浙江省科技厅资助项目(2003c33019)
- 作品数：7 被引量：29H指数：5
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- 四嗪二甲酰胺诱导人胃癌AGS、SGC7901细胞系凋亡及其分子机制的实验研究
- 2008年
- 目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制胃癌细胞株 AGS 和 SGC7901增殖并诱导细胞凋亡及其作用机制。方法:将不同浓度的 ZGDHu-1与 AGS 和 SGC7901细胞在体外培养,用台盼蓝染色、SRB 法、5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA 法观察 ZGDHu-1对 AGS 和 SGC7901细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA 凝胶电泳、DNA 含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI 双标记、Hoechst33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。用流式细胞术观察经 ZGDHu-1作用后 AGS 和SGC7901细胞 bcl-2、bax、P53蛋白质和 P38MAPK 和 Stat3磷酸化表达的变化的表达改变。结果:ZGDHu-1能抑制 AGS和 SGC7901细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。AGS 和 SGC7901细胞与 ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于 G_2-M 期;出现典型的细胞肜态改变,DNA 片断化,亚 G1峰检出并显著增加,Annexin-V+/PI-表达升高,Ho-echst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实 ZGDHu-1能诱导 AGS 和 SGC7901细胞凋亡。AGS 和SGC7901细胞经不同浓度的 ZGDHu-1体外培养后,bcl-2蛋白有所下调,但主要是上调 bax 和 P53蛋白,导致 bax/bcl-2比值明显增高,均并呈现剂量依赖性;磷酸化 P38MAPK 表达增强,而磷酸化 Stat3表达降低。结论:ZGDHu-1通过诱导细胞凋亡抑制 AGS 和 SGC7901细胞增殖,其机制可能与上调 bax 和 P53的表达,增强 P38MAPK 的磷酸化和抑制 STAT3的活化有关。
- 吕亚萍周永列胡惟孝邱莲女饶国武王文松
- 关键词：四嗪二甲酰胺胃癌细胞株
- 四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI-1凋亡的机制研究
- 目的:研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制。方法:将不同浓度的ZGDHu-1与SHI-1细胞在体外培养,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、 Annexin-V／...
- 周永列吕亚萍胡惟孝邱莲女王文松刘建栋吴建国
- 关键词：四嗪二甲酰胺线粒体端粒酶
- 文献传递
- 四嗪二甲酰胺对白血病细胞株HL-60体外作用的研究被引量：6
- 2006年
- 目的：观察四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）体外抑制白血病细胞株HL-60增殖，诱导细胞分化和凋亡作用，并对其作用机制进行初步探讨。方法：将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养，台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用；用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V／PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用。用Rh123／PI测定线粒体跨膜电位（△ψm），用流式细胞术检测Bcl-2、Box、P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化。结果：ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力，10ng·ml^-1 ZGDHu-1作用HL-60细胞24～72h后，MTr法检测细胞增殖抑制率分别为（7．3±0．3）％、（15．8±1．0）％和（21．3±1．2）％，均显著高于对照组（P〈0．01）；48h、72h的IC50分别为180、180ng·ml^-1。HL-60细胞经ZGDHu-1作用后，大部分细胞阻滞于G2-M期，G0/1期细胞减少；出现典型的细胞形态改变，DNA片端化，经50～1000ng·ml^-1的ZGDHu-1作用后，SubG1由（3.2±1．6）％上升至（67．7±5.9）％，与对照组（0．7±0.5）％比较，具有显著性差异（P〈0．05），Annexin-V／PI标记升高，TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡。HL-60细胞经10～100ng·ml^-1 ZGDHu-1作用3d后，细胞发生部分分化，NBT阳性率增加，细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加。ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中，Bcl-2表达无变化，但Box表达显著增加，Bax／Bcl-2的比值升高，Fas表达增强，而P53表达无变化。随ZGDHu-1作用的浓度增加，△ψm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论：ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力，低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化，高�
- 周永列吕亚萍胡惟孝邱莲女王文松杨忠愚刘建栋
- 关键词：四嗪二甲酰胺细胞株HL-60细胞凋亡细胞分化
- 四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI-1凋亡及其分子机制研究被引量：5
- 2007年
- 本研究探讨四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu-1在体外培养SHI-1细胞,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导SHI-1细胞凋亡过程中bcl-2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达变化。用RT-PCR观察经ZGDHu-1作用后SHI-1细胞bcl-2、bax、p53基因表达改变;同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明:ZGDHu-1能诱导SHI-1细胞凋亡,呈作用时间和剂量的量效关系,出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加;Annexin-V/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变。SHI-1细胞经不同浓度的ZGDHu-1体外培养后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是bax基因和蛋白上调,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调,均呈剂量依赖性。随ZGDHu-1作用浓度的增加,ΔΨm下降,而线粒体膜蛋白表达显著升高,端粒酶hTERT-mRNA的表达显著下调。结论:ZGDHu-1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl-2比值,使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu-1诱导细胞凋亡的途径之一,Fas也参与其中,端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点。
