国家高技术研究发展计划(2007AA10Z1A1)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- fat-1基因密码子优化及在家兔胎儿成纤维细胞中的初步表达
- 2011年
- 根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的秀丽隐杆线虫fat-1基因编码序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因（命名为opfat-1）;从秀丽隐杆线虫中RT-PCR扩增获得fat-1。将扩增的fat-1和合成的opfat-1基因分别构建到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中。采用脂质体Lipo-fectamineTM转染法将fat-1和opfat-1基因转入家兔胎儿成纤维细胞（Rabbit fetal fibroblast cells,rFFCs）中。对比不同DNA和转染试剂用量以及细胞暴露于DNA、转染试剂中作用时间探讨影响rFFCs转染效率的参数,经过优化,最优的rFFCs转染条件为：LipofectamineTM用量2~3μl,DNA量0.8~1.0μg,LipofectamineTM与DNA、细胞共培养时间为8 h。通过绿色荧光标记和RT-PCR检测转染细胞中融合蛋白和目的基因的表达。密码子优化的opfat-1与fat-1相比,体外瞬时表达效率有极为显著的提高;G418抗性筛选获得转基因单克隆细胞,RT-PCR初步验证fat-1和opfat-1基因均在家兔胎儿成纤维细胞中稳定转录表达。
- 周红梅王颖张立凡华绪川王争光徐宁迎郭晓令
- 关键词：密码子优化转染
- C.elegans fat-1基因克隆及其家兔表达载体构建
- 引言Fat-1基因编码的ω-3PUFAs脱氢酶对生物体中ω-6PUFAs进行脱氢反应,生成相应的ω-3PUFAs。ω-3 PUFAs已被证实在预防和治疗冠心病、糖尿病、促进胎儿脑细胞发育、提高青少年记忆力等方面有重要作用...
- 周红梅徐宁迎郭晓令
- 文献传递
- C.elegans fat-1基因克隆及其家兔表达载体构建
- ＜正＞引言Fat-1基因编码的ω-3 PUFAs脱氢酶对生物体中ω-6 PUFAs进行脱氢反应,生成相应的ω-3 PUFAs。ω-3PUFAs已被证实在预防和治疗冠心病、糖尿病、促进胎儿脑细胞发育、提高青少年记忆力等方面...
- 周红梅郭晓令徐宁迎
- 关键词：克隆家兔表达载体构建
- 文献传递
- 秀丽隐杆线虫fat-1基因密码子优化、克隆及家兔表达载体构建被引量：3
- 2010年
- 提取秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)总RNA,采用RT-PCR法扩增出fat-1基因cDNA全长。根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的fat-1cDNA序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1)。将扩增的fat-1cDNA和opfat-1基因分别与pGEM-T Easy和pUC57载体连接,转化大肠杆菌DH5α,获得2种重组克隆子。2种重组子经双酶切后获得的目的片段分别定向克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组表达载体,并对其进行PCR、限制性内切酶酶切分析和测序鉴定,结果表明,成功构建了fat-1基因家兔表达载体pEGFP-opfat-1和pEGFP-fat-1,且读码框正确。
- 周红梅陈哲蔡兆伟蒋晓玲徐宁迎郭晓令
- 关键词：密码子优化克隆家兔表达载体构建
