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利用SSH技术鉴定香蕉体细胞胚发生相关基因被引量：1: 2011年; 本研究以野生蕉胚性悬浮系为材料,将胚性细胞增殖培养基上的香蕉胚性悬浮系作为对照,体胚诱导培养基上的培养材料为处理,利用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建野生蕉胚性悬浮系激素诱导的胚胎发育差异表达cDNA文库,随机挑选阳性克隆并进行生物信息学分析。结果显示,聚类得到62条非冗余EST。经Blast比对后发现其中18条没有对应功能的相似序列,46条在GenBank中有同源序列,其中12条为功能未知的基因。在文库中功能已知的ESTs中,这些基因涉及基础代谢(primary metabolism)、蛋白结合(protein binding)、转录(transport)细胞分化(cell differentiation)等功能。文库中发现了一些可能与体细胞胚胎发育相关的基因如TPD1基因、热激蛋白基因、谷胱甘肽-S-转移酶基因、锌指蛋白基因以及细胞壁富含羟脯氨酸糖蛋白基因等。试验结果为获得香蕉体细胞胚胎发育相关基因全长并验证这些基因的功能提供依据。; 胡春华魏岳荣易干军; 关键词：香蕉抑制性消减杂交体细胞胚

东莞大蕉超表达拟南芥CBF1基因及其抗寒性检测被引量：8: 2012年; 【目的】研究超表达拟南芥CBF1基因(AtCBF1)对大蕉抗寒性的影响,为从大蕉克隆抗寒相关基因奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法转化东莞大蕉的胚性细胞悬浮系,获得转AtCBF1基因的大蕉植株;利用GUS组织染色、PCR、RT-PCR以及RT-qPCR对转基因植株进行鉴定;比较低温处理后的转基因株系和对照的冷害特征以及超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量等生理生化指标,鉴定转基因大蕉植株的抗寒能力。【结果】试验共获得6个抗性再生转化系。GUS组织染色结果表明,除T1外,其余均为阳性;PCR鉴定结果表明,AtCBF1在6个抗性再生转化系均为阳性,而GUS基因在T1转化系中没有检测出;RT-PCR结果表明,AtCBF1在6个转化系均得到表达,对T1、T2和T3 3个转化系进行RT-qPCR检测发现,AtCBF1基因在3个转基因株系表达水平存在差异;在低温处理下,转基因植株的叶片相对电导率、MDA的累积都低于非转基因植株,而SOD总活性高于对照;低温处理条件下,转基因植株叶片的冷害症状明显轻于对照。【结论】AtCBF1在大蕉中超表达,具有增强大蕉SOD活性,降低因低温导致的MDA含量和离子渗漏率,缓解质膜过氧程度,进而改善大蕉植株抗低温胁迫的能力。; 刘凯胡春华杜发秀张玉娥魏岳荣易干军; 关键词：转基因抗寒性

几丁质酶基因转化夫人指蕉的研究: 由于大多数香蕉(Musa spp.)栽培品种是三倍体,生长周期长,不孕,主要通过无性繁殖育种,而通过传统的无性繁殖育种方式对香蕉种质进行改良具有很大的局限性,抗病基因工程技术为提高香蕉的抗病性提供了新的途径。几丁质酶基因...; 胡春华魏岳荣易干军黄永红盛鸥; 关键词：香蕉枯萎病几丁质酶基因; 文献传递

香蕉ACO反义基因转化夫人指蕉的研究被引量：3: 2015年; 本研究利用RT-PCR法,从成熟夫人指蕉(Musa spp.AA group)果实中分离得到ACO基因编码区全序列,经测序分析,该基因编码区共957 bp,编码318个氨基酸,与已报道的香蕉ACO基因的同源性为77%~99%。在此基础上,将ACO基因反向插入到植物表达载体p1321得到重组质粒p1321-a ACO。利用根癌农杆菌介导法转化夫人指香蕉胚性细胞悬浮系,经GUS组织化学染色和PCR鉴定,获得一批转反义ACO基因香蕉植株。通过转反义ACO基因香蕉果实贮运实验,结果表明外加乙烯利,转基因和对照果实成熟期无明显差异,并表现出成熟果实的正常生理特性。但是在采后常温无乙烯利处理的条件下,转基因香蕉的成熟期较对照推迟了10 d左右。研究结果表明通过反义ACO基因转化香蕉,有望获得耐贮运香蕉新种质。; 胡春华魏岳荣盛鸥邝瑞彬杨乔松李春雨易干军; 关键词：香蕉转基因

拟南芥CBF1基因植物表达载体构建及其对野生蕉的遗传转化被引量：2: 2011年; 从拟南芥中克隆CBF1基因,转入到植物表达载体pBI121的XbaI和SacI位点,得到中间重组质粒pBI121-CBF1,用EcoRI和HindⅢ将35S启动子与CBF1基因从pBI121-CBF1切下,转入到植物表达载体pCAMBIA1301中,构建植物表达载体p1301-CBF1。将构建的植物表达载体转入农杆菌EHA105,采用农杆菌介导法转化野生蕉胚性悬浮细胞,经GUS组织化学染色和PCR鉴定,证明CBF1基因已转入野生蕉中。; 刘凯胡春华魏岳荣易干军邵秀红; 关键词：拟南芥 CBF1基因野生蕉胚性悬浮细胞

根癌农杆菌介导香蕉多芽体薄切片遗传转化体系的建立被引量：3: 2014年; 本研究拟采用香蕉多芽体薄片为转化受体材料,建立起根癌农杆菌介导的香蕉遗传转化体系。以巴西蕉组培苗的球茎横切薄片为起始材料,诱导获得多芽体,利用多芽体薄片为受体,通过其对潮霉素的敏感性和GUS基因的瞬时表达率试验,以期找到适合的遗传转化条件。结果表明:巴西蕉球茎横切薄片在多芽体诱导培养基(MS+6-BA 10 mg/L+PP3331 mg/L+NAA 0.21 mg/L)上,经过4至5个月的培养,形成了花椰菜结构的多芽体。巴西蕉多芽体横切薄片对潮霉素敏感,最佳的潮霉素素筛选浓度是25 mg/L,转化的最佳共培时间为4 d。本研究从3次转化中的共300个薄片中获得抗性芽18个,经GUS检测和PCR鉴定,获得的抗性芽全部为阳性。本研究建立的以多芽体薄片为转化受体的转化体系,为今后将具有重要经济性状的基因导入香蕉提供了技术参考。; 胡春华窦同心魏岳荣盛鸥邝瑞彬杨乔松李春雨易干军; 关键词：香蕉多芽体

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广东省自然科学基金(10451064001006326)