陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项(2007ZDKG-13)
- 作品数：11 被引量：60H指数：4
- 相关作者：郭抗抗张彦明汤智慧杨增岐王波更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学汉中职业技术学院汉中市动物卫生监督所更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪大肠埃希菌分离鉴定及毒力因子PCR检测被引量：3
- 2010年
- 为了解陕西省宁强县部分地区引起仔猪黄白痢的致病性大肠埃希菌的主要血清型及其主要毒力因子,用细菌分离培养方法,从宁强县5个猪场采集的60份有疑似黄白痢症状仔猪的肛门拭子中分离出20个大肠埃希菌菌株。经菌落形态观察、革兰染色镜检、培养特性、生化试验、血清型鉴定,确定分离菌株均为致病性大肠埃希菌。血清分型表明,20个分离菌株中有18株能确定血清型,分布在7个血清型中,其中优势血清型为O8(8株),占总数的40%。药物敏感性试验表明,分离菌株对临床常用药物具有抗药性。毒力因子的PCR检测结果表明,分离菌株均不携带STa、STb、LT和SLT-2e四个毒力基因。
- 黄超王湘予张成成郭抗抗张彦明
- 关键词：仔猪黄白痢大肠埃希菌毒力因子聚合酶链反应
- 猪圆环病毒2型体外滚环复制方法的建立
- 2015年
- 通过建立猪圆环病毒2型(PCV-2)体外滚环复制(RCA)方法,为PCV-2体外检测探寻更为简便易行的路径。先将西北农林科技大学预防实验室保存分离纯化的PCV-2病料以传统PCR方法扩增出全基因组片段,然后在没有PCR扩增仪的情况下,只用简单的恒温装置,摸索RCA扩增条件,建立体外扩增PCV-2全基因组的方法。最后将2种方法扩增的全基因组片段进行测序,对其相似性进行比对。结果表明,以传统的PCR方法和RCA方法均扩增出1 767bp大小的片段,测序发现两者相似度达到99.9%。可见,成功建立了PCV-2体外滚环复制方法,扩增出病毒的全基因组片段。
- 汤智慧纪建华张彦明郭抗抗
- 关键词：猪圆环病毒2型RCA
- 猪圆环病毒2型陕西杨凌株的分离鉴定及全基因组分析被引量：7
- 2011年
- 【目的】分离得到猪圆环病毒2型(PCV-2)陕西杨凌株,测定病毒滴度(TCID50),并进行全基因组序列比对,为研制针对性更强的PCV-2疫苗提供理论依据。【方法】从经PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料中,分离病毒并接种PK-15细胞,通过PCR检测、间接免疫荧光试验及电镜观察,对分离病毒进行鉴定;用免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA),测定分离毒株的TCID50,并对其全基因组序列进行测定与分析。【结果】分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,分离株在PK-15细胞上的TCID50为10-4.75。全基因组序列同源性比对发现,分离株与一加拿大分离株(DQ200735)同源性最高(99.4%)。【结论】从陕西杨凌分离得到了1个猪圆环病毒2型分离株。
- 汤智慧郭抗抗张彦明王津津李宇立向华
- 关键词：猪圆环病毒2型TCID50
- 野猪源与家猪源PRRSV陕西流行毒株对仔猪的致病性试验被引量：2
- 2011年
- 【目的】研究野猪源Shaanxi-2及家猪源Shaanxi-1猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株对易感仔猪的致病性及发病规律,进一步弄清PRRSV变异株的病原特征及其与"猪高热病"发生的关系。【方法】选取PRRSV和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原、抗体检测均为阴性的健康仔猪(40日龄)9头,随机分为3组,用家猪源Shaanxi-1及野猪源Shaanxi-2 PRRSV变异株分别感染其中一组仔猪,每头肌注6 mL,滴鼻2 mL;另一组作为阴性对照,按相同剂量和方法接种正常Marc-145细胞处理液。攻毒后各组分圈饲养,每天定时测量体温,绘制体温变化曲线,观察临床症状,记录发病情况。攻毒后采血及咽喉、眼、鼻分泌物和粪便,采用RT-PCR方法检测PRRSV、猪瘟病毒(CSFV)、PCV2、猪伪狂犬病毒(PRV)核酸,用ELISA试验及血清中和试验检测血清抗体。【结果】Shaanxi-1与Shaanxi-2攻毒组均出现体温升高及典型临床症状,但未见死亡病例;攻毒组CSFV、PCV2、PRV核酸检测均为阴性,咽喉、眼、鼻分泌物和粪便在一定时间段可检测到PRRSV核酸;PRRSV特异性抗体检测均为阳性,仅Shaanxi-2攻毒组在第35天检测到中和抗体;Shaanxi-2与Shaanxi-1相比,感染猪的体温较高,临床症状明显,病毒血症的维持时间较长,抗体水平较高。【结论】野猪源Shaanxi-2及家猪源Shaanxi-1 PRRSV变异株对易感仔猪具有一定的致病性,能使感染动物发病但不能致死,Shaanxi-2毒株的致病性相对较强。攻毒后第7天出现病毒血症,持续14～21 d后逐渐消退,仔猪感染PRRSV变异株后,病毒可通过鼻、眼、咽喉分泌物及粪便等排出,其中鼻分泌物排毒最早、排毒时间最长,眼、咽喉分泌物与鼻分泌物、粪便相比排毒较晚、持续时间较短。
