国家自然科学基金(30170740)
- 作品数：13 被引量：102H指数：6
- 相关作者：陈松林沙珍霞叶寒青徐美瑜刘洋更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学青岛海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 花鲈胚胎干细胞移植及嵌合体的构建被引量：4
- 2006年
- 旨在通过花鲈胚胎干细胞（LJESl）移植构建嵌合体，证实LJES1细胞的体内分化能力和发育全能性。采用脂质体介导法将线性化pCMV-EGFP质粒导入到长期培养的LJES1细胞内，细胞绿色荧光蛋白（GFP）的表达率为5％～10％，以此为供体，通过显微注射方法把20—50个LJES1细胞移植到花鲈囊胚中，共移植囊胚478枚，获得了20枚表达GFP的嵌合体胚胎，其中的15枚胚胎发育成鱼苗。荧光显微观察和PCR检测显示了LJES1细胞可在宿主胚胎内片状嵌合和单细胞分散嵌合，嵌合部位可分布于胚体的三个胚层；同时也证明GFP是一种优良的遗传标记。本实验结果为证实LJES1细胞的发育全能性提供了有力证据。
- 沙珍霞刘洋陈松林叶寒清田永胜孟亮唐启升
- 关键词：细胞移植显微注射嵌合体
- 显微注射技术在制备鱼类嵌合体和转基因海水鱼上的应用被引量：6
- 2005年
- 以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。
- 沙珍霞陈松林刘洋刘洋徐美瑜
- 关键词：显微注射细胞移植转基因鱼类
- 漠斑牙鲆胚胎细胞系的建立与鉴定被引量：15
- 2007年
- 漠斑牙鲆（Paralichthyslethostigma）是中国近年新开发的重要海水养殖鱼类，本研究以漠斑牙鲆囊胚期胚胎为材料，探索了鱼类胚胎细胞分离和培养的条件，建立了漠斑牙鲆胚胎细胞培养技术。建立的漠斑牙鲆胚胎细胞系（SFEC）至今已经培养了240多天，传至80多代。SFEC的完全培养基采用添加抗生素、胎牛血清（FI强）、花鲈血清（sPS）、成纤维生长因子（bF（正）的DMEM。SFEC形态小而呈圆形、多边形，在培养基中生长迅速。本实验检测了温度、胎牛血清浓度、成纤维生长因子对SFEC生长的影响。在24--30℃之间SFEC生长良好，但当温度低于18℃时细胞生长速度明显减慢。在含15％FBS的培养基中，SFEC生长速度明显比在含7．5％FBS的培养基中快，在培养基中添加bFGF可以使细胞生长速度显著提高。SFEC的二倍体核型为2n=6st＋42t。将GFP报告基因通过脂质体介导的方法转入SFEC中并成功地获得了表达，转化率为20％。[中国水产科学，2007，14（4）：579—583]
- 任国诚陈松林沙珍霞
- 关键词：胚胎细胞系漠斑牙鲆核型GFP报告基因
- 海水养殖鱼类抗病分子育种研究进展及前景展望被引量：25
- 2004年
- 病害是限制水产养殖业可持续发展的关键因素。而我国目前尚缺乏优良的抗病养殖鱼类品种。鱼类功能基因组和分子标记技术的发展为筛选鱼类抗病相关功能基因和分子标记提供了机遇。基因转移、分子标记和基因标记等分子育种技术是培育抗病优良鱼类新品种的很有潜力的技术手段,已成为国际上的发展趋势,也是我国今后应大力发展的研究领域。本文结合笔者实验室的工作,对某些海水养殖鱼类抗病相关功能基因及抗病分子育种研究的最新进展作一综述介绍。
- 陈松林
- 关键词：抗病分子育种技术海水养殖鱼类基因标记分子标记技术水产养殖业
- 适合花鲈的几种染色体制备方法的比较被引量：20
- 2003年
- 比较了6种适于制备花鲈(Lateolabraxjaponicus)染色体的制片方法。结果表明,细胞系(LJES)培养法和头肾 PHA活体注射 淋巴分离液富集法可制备高质量的染色体标本;外周血短期培养法和头肾 PHA活体注射法得到的结果重复性好,但制片时有红细胞的干扰;小鱼游泳法和组织浸泡法操作简单,适于野外条件下的染色体制备,但得到的染色体图象有背景杂质,分裂指数较低,仅适用于染色体组型的研究。
- 沙珍霞陈松林叶寒青徐美瑜刘洋季相山唐启升
- 鱼类细胞核移植研究进展及前景展望被引量：5
- 2003年
