福建省教育厅资助项目(JS06011)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：黄爱民高美钦刘景丰高凌云徐玫芳更多>>
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- KiSS-1与肝癌细胞增殖及黏附和侵袭关系的体外实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响，为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础。方法培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H，瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组，转染空载体pcDNA3．1／HiSC的细胞为空白对照组，未转染细胞为阴性对照组，采用流式细胞术与四甲基偶氮唑盐法、基质黏附实验、Transwell体外侵袭和趋化运动实验检测KISS-1表达对MHCC97-H细胞体外增殖、黏附、侵袭和运动能力的影响。应用SPSS13．0统计软件包进行统计分析，组间差异以两样本t检验分析。结果转染组、空载体组和未转染组与Matrigel基质的黏附能力（A值）分别为0．257±0．029、0．374±0．016和0．394±0．031，转染组明显低于空载体组（t=-7．90345，P〈0．01）和未转染组（t=-7．22752，P〈0．01）；与Fibronectin基质的黏附能力（A值）分别为0．292±0．004、0．394±0．010和0．412±0．023，转染组明显低于空载体组（t=-20．93138，P〈0．01）和未转染组（t=-11．31371，P〈0．01）;趋化运动至Transwell小室下室表面的细胞数分别为65．80±1．92、93．80±2．28和96．40±2．07，转染组明显低于空载体组（t=-30．11750，P〈0．01）和未转染组（t=-24．19142，P〈0．01）;侵袭至Transwell小室下室表面的细胞数为42．40±1．14、66．00±1．58和67．80±1．92，转染组明显低于空载体组（t=-27．0711，P〈0．01）和未转染组（t=一25．4，P〈0．01）。而转染组、空载体组和未转染组的细胞增殖能力（A值）分别为0．644±0．027、O．669±0．022和0．678±0．027，转染组略低于空载体组（t=一1．60371，P〉0．05）和未转染组（t=-1．97828，P〉0．05）}同时，转染组较空载体组和未转染组未出现明显的G1期阻滞和S期阻滞，也未出现明显的凋亡峰。结论KISS-1表达虽不影响肝癌细胞的体外增殖能�
- 徐玫芳臧盛兵刘景丰高凌云高美钦杨映红黄爱民
- 关键词：细胞增殖
- APE1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建APE1基因慢病毒载体,为其后续的体内外实验研究提供基础。方法应用基因工程技术,筛选出两条针对APE1基因的RNAi靶序列KD1、KD2,分别与pGCIL-GFP载体连接,经转化筛选鉴定后,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,分别命名为LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2,两种病毒颗粒分别感染MHCC97-H细胞,设为感染LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2细胞组,同时设未感染病毒组和感染空载体细胞组。Real-time PCR和Western blot检测MHCC97-H细胞中APE1基因的mRNA和蛋白的表达。结果 PCR及测序结果与预期结果一致,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2的病毒滴度为4×108TU/mL和7×108TU/mL。与未感染病毒组和感染空载体细胞组相比,2组慢病毒组APE1基因mRNA和蛋白的表达均明显下降,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2对APE1基因的mRNA表达的抑制率分别为75%,90%,对APE1蛋白表达的抑制率达90%,95%。结论成功构建高效阻断APE1基因表达的RNAi慢病毒表达载体,为应用RNAi进一步研究APE1基因在肝癌中的作用机制和基因治疗奠定基础。
- 李艳菊郑智华刘景丰高美钦黄爱民
- 关键词：嘌呤类肝肿瘤
