国家自然科学基金(30571575)
- 作品数：7 被引量：66H指数：4
- 相关作者：王晓英郭云昌曹玮余东敏闫琳更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国动物疫病预防控制中心辽宁大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金科技部科研院所技术开发研究专项国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用Taqman实时PCR法检测禽肉中沙门菌的研究被引量：4
- 2014年
- 目的 建立敏感快速的检测禽肉中沙门菌的实时PCR法.方法 以invA基因为基础,建立RT-PCR法并验证其特异性.选用肠炎沙门菌CMCC 50041,制备不同浓度的纯菌液,用RT-PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率.进行人工染菌实验,染菌量分别为每25 g鸡肉样本1、10、102、103、104、105和106 CFU.分别在增菌0、4、8、12、18 h取1 ml培养液,提取DNA进行RT-PCR检测,并同时用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性.采集16份市售整鸡样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出情况.结果 建立的RT-PCR法特异性好,对纯菌液的最低检测限为5.2×103 CFU/ml,在5.2×103～ 5.2×1010 CFU/ml范围内,菌浓度的对数值和检测结果的Ct值线性关系良好,R2=0.999.人工染菌样本在增菌12 h后,RT-PCR法检出限可达l CFU/25 g,与PCR检测的敏感性一致,比传统方法的检出限敏感10倍.根据增菌12 h的检测结果,建立了RT-PCR样本标准曲线.采用RT-PCR检测16份禽肉样本,检出7份阳性,与PCR一致,高于传统方法（5份阳性）.根据样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌.结论 所建立的RT-PCR具有快速简便、敏感特异等优点,适用于禽肉中沙门菌的快速定量检测.
- 闫琳王晓英郭云昌裴晓燕余东敏杨大进
- 关键词：聚合酶链反应食品检查
- 两种选择性培养基HE、CAS检测沙门菌效果的比较被引量：3
- 2011年
- 目的比较两种沙门菌选择性培养基HE和CAS在食物样本检测中的敏感性、准确性和时效性。方法观察典型沙门菌和非沙门菌在两种选择培养基上的生长状况和菌落形态。通过人工染菌实验,比较两种选择性培养基分离沙门菌的检测效果。采集16份市售整鸡样本,进一步比较两种培养基沙门菌的阳性检出率。结果沙门菌在HE平板上为绿色菌落,大多有黑心;在CAS平板上为紫色菌落。含菌量为10 CFU/25 g鸡肉样本,经SC增菌液增菌培养8 h,可用CAS检出沙门菌;而采用HE则需增菌18 h才可检出。16份整鸡样本,增菌8、12和18 h,采用CAS的阳性检出率分别为43.75%、31.25%和37.5%,相应时间下采用HE的阳性检出率分别为18.75%、25%和18.75%。8份新鲜整鸡样本,检出4份阳性;8份冷冻整鸡样本,检出3份阳性。结论 CAS选择性平板可抑制大多杂菌生长,沙门菌在其上菌落形态较易鉴别。CAS分离沙门菌的检出时限和检测灵敏度都明显优于HE,建议在食物样本检测沙门菌时应首选CAS。
- 闫琳王晓英郭云昌裴晓燕余东敏
- 关键词：沙门菌
- 核酸检测及相关技术在食源性致病菌快速检测中的研究被引量：11
- 2008年
- 传统的细菌分离、培养与鉴定由于需时较长,难以适应食源性疾病预防控制的需要。近年来,伴随着核酸检测技术的迅猛发展,各种能够快速检测食源性致病菌的方法相继诞生。本文就聚合酶链式反应及其衍生技术、核酸恒温扩增技术、寡核苷酸微阵列技术、免疫磁性细胞分离技术及DNA生物传感器技术在沙门菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠埃希菌等食源性致病菌快速检测中的应用研究进行综述。
- 曹玮王明忠王晓英刘秀梅
- 关键词：食源性致病菌核酸
- PCR-ELISA技术及其在生物医学领域中的应用被引量：10
- 2011年
- 聚合酶链反应-酶联免疫吸附(PCR-ELISA)技术是利用PCR的高敏感性、核酸探针的特异性、酶标仪直接读取结果的客观性等优点创建的一项技术,自建立以来得到了广泛的关注。本文对这项技术做了基本介绍,并重点对近些年来其在生物医学领域中的应用进行综述。
- 闫琳王晓英郭云昌
- 关键词：PCR-ELISA生物检测生物医学
- 增菌-PCR法与传统方法检测禽肉中沙门菌的比较研究被引量：2
- 2011年