- 细胞核移植技术是目前生物技术领域研究的热点之一,其科学意义和应用价值重大。本文介绍了中国和世界上鱼类细胞核移植的研究成果及其最新进展;综述了鱼类细胞核移植的基本程序、方法和影响因素,包括胞质受体的准备、核供体的制备、核移植和核质杂种的培养。并对鱼类细胞核移植的应用、现存问题及应用前景进行了讨论。
- 沙珍霞陈松林刘洋唐启升
- 关键词：鱼类细胞核移植
- 表达绿色荧光蛋白基因的花鲈胚胎干细胞株的建立及其体外分化被引量：2
- 2006年
- 以带有绿色荧光标记的基因（pCMV-EGFP）为报告基因，用Genejammer、Genejuice和Metafeetene三种脂质体介导花鲈胚胎干细胞（IJES1）的基因转移。实验发现，Genejammer介导的细胞转化效率最高，高达27．3％，其余分别为12．1％和5．3％。转移绿色荧光蛋白（GFP）基因的IJES1细胞经过药物筛选和单克隆化培养，获得了表达GFP基因的阳性克隆细胞株，经PCR对GFP阳性细胞株的基因组DNA及提取的RNA扩增，获得了目的祭带，证实了GFP基因已经整合到LIES1细胞的基因组中，并获得了正常的表达。通过体外诱导，GFP阳性细胞能够分化为神经细胞、肌肉细胞、成纤维细胞等，用悬滴法培养获得了GFP阳性细胞的拟胚体，证实了经过长期的药物筛选后，LJES1细胞仍然保持着发育的多能性。这一研究，为进一步利用海水鱼类胚胎干细胞进行遗传操作及基因工程的研究提供了方法上的探索。
- 叶寒青陈松林刘洋刘洋
- 关键词：脂质体绿色荧光蛋白胚胎干细胞体外分化
- 不同因子对花鲈胚胎干细胞增殖的影响被引量：6
- 2004年
- 胚胎干细胞(ES细胞)是从动物早期发育胚胎中分离出来的具有发育全能性的一种未分化细胞系。维持花鲈胚胎干细胞(LJES1)的体外生长、增殖及未分化状态需要在培养基中添加一些生长因子。实验通过配制省略1种或多种因子的培养基PESM0～10,计数LJES1细胞在各培养基中增殖的数量,确定各种生长因子对LJES1细胞的增殖作用。同时,对LIF因子和bFGF因子的作用进行了重点的研究,发现LIF因子对早期的LJES1细胞增殖几乎没有作用,其主要作用是维持LJES1细胞的未分化状态,但对晚期LJES1细胞的增殖有一定的作用;bFGF因子对LJES1细胞有强烈的刺激增殖的作用;鲈鱼胚胎抽提液(PEE)以及鲈鱼血清(FS)也促进了LJES1细胞的增殖,2-巯基乙醇(2-ME)具有还原血清中的含硫化合物、防止过氧化物对LJES1细胞的损害及促进贴壁的作用,因而也促进了LJES1细胞的增殖。
- 叶寒青陈松林沙珍霞
- 关键词：胚胎干细胞碱性成纤维细胞生长因子白血病抑制因子
- 三种脂质体介导的花鲈胚胎干细胞转化效率的比较被引量：1
- 2006年
- 通过3种脂质体(genejammer,genejuice和metafectene)介导绿色荧光蛋白基因转化花鲈胚胎干细胞,探讨不同脂质体介导的花鲈胚胎干细胞(LJES1)的转化效率,以及影响外源基因转化效率的因素,如细胞接种时间、初始接种密度、DNA和脂质体用量以及它们之间的比例等。实验发现,genejammer转化LJES1细胞效率最高,适合于该细胞系的转化。对于同一种脂质体,DNA与脂质体用量的比例对于绿色荧光蛋白基因转化LJES1最为重要,DNA与genejammer的比例为1∶6时,转化效率最高,为27.3%;DNA与genejuice的比例为1∶4时,转化效率最高,为12.1%;而DNA与metafectene的比例为1∶3时,转化效率达到最高,为5.3%。随着DNA、脂质体量的增加,转化效率有所提高,但达到一定的用量后,转化效率反而下降。
- 叶寒青陈松林沙珍霞
- 关键词：脂质体绿色荧光蛋白胚胎干细胞
- 鱼类基因转移技术研究进展被引量：10
- 2002年
- 基因转移为鱼类遗传育种开辟了一条新的途径。自 1985年第 1例转基因鱼问世至今已获得十几种转基因鱼 ,在促进生长 ,提高鱼类抗逆性、抗病性等方面取得了巨大成绩。本文主要结合国内外关于鱼类基因转移成功的报道 ,分析了各种转基因技术的可行性和优缺点 ,并对其作用机理、适用对象、条件优化、转化效率等几个方面做了概括性叙述。
- 徐美瑜陈松林戴继勋
- 关键词：基因转移技术鱼类遗传育种