- 周永列吕亚萍胡惟孝邱莲女王文松刘建栋吴建国
- 关键词：四嗪二甲酰胺端粒酶
- 四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549的体内外作用被引量：13
- 2007年
- 为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549增殖、诱导细胞凋亡和体内抗肿瘤活性的作用及其机制,将不同浓度的ZGDHu-1与A549细胞在体外培养,用台盼蓝染色、SRB法、5′-溴-2′脱氧尿苷-ELISA法,观察ZGDHu-1对A549细胞增殖的作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、AnnexinV/PI双标记、Hoechst33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。腹腔注射ZGDHu-1后观察其对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。用RT-PCR和流式细胞术观察A549细胞bcl-2,bax,p53基因和蛋白质的表达改变。结果表明,ZGDHu-1能抑制A549细胞的增殖和活力,呈现作用时间和剂量的依赖关系。A549细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现DNA片段化,亚G1峰显著增加,AnnexinV+/PI-表达升高,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。ZGDHu-1以10,20及40mg.kg-1剂量给裸鼠体内用药14d后,移植瘤生长抑制率分别为43.7%,56.9%和60.0%。A549细胞经ZGDHu-1作用后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是上调bax基因和蛋白,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白表达也上调,均呈现剂量依赖性。ZGDHu-1在体内能明显抑制移植瘤的生长,体外通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖,其机制可能与上调bax和p53基因的表达有关。
- 周永列胡惟孝吕亚萍邱莲女王文松杨忠愚刘建栋饶国武
- 关键词：四嗪二甲酰胺肺癌细胞株A549增殖肿瘤移植
- 四嗪二甲酰胺抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡的研究被引量：9
- 2006年
- 目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用。方法将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5′-溴-2′脱氧尿苷(B rdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对HepG2细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Ho-echst33258荧光染色和ELISA法测定DNA片段等技术检测细胞凋亡。结果ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。HepG2细胞与ZG-DHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现典型的细胞形态改变,DNA片断化,亚G1峰检出并增加,Annexin V+/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HepG2细胞凋亡。结论ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。
- 周永列吕亚萍胡惟孝邱莲女王文松杨忠愚刘建栋
- 关键词：四嗪二甲酰胺肝癌增殖细胞凋亡
- 连续荧光监测法测定蛋白酶体活性及其在筛选蛋白酶体抑制剂中的应用
- 2008年
- 目的建立用连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的方法,研究其在蛋白酶体抑制剂筛选中的应用价值。方法用特异性的荧光多肽底物Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Suc-LLVT-AMC),Z-Val-Val-Arg-AMC(ZVVA-AMC),Z-Leu-G1u-Leu-βNA(ZLLC-βNA),用连续荧光监测法分别测定蛋白酶体糜凝乳蛋白酶样(chymotrypsin-like,CT-L)、胰蛋白酶样(trypsin-like,T-L)和肽基谷氨酰肽水解酶样(PGPH-like,PGPH-L)活性,对测定条件最优化,并进行了其方法学评价。用该法测定了目前临床公认的蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib又称PS-341)和课题组自主合成的一种潜在的蛋白酶体抑制四嗪二甲酰胺(ZCDHu-1),对20S蛋白酶体和B16、Namalwa细胞蛋白酶体提取物的抑制作用。结果连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的最适pH8.2;0.3gSDS对CT-T活性有激活作用;CT-L、T-L、PCPH-L的K。分别为3.55、4.12、4.88μmol/L;酶反应进程曲线的线性期达20min;酶活性测定的线性范围为20S蛋白酶体的蛋白浓度分别达100μg/L、120μg/L、100μg/L,B16细胞蛋白酶体提取物的蛋白浓度均达200mg/L;精密度批内CV为(2.25～5.78)%,批间CV在(3.75～8.42)%。用该法测定PS-341对20S蛋白酶体CT-L、T-L、PGPH-L的抑制活性,其IC50分别为12.63、12.42、24.40nmol/L;测定ZCDHu-1对20S蛋白酶体的抑制活性,IC50分别为1.24、0.92、0.51μmol/L。结论连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的方法为快速、有效、大规模筛选蛋白体抑制剂药物提供了一个技术平台,也为临床上应用蛋白酶体抑制剂提供了一个有用的检测指标。
- 周永列张伟民吕亚萍胡惟孝
- 关键词：蛋白酶体抑制剂硼替佐米四嗪二甲酰胺
- 四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549体内外作用的实验研究
- 目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549增殖并诱导细胞凋亡和体内抗肿瘤活性以及作用机制。方法:将不同浓度的ZGDHu-1与A549细胞在体外培养,用台盼蓝染色、SRB 法、5’-溴-2’脱氧尿苷...
- 周永列胡惟孝吕亚萍邱莲女王文松杨忠愚刘建栋饶国武
- 关键词：四嗪二甲酰胺肺癌肿瘤移植
- 文献传递
- 四嗪二甲酰胺抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡的研究
- 目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用．方法:将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5’ -溴-2,脱氧尿苷(Brdu)-ELI...
- 周永列吕亚萍胡惟孝邱莲女王文松杨忠愚刘建栋
- 关键词：四嗪二甲酰胺肝癌增殖细胞凋亡
- 文献传递
- 四嗪二甲酰胺体外诱导NB4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究
- 目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞株NB4增殖,诱导细胞分化争凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨．方法:将不同浓度的ZGDHu-1与NB4细胞在体外培养,并以全反式雏甲酸作阳性药物对照,用细胞计...
- 周永列吕亚萍胡惟孝邱莲女王文松吴建国刘建栋
- 关键词：四嗪二甲酰胺有丝分裂原激活蛋白激酶BAX/BCL-2端粒酶逆转录酶
- 文献传递