- 目的比较增菌-PCR法与传统方法检测禽肉中沙门菌的敏感性、特异性和时效性。方法以沙门菌invA基因为基础,选择特异性引物,采用30株沙门氏菌和18株非沙门菌建立并验证PCR法的特异性。选用肠炎沙门菌CMCC50041,参照GB4789.4—2010进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g样本1、10、102、103、104、105和106 CFU。分别在增菌0、4、8、12和18h取1ml培养液,提取DNA进行PCR检测,并同时划线接种选择性平板,用传统方法进行分离鉴定,比较两种方法检测的敏感性和特异性。采集16份市售整鸡样本,用这两种方法进行检测,进一步比较两者的阳性检出率。结果 30株沙门菌都检出阳性,而非沙门菌都检测为阴性,说明本研究建立的PCR法特异性好。人工染菌的样本在增菌12h后,PCR法检出限可达每25g禽肉样本1CFU,传统方法检出限为每25g禽肉样本10CFU。增菌-PCR法整个流程只需要1天,比传统方法需时提前4～6天。16份市售样本,增菌-PCR法的阳性率为43.75%(7/16),高于传统方法31.25%(5/16)。结论增菌-PCR法具有快速简便、敏感特异等优点,较传统方法大大缩短了检出时限,提高了沙门菌的检出率。
- 闫琳王晓英郭云昌裴晓燕余东敏
- 关键词：禽肉沙门菌
- 单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测技术研究被引量：13
- 2009年
- 目的建立快速检测单增李斯特菌的PCR-ELISA方法,将其应用于人工污染的食物样品检测。方法根据GenBank数据库资料,应用分子生物学软件DNAMAN6.0和Primer Premier5.0,以单增李斯特菌的致病基因hlyA为基础,选用PCR引物,应用地高辛标记试剂盒,获得单增李斯特菌特异的地高辛标记片段。根据PCR目的片段序列,设计特异性捕获探针,建立了单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测方法。应用该方法对不同血清型的单增李斯特菌食品分离株进行了检测,并将PCR方法与PCR-ELISA方法对人工污染单增李斯特菌的牛奶样品的检测敏感性进行了比较。结果应用单增李斯特菌特异的PCR-ELISA方法完成检测约需6h。该方法对单增李斯特菌分离株检测的结果,与国家食源性疾病检测网的鉴定结果100%符合。经过12h的增菌培养,PCR-ELISA方法最低可从25ml样品中检出1CFU,检测敏感性为传统PCR方法的10～100倍。结论建立了单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测方法。该方法敏感性高、特异性强、可靠性好,对于提高食源性疾病预警、预测能力,增强检测的时效性和准确性,具有推广应用价值。
- 曹玮王宁王晓英刘宏生郭云昌
- 关键词：单增李斯特菌食源性致病菌PCR-ELISA
- 椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌16S～23S rRNA基因间区序列的比较研究被引量：23
- 2008年
- 目的研究比较我国分离的椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌不同致病型菌株的16S～23S rRNA基因间区序列,分析不同菌株基因水平的差别,并阐述其系统发育关系。方法设计2对伯克霍尔德菌属特异引物,扩增16S～23SrRNA基因间区序列。应用分子生物学软件,对3株分别代表唐菖蒲伯克霍尔德菌3种不同致病型的国际参考菌株(ATCC10248、NCPPB947、NCPPB3580)、1株伯克霍尔德菌属B.phenazinium种代表株(LMG2247)及8株从我国不同地域、不同食物样品中分离的椰酵假单胞菌(HN2y、Co14、Co8、Co36、Sx8801、90-3、56(2)、56(2))的16S～23SrRNA基因序列进行测定,并与核酸数据库(GenBank)中相关菌株序列进行比较分析。结果通过不同菌株16S～23SrRNA间区序列的分析比较,发现分离的椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株存在2个序列高可变区及特异基因序列,阐述了我国椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌的系统发育关系,将DNA测序结果在核酸数据库中注册,并绘制了系统发育进化树。结论该研究结果为进一步鉴定椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株,从分子水平探讨其产毒机制及系统发育关系提供了新的、可靠的理论依据和技术支撑。
- 焦振泉曹玮余东敏刘秀梅王晓英
- 关键词：假单胞菌属唐菖蒲基因RRNA
