国家自然科学基金(30300292)
- 作品数：12 被引量：13H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大劣按蚊血淋巴中疟原虫感染相关蛋白的cDNA克隆
- 2007年
- 疟疾是一种严重的传染病,大劣按蚊是我国及东南亚地区的重要传疟媒介。对大劣按蚊抗疟原虫感染分子机制的研究,具有重要意义。我们先前已成功分离了大劣按蚊血淋巴中约氏疟原虫感染相关蛋白(PIRP1),并对该蛋白进行了质谱检测。本研究在已获得PIRP1质谱检测信息的基础上,利用分子生物学技术,成功克隆了该相关蛋白的部分cDNA序列(GenBank序列号为EF409973)。为下一步对该蛋白的功能研究奠定了基础。
- 王英黄复生段建华周桃莉陈继德
- 关键词：大劣按蚊约氏疟原虫克隆血淋巴
- 感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白分析被引量：2
- 2005年
- 目的获得并分析感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白。方法利用二维电泳方法分别分离感染约氏疟原虫前后的大劣按蚊血淋巴蛋白,进行考马斯亮蓝染色,并利用PDQuest 2D E lite软件分析和比较凝胶结果;对感染约氏疟原虫前后的差异表达蛋白进行质谱分析,获得肽质量指纹图谱;利用M ascot软件系统,在Sw iss-Prot等数据库中检索和分析所获得的肽质量指纹图谱。预测差异表达蛋白的生物学特性和在卵囊黑化中的功能。结果获得了分辨率和重复性均较好的二维电泳图,感染组凝胶可见120个蛋白点,正常组凝胶可见95个蛋白点,二者比较分析后发现有37个差异蛋白点;质谱分析获得3个肽质量指纹图谱,于蛋白数据库检索后未发现匹配分值很高的相关蛋白,其中差异蛋白点1与冈比亚按蚊一蛋白具有较高的同源性。结论获得了感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异蛋白和部分差异蛋白的相关信息,这为从蛋白水平认识蚊媒和疟原虫的相互关系和更深入地利用大劣按蚊-约氏疟原虫模型开展卵囊黑化的相关研究奠定了基础。
- 王英张锡林段建华许颖张艳玲张健黄复生
- 关键词：二维电泳差异表达蛋白约氏疟原虫大劣按蚊
- 斯氏按蚊黑化包被约氏疟原虫卵囊时血淋巴蛋白的二维电泳分析被引量：2
- 2004年
- 目的 以斯氏按蚊 约氏疟原虫为模型 ,用二维电泳技术分析比较约氏疟原虫感染后雌性斯氏按蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水蚊血淋巴蛋白差异。方法 用挤压法分别收集吸硝喹糖水 3d、吸感染血和吸蔗糖水雌斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度 ,继而对血淋巴进行双向电泳 ,凝胶考马斯亮蓝染色 ,ImageMasterVDS CL对二维电泳凝胶蛋白斑点扫描和用ImageMaster 2DElite软件进行蛋白质斑点自动分析。结果 用药组血淋巴蛋白浓度总是低于吸感染血组和吸糖水组 ,用药组蚊血淋巴蛋白点有 10 1个 ,对照组有 115个 ,有 5 1个蛋白点相同。 5 0个仅在用药组中检测到 ,64个仅在对照组中检测到 ;蛋白点的分子量和等电点主要位于 ( 4 0～ 60 )× 10 3 和碱性端。结论 二维电泳技术可直接反映蛋白质的差异 ,其蛋白浓度和白点的差异与硝喹诱导疟原虫卵囊黑化有关。
- 杨松黄复生吴玉章况明书牟芝蓉魏斌
- 关键词：二维电泳硝喹斯氏按蚊血淋巴约氏疟原虫
- 斯氏按蚊PPO1基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究被引量：1
- 2005年
- 目的克隆和分析斯氏按蚊前酚氧化酶基因与约氏疟原虫卵囊黑化关系。方法根据其他昆虫前酚氧化酶基因的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊RNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm-T载体,测定插入片段序列,对序列进行BLAST检索和鉴定。根据序列设计相应基因的特异引物,然后分别从血淋巴细胞或中肠扩增目的基因,并进行不同食源条件下前酚氧化酶基因的半定量、原位核酸分子杂交定位及与约氏疟原虫卵囊黑化关系的分析。结果获得了1种斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶基因cDNA部分序列,即AsPPO1(600bp),分别与冈比亚按蚊PPO1和大劣按蚊PPO2基因很相似,其编码的氨基酸序列均包含PO保守的铜结合位点CuA(HHWHWHLVYP)序列。在中肠和血淋巴内也获得相同的目的基因片段,半定量分析显示约氏疟原虫感染或诱导卵囊黑化呈现之前的表达明显增强,原位核酸分子杂交技术也进一步证实血淋巴有AsPPO1mRNA表达。结论As-PPO1很可能与疟原虫感染或约氏疟原虫卵囊黑化相关。
- 杨松黄复生段建华
- 关键词：按蚊疟原虫原位核酸分子杂交
- 丝氨酸蛋白酶级联相关性斯氏按蚊血细胞分析
- 2004年
- 目的 分析与丝氮酸蛋白酶级联相关性的斯氏按蚊血细胞。方法 采用姬氏染色法观察血细胞类型,并利用免疫细胞化学技术检测斯氏按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶,对酶学定位阳性细胞类型进行初步鉴定。结果 经姬氏染色,斯氏按蚊血细胞主要为颗粒细胞,前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶主要分布于颗粒细胞和浆细胞内。结论 斯氏按蚊血细胞可结构性表达前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶,颗粒细胞和浆细胞可能为丝氨酸蛋白酶级联成分来源的主要细胞类型。
- 周桃莉杨松黄复生
- 关键词：斯氏按蚊血细胞免疫细胞化学
- 斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究被引量：4
- 2005年
