江苏省高校高新技术产业发展项目(BG2005326)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：夏顺翔贾秉晟薛建杨启银张魁更多>>
- 相关机构：南京师范大学长江大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校高新技术产业发展项目博士科研启动基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 红色素产生菌RZ21菌株的原生质体紫外诱变育种研究被引量：10
- 2010年
- [目的]对红色素生产菌RZ21菌株的原生质体进行紫外诱变育种,以提高其红色素的产量。[方法]以粘质沙雷氏菌为供试菌种,研究其原生质的制备、再生的条件和该菌的原生质紫外诱变对红色素产量的影响。[结果]RZ21菌株以溶菌酶8 mg/ml,37℃作用30 min后,再加0.01 mol/L(终浓度)的EDTA作用20 min,原生质体形成率达81.9%,再生率达31.5%。该菌原生质体经紫外诱变原生质体处理及抗性平板、摇瓶两步筛选后,得到1株高产株RZ21-3,灵菌红素产量达到了0.813 g/L,比原始菌株提高了24.9%。[结论]溶菌酶8 mg/ml,37℃作用30 min后,再加0.01 mol/L(终浓度)的EDTA作用20 min为该菌原生体制备的最佳工作条件。
- 夏顺翔张魁贾秉晟杨启银薛建
- 关键词：原生质体紫外诱变灵菌红素发酵
- 表达载体pHsh对大肠杆菌热休克系统中负调控机制的影响被引量：3
- 2009年
- pHsh是一种由σ32识别和启动外源基因表达的新型高效的大肠杆菌表达载体。正常E.coli细胞在热激诱导条件下,σ32的浓度在5min内到达高峰,随后被3个负调控蛋白Dnak、DnaJ、GrpE结合导致失活或降解,整个热休克反应持续约12min。在携带有外源基因的高拷贝pHsh的E.coli细胞中,外源基因却能持续高效表达4～10h,这一现象表明了此时细胞中的σ32比没有携带质粒的细胞内σ32的浓度要高。σ32浓度的增高有可能是由于3个负调控蛋白Dnak、DnaJ、GrpE在细胞内的含量比正常情况下降低的结果。为了验证这一推测,从E.coli中克隆了Dnak、DnaJ、GrpE的编码基因,表达并初步纯化了其重组蛋白以作分子标记,采用双向电泳技术,分析携带质粒(pHsh+)和不携带质粒的E.coli(pHsh-)细胞在热休克后胞内蛋白质组的差异。该项实验通过与检索到的标准的E.coli蛋白质组图谱进行比较鉴别出的两个蛋白Dnak、GrpE,并通过对比目标点的大小和深浅发现pHsh+中的Dnak均少于pHsh─中的目标蛋白,所得结果与上述假设一致。
- 吴华伟邵蔚蓝
- 关键词：大肠杆菌调控蛋白双向电泳
