广东省科技计划工业攻关项目(20108060900041)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李刚曹红朱凤琴李雪玲孙海霞更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院华南农业大学广东省计划生育科学技术研究所更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表达HCV-E2抗原的新型腺相关病毒载体疫苗的构建
- 2017年
- 目的构建以新型腺相关病毒(AAV)为载体,包含1b型丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2目的抗原的丙型肝炎基因疫苗,为进一步研究奠定基础。方法提取慢性丙型肝炎1b型患者血清RNA,用RT-PCR的方法扩增HCV E2片段,构建pAAV.CMV.HCV.E2重组质粒,转染HEK293细胞,筛选出高效表达的重组质粒进行AAV疫苗的包装和纯化。结果经酶切及测序证实,包含HCV目的抗原E2的AAV质粒pAAV.CMV.HCV.E2构建成功,并可高效转染HEK293细胞,表达目的抗原。丙型肝炎基因疫苗r AAV2/8.CMV.HCV.E2,r AAV2/rh32.33.CMV.HCV.E2包装成功,并可高效转染HepG2细胞,表达目的抗原。结论成功构建了以新型AAV为载体的HCV-E2疫苗。
- 赵琳珊朱凤琴曹红钟权涛李刚
- 关键词：丙型肝炎腺相关病毒疫苗
- 1b型丙型肝炎病毒NS3-4b重组腺相关病毒载体的构建及表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建1b型丙型肝炎病毒（HCV）NS3-4b基因重组腺相关病毒载体并了解其在HEK293细胞中的表达，为进一步研究HCV重组腺相关病毒疫苗及其树突状细胞疫苗奠定前期基础。方法收集基因lb型的丙型肝炎病人血清，用RT—PCR的方法扩增NS3-4b全长片段，与腺相关病毒的表达载体pAAV．CMV．eGFP重组，构建pAAV．CMV．HCV．NS3-4b重组表达载体，转染HEK293细胞，检测其蛋白表达情况。结果PCR扩增获得的NS3．4b条带与预期大小（2838bp）一致，重组质粒经双酶切和测序证实NS3-4b基因已重组成功，重组质粒转染HEK293细胞后WesternBlot图可见有目的蛋白表达。结论成功构建腺相关病毒重组HCVNS3_4b载体并且其能在真核细胞中表汰。
- 陈甜孙海霞秦卫兵朱凤琴李雪玲曹红徐启桓李刚
- 关键词：肝炎病毒属腺病毒科