- 目的克隆斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶基因,分析该分子与约氏疟原虫卵囊黑化关系。方法根据其它昆虫丝氨酸蛋白酶的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊cDNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm(T载体,测定插入片段序列,对序列进行BLAST检索和鉴定,根据序列设计相应基因的特异引物,然后分别从血淋巴细胞或中肠扩增目的基因,并进行不同食源条件下丝氨酸蛋白酶基因的半定量、原位核酸分子杂交定位与约氏疟原虫卵囊黑化关系的分析。结果获得了2种斯氏按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列,即AsSP1(448bp)和AsSP2(472bp),分别与冈比亚按蚊SP2A和大劣按蚊SP2基因很相似,其编码的氨基酸序列均包含保守的丝氨酸蛋白酶催化功能域。在中肠和血淋巴内也获得相同的目的基因片段,半定量分析显示约氏疟原虫感染或诱导卵囊黑化呈现之前的表达明显增强,原位核酸分子杂交技术也进一步证实血细胞有AsSP1和AsSP2 mRNA表达。结论AsSP1和AsSP2很可能与疟原虫感染或约氏疟原虫卵囊黑化相关,推测可能是斯氏按蚊的前酚氧化酶的活化酶。
- 杨松黄复生段建华
- 关键词：斯氏按蚊约氏疟原虫丝氨酸蛋白酶原位核酸分子杂交
- 斯氏按蚊转录因子Relish基因克隆、定位及不同食源条件下表达
- 2005年
- 目的对斯氏按蚊转录因子Relish基因进行克隆、定位和差异分析,初步探讨转录因子Relish在前酚氧化酶(PPO)级联与疟原虫卵囊黑化中的信号调控作用。方法设计简并引物,对全蚊cDNA模板进行RT-PCR扩增,产物纯化、克隆、测序和鉴定,利用特异引物分别从血细胞或中肠扩增目的基因,于不同食源条件下进行半定量分析和原位核酸分子杂交定位。结果获得了1种斯氏按蚊RelishcDNA部分序列,与冈比亚按蚊Relish基因很相似,并存在于中肠和血细胞,半定量分析显示,感染约氏疟原虫6、12、24和48h或吸硝喹糖水12和24h,于诱导约氏疟原虫卵囊黑化之前表达明显增强,原位核酸分子杂交证实血细胞和中肠有表达。结论斯氏按蚊转录因子Relish可能在疟原虫感染或/和约氏疟原虫卵囊黑化调控中发挥重要作用。
- 杨松黄复生
- 关键词：斯氏按蚊转录因子信号调控
- 斯氏按蚊血淋巴蛋白浓度的检测及其意义
- 2003年
- 目的 了解斯氏按蚊成蚊在不同食源条件下血淋巴蛋白浓度的变化。 方法 挤压法分别收集 4组 (吸蔗糖水组、吸正常血组、吸感染血组和吸硝喹组 )斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,采用Bradford法测定血淋巴蛋白浓度 ,并进行Ex cel自动分析。 结果 吸血感染约氏疟原虫 8d后 ,吸感染血组血淋巴蛋白浓度高于吸蔗糖水组和吸正常血组 ,平均分别为 4.43 6、3 .0 80和 3 .0 92 μg/μl ,通常硝喹组浓度 ( 2 .2 64 μg/μl)低于吸感染血组。 结论 吸硝喹组蚊体内血淋巴蛋白浓度下降 ,提示蚊血淋巴蛋白可能参与疟原虫卵囊的黑化包裹反应。
- 杨松黄复生况明书段建华张敬如
- 关键词：斯氏按蚊约氏疟原虫
- 大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法 将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组 ,以挤压法收集各组的血淋巴 ,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS PAGE分离 ,Westernblot检测丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶的表达差异 ,并利用免疫组织化学进行血细胞丝氨酸蛋白酶与前酚氧化酶的定位检测。结果 SDS PAGE显示吸糖水大劣按蚊有 3 4条蛋白带 ,而吸正常小鼠血和吸感染血蚊血淋巴有 3 5条蛋白带 ,而且在分子量约 160× 10 3和 66× 10 3的蛋白差异带显著 ,吸正常血及感染血后表达增强。吸糖水和吸正常小白鼠血组血淋巴丝氨酸蛋白酶呈现 2条带 ,分子量分别约 160× 10 3和 15 0× 10 3,3组蚊血淋巴前酚氧化酶呈现 1条带 ,分子量约 66× 10 3,吸正常小鼠血和吸感染血组蚊 1d后血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达均显著上调 ,尤其疟原虫感染后表达最强。感染 1d后中肠前酚氧化酶带型明显增宽。免疫酶化学显示 ,丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶在血细胞内均呈颗粒状分布 ,血细胞外血淋巴液内有少许散在颗粒分布。结论 约氏疟原虫卵囊黑化期间 ,大劣按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达增强 ,提示二者可能参与了卵囊黑化包裹?
- 杨松黄复生段建华况明书王英
- 关键词：大劣按蚊约氏疟原虫免疫组织化学
- 大劣按蚊对约氏疟原虫卵囊黑化相关血细胞类型的初步鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞。方法 采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型 ,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶。结果 颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞 ,前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶也主要分布于颗粒细胞和浆细胞内 ,其中颗粒细胞最常见。
- 杨松时超美周桃莉黄复生况明书王英
- 关键词：大劣按蚊血细胞免疫细胞化学