- 武小椿王波刘阳坤杨增岐张淑霞党如意张鹏赵伟张冲韩青松
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒家猪野猪
- 猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立被引量：9
- 2010年
- 【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。
- 郭抗抗邓力井勇张彦明王晶钰宁蓬勃
- 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗反转录-聚合酶链式反应
- 陕西省PRRSV与CSFV、PCV2、PRV混合感染的检测被引量：20
- 2009年
- 运用RT-PCR和PCR技术对高热病期间陕西西安、宝鸡、渭南、榆林、汉中、商洛等地区猪场送检的146份样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病毒(PRV)检测。结果显示:被检样品中PRRSV的阳性率达46.6%(68/146);PRRSV与CSFV、PCV2和PRV 3种病毒均有混合感染现象,PRRSV+CSFV混合感染率为25%(17/68),PRRSV+PCV2为19.1%(13/68),PRRSV+PRV为4.4%(3/68),PRRSV+PCV2+CSFV为14.7%(10/68),PRRSV+PCV2+CSFV+PRV为2.9%(2/68)。结果表明以PRRSV为主要病原的混合感染在所检测的高热病发病猪群的存在是非常普遍的。
- 王波张鹏杨增岐张淑霞党如意刘芳宁黄建宁樊荣刘海生
- 猪圆环病毒2型分离株优势基因型分析与检测
- 为了解猪圆环病毒2型(PCV2)分离株基因型的变化,对1999—2009年NCBI中收录的556个PCV2分离株全基因序列进行了分析。结果表明,1999—2002年PCV2的优势流行毒株为基因A型(PCV2A);从200...
- 郭抗抗张彦明张红刘华科宁蓬勃王晶钰
- 关键词：猪圆环病毒2型基因分析基因型PCR病毒检测
- 文献传递
- IFN-γ对PCV-2增殖效果的影响
- 2014年
- 在病毒培养物中添加IFN-γ,研究提高PCV-2病毒滴度的最佳培养方法。以不同活性单位的IFN-γ和不同浓度的NH4Cl配合使用分别添加至培养基,用免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)对病毒毒价(TCID50)进行测定;于72h后分别测定添加与不添加IFN-γ接毒细胞的细胞周期。结果显示,500U/mL IFN-γ和75mmol/L NH4Cl处理PK-15后病毒的TCID50达到最大值5.9;且无论在病毒接种细胞前还是接种后添加IFN-γ均大幅提高病毒增殖力,而且两者提高幅度相同;细胞周期测定显示,最适量的IFN-γ和NH4Cl配合使用后,细胞增殖活性增加。说明,重组IFN-γ可以提高PCV-2在PK-15中的病毒增殖滴度。
- 汤智慧杨柯张彦明郭抗抗
- 关键词：PCV-2IPMATCID50细胞周期
- 猪圆环病毒2型在猪气管上皮细胞中的增殖研究被引量：2
- 2018年
- 为了研究猪圆环病毒2型（PCV-2）在猪气管上皮细胞（STECs）中的增殖情况,试验先分离原代猪气管上皮细胞,鉴定纯化后感染PCV-2并传至第3代,显微镜下观察未发现细胞病毒效应。培养24-48 h后收集接毒的猪气管上皮细胞,裂解细胞后进行PCR鉴定、测序及IPMA检测。结果表明：PCR扩增获得的病毒全基组片段大小为1 767 bp;全基因序列同源性比对发现,分离株与加拿大毒株（DQ200735）同源性达99.9%;IPMA测定病毒的TCID50为1×10^-4.75/mL。说明PCV-2可以在猪气管上皮细胞中稳定增殖,且效价达到一定水平。
- 汤智慧王翠华郭抗抗
- 关键词：猪圆环病毒2型PCR测序IPMA
- 野猪源PRRSV的分离鉴定及其动物感染试验
- 将2007年陕西西安野生动物园送检的野猪的疑似高热病病料处理后接种于Marc-145细胞,出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变.通过NSP2基因的克隆测序,序列分析比较.表明,本研究所分离毒株Shaanxi-1的NS...
- 王波杨增岐张鹏张冲
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 文献传递
