互补的序列(206个miRNA,4个阳性对照)作为探针,点于玻片上制备寡核苷酸芯片。提取肿瘤细胞HeLa(人宫颈癌上皮细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、A549(人肺腺癌细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、ES-2(人卵巢透明细胞癌)、K562(人慢性髓细胞性白血病细胞)的miRNA,荧光染料Cy3标记,并与制备好的芯片杂交;用ScanArrayTM Express1.0扫描仪扫描荧光信号,采用ScanArray3.0和Cluster3.0软件分析处理扫描结果;Northern blotting和RT-PCR方法对芯片检测结果进行验证。结果:在6种不同器官肿瘤细胞中,检测到115种miRNA存在差异,91种miRNA没有明显差异;其中,miR-21在6种肿瘤细胞表达水平均较高,miR-125b表达水平均较低,let-7不同亚型在6种细胞系中表达水平较低;miR-17-5p和miR-20a呈集簇表达,在卵巢肿瘤ES-2细胞中的表达水平高于其他细胞,乳腺肿瘤细胞系MCF-7和宫颈癌细胞系HeLa的miRNA表达谱聚为一类。Northern blotting检测到miR-17-5p及其前体在K562细胞中均见表达,A549和ES-2细胞中只见较弱的前体表达,MCF-7、HeLa和HT-29中可见明显的前体和较弱的成熟miRNA的表达。RT-PCR检测到miR-17-5p前体在K562细胞中表达水平高于其他几种细胞,在ES-2细胞中的表达量低于K562细胞,同时高于另外4种细胞;miR-21在6种肿瘤细胞中表达水平均较高,在A549细胞中表达最高。结论:应用生物芯片技术检测肿瘤细胞中miRNA的表达差异为进一步探索miRNA与肿瘤间的关系奠定基础。
- 马卓娅汤华李欣刘民吴海东王晶
- 关键词：MICRORNA肿瘤细胞寡核苷酸芯片
- 喉癌发生相关特异基因筛选与验证被引量：4
- 2007年
- 为了检测喉鳞状细胞癌相关的基因表达变化特征,筛选与喉癌发生相关的特异基因.从3名患者体内分别取正常喉上皮组织和喉鳞状细胞癌组织.应用基因芯片技术进行基因表达差异分析及系统聚类分析,并进行半定量RT-PCR验证部分基因芯片结果.本实验基因芯片包括7267条探针,其中,在3对样本中,表达发生显著差异的基因共有94条,有31条上调,63条下调,并且系统聚类分析将正常和癌组织各分为一类,半定量RT-PCR结果与芯片结果一致.实验表明,细胞的代谢、生长、信号传递相关基因(如RAN、PDCD10、zyxin、TACSTD1等)参与了喉癌的发生、发展,并可能扮演了重要角色.
- 吴海东汤华王晶刘民李欣
- 关键词：喉癌基因芯片表达谱
- cDNA基因芯片对人胶质瘤组织原发性耐药相关基因的筛查被引量：3
- 2008年
- 目的:利用cDNA基因芯片筛查与人脑胶质瘤原发性耐药相关的基因,为获取不同个体胶质瘤化疗药物药敏预报基因提供实验依据。方法:收集符合要求的临床手术切除的人脑胶质瘤组织标本共6例,原代培养肿瘤细胞;由MTT法检测替尼泊苷(teniposide,VM-26)对胶质瘤细胞生长的抑制率,按VM-2645μg/ml(人血药峰浓度)时抑制率>30%为敏感、≤30%为耐药作为标准,将6例组织细胞分为耐药和敏感2组。cDNA芯片检测结合聚类分析方法筛查瘤细胞中与耐药相关的差异表达基因;以半定量RT-PCR法检测瘤细胞中HDAC1基因表达加以验证。结果:根据VM-26对细胞抑制率将6例胶质瘤细胞分为3例VM-26敏感和3例耐药。cDNA芯片结合聚类分析共筛选出有表达差异的基因21个,其中表达上调的基因6个、表达下调的基因15个。将表达差异明显的HDAC1经半定量RT-PCR验证,该基因在6例组织中都有表达,趋势与芯片结果一致。结论:胶质瘤原发性耐药可能与cDNA芯片筛查到的21个基因相关,其确切的耐药机制需要进一步深入研究。
- 强兆艳汤华李欣刘民
- 关键词：胶质瘤替尼泊苷耐药相关基因差异表达基因
- PIWIL4在人卵巢癌中的表达及其功能研究被引量：8
- 2009年
- 采用半定量RT-PCR方法检测人卵巢透明细胞癌ES-2细胞中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4 mRNA表达水平,以及PIWIL4在卵巢癌组织和癌旁正常组织中的表达情况.设计并化学合成针对PIWIL4的siRNA,用脂质体转染法将其转入ES-2细胞内,通过MTT和克隆形成实验,观察PIWIL4-siRNA对ES-2细胞生长活性和增殖能力的影响.半定量RT-PCR实验结果发现,ES-2细胞中,PIWIL4相对PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3,其表达水平最高(P<0.05),而且PIWIL4在卵巢癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01).MTT实验和克隆形成实验结果显示,转染PIWIL4-siRNA的ES-2细胞生长活性和克隆形成率明显低于对照组(P<0.05).由此得出结论:PIWIL4在卵巢癌细胞系ES-2细胞表达较高,且它在卵巢癌组织中的表达明显上调,同时PIWIL4-siRNA可有效抑制ES-2细胞的生长活性和增殖能力,提示PIWIL4可能与卵巢癌发生、发展相关.
- 郭利敏刘民李欣汤华
- 关键词：卵巢癌增殖RNA干扰SIRNA
- 人高迁移率族B1蛋白原核表达、纯化及抗体制备和初步应用
- 2008年
- 目的:原核表达并纯化人高迁移率族B1蛋白(HMGB1)免疫日本大耳白兔制备其抗体。方法:构建原核表达质粒pRsetA2-HMGB1,转化大肠杆菌BL21(DE3),HMGB1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过Ni2+-NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清。以间接ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果:成功构建原核表达质粒,表达并纯化HMGB1蛋白。ELISA检测抗体效价为1∶16000以上,Western blot和免疫荧光染色确定抗体具有高度特异性。结论:HMGB1蛋白和抗体的成功制备,为下一步研究将HMGB1作为肿瘤等疾病治疗的新靶点奠定基础。
- 田爽刘民李欣浦永吴海东汤华
- 关键词：HMGB1原核表达抗体癌症
