重庆市教委科研基金(KJ090328)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：龙志敏贺桂琼赵蕾汪克建骆世芳更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目重庆市教委科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白酶体抑制剂处理神经细胞系后Nicastrin的表达变化及其与Aβ的关系被引量：1
- 2011年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内Nicastrin(NCT)的表达变化,及其与γ-分泌酶活性和Aβ生成的关系。方法运用亚细胞器分级分离技术、免疫共沉淀、Western blot和ELISA等检测神经细胞内NCT的表达及Aβ水平。结果正常情况下NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,极少量分布于溶酶体,蛋白酶体抑制剂Lac-tacystin处理后NCT水平升高(P<0.001),且细胞内增多的NCT也主要聚集在内质网和高尔基复合体;NCT与泛素在细胞内共存;NCT的蛋白降解不受PS的影响;NCT降解受阻可引起细胞内γ-分泌酶的底物C99、C83显著减少,而γ-分泌酶的产物Aβ40、Aβ42的生成显著增多(P<0.01)。结论 NCT的降解可通过泛素-蛋白酶体途径实现,蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT水平升高,且增多的NCT可促进APP的代谢及Aβ的生成。
- 龙志敏赵蕾骆世芳汪克建贺桂琼
- 关键词：NICASTRIN蛋白酶体抑制剂泛素化修饰Γ-分泌酶AΒ
- γ-分泌酶组件NCT在痴呆小鼠中枢神经系统的分布及表达被引量：4
- 2011年
- 目的研究γ-分泌酶组件蛋白单过性跨膜蛋白(NCT)在APP/PS1双重转基因痴呆小鼠中枢神经系统(CNS)中的分布与表达及与阿尔茨海默病(AD)的关系。方法对APP/PS1双重转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型,分别用免疫组化、免疫荧光双标及激光共聚焦等技术,检测NCT在APP/PS1双重转基因痴呆小鼠及同窝野生型小鼠CNS内的分布及表达。结果 NCT广泛分布于成年AD小鼠CNS各区域,包括大脑新皮质、海马、嗅脑、丘脑、纹状体、小脑、脑干和脊髓等;而神经元外Aβ的沉积选择性分布于CNS的大脑皮质和海马等区域;大脑皮质及海马内的NCT阳性神经元数量要多于Aβ阳性神经元,且神经元内的Aβ与NCT出现了共存;同时,大脑皮质和海马内的NCT与PS1分布趋势高度一致,且在神经元内出现了共存。痴呆型与同窝野生型新生小鼠大脑皮质内NCT阳性神经元排列致密;随着小鼠的发育,脑组织单位面积内NCT阳性神经元数量逐渐减少;但痴呆小鼠脑内NCT阳性神经元的细胞膜和细胞质均浓染;而同窝野生型小鼠脑内的NCT阳性神经元仅细胞膜周围染色较深,而胞质染色极浅甚至不着色。结论 NCT在痴呆小鼠和正常野生型小鼠脑内的分布及表达出现差异,可能与Aβ的生成和AD的发生相关。
- 龙志敏赵蕾贺桂琼宋冲楚亚楠
- 关键词：Γ-分泌酶AΒ中枢神经系统
- 蛋白酶体抑制剂对神经细胞nicastrin表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术、免疫荧光双标技术,检测蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT的蛋白表达变化。结果:Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性转染的NCT的表达显著增强,高度特异的蛋白酶体抑制剂lacta-cystin对NCT蛋白的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;放射性同位素脉冲示踪结果显示,蛋白酶体抑制剂可显著增强细胞内新合成的NCT蛋白的表达水平,其增强作用是通过阻止[35S]-NCT的蛋白降解来实现的;免疫荧光双标结果提示,NCT与泛素在细胞内共存。结论:神经细胞内NCT的降解由蛋白酶体途径介导;NCT在降解之前经泛素化修饰。
- 骆世芳龙志敏高宝兵汪克建贺桂琼
- 关键词：NICASTRIN蛋白酶体抑制剂神经元
- 溶酶体酶抑制剂对神经细胞内Nicastrin表达水平的影响
- 2012年
- 目的探讨溶酶体酶抑制剂对阿尔茨海默病(AD)相关蛋白Nicastrin(NCT)表达的影响,以期明确NCT的蛋白降解是否与溶酶体途径有关。方法在用人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用溶酶体酶抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western印迹、亚细胞器的分级分离、免疫荧光双标等技术,检测溶酶体酶抑制剂处理后神经细胞内NCT的表达变化。结果亚细胞器分级分离实验显示,正常情况下神经细胞内的NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,少量NCT分布于溶酶体。Western印迹结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性成熟NCT(mNCT)的表达显著增强,且溶酶体酶抑制剂氯喹对mNCT蛋白表达的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性,但溶酶体抑制剂对非成熟NCT(imNCT)的表达无影响;免疫荧光双标结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,细胞内NCT的表达增强,且增多的NCT主要聚集在溶酶体内。结论神经细胞内mNCT的降解与溶酶体途径有关。
- 彭雪华龙志敏骆世芳贺桂琼
- 关键词：NICASTRIN神经细胞蛋白降解
- 蛋白酶体抑制剂对神经细胞前咽缺陷蛋白-1表达的影响
- 2010年
- 目的 探讨神经细胞内前咽缺陷蛋白-1（Aph-1）的蛋白降解是经蛋白酶体途径还是经溶酶体途径介导.方法 在人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）建立稳定表达Aph-1细胞株的基础上,应用蛋白酶体和溶酶体酶抑制剂分别处理Aph-1细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术（Pulse-chase）、免疫荧光双标等技术,检测细胞内Aph-1的蛋白表达变化.结果 Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂能显著提高神经细胞内源性和外源性Aph-1的蛋白表达水平,且高度特异的蛋白酶体抑制剂乳胞素（Lactacystin）对Aph-1表达的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;而非蛋白酶体蛋白酶抑制剂ALLM和溶酶体酶抑制剂对Aph-1的蛋白表达无影响;Pulsechase结果显示,蛋白酶体抑制剂可增强细胞内新合成Aph-1的表达水平,其增强作用是通过阻止35S-Aph-1的蛋白降解实现;免疫荧光双标结果显示,Aph-1与泛素在细胞内共存.结论 神经细胞内Aph-1的蛋白降解由蛋白酶体途径介导,与溶酶体途径无关;Aph-1在降解之前经泛素化修饰.
- 汪克建龙志敏高宝兵赵蕾陆蔚天甘胜伟贺桂琼
- 关键词：神经元膜蛋白质类蛋白酶抑制药
- 前咽缺陷蛋白-1在APP／PS1转基因阿尔茨海默病小鼠模型中枢神经系统的分布及表达被引量：1
- 2011年
- 目的研究γ-分泌酶组件蛋白APH-1（anterior pharynx defective 1，APH-1）在成年APP／PS1双转基因痴呆小鼠中枢神经系统（central nervous system，cNs）中的分布及表达，以及在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）模型鼠和野生型小鼠脑中的表达差异，以进一步明确APH1与AD的关系。方法对APP／PS1双转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型，用免疫组化方法检测APH1在成年APP／PS1双转基因痴呆模型小鼠CNS内的分布及表达，以及比较APH-1在出生后1d、7d、21d、120d的痴呆小鼠及同窝野生型小鼠脑内的表达和分布情况。结果APH-1广泛分布于成年痴呆小鼠CNS的各区域，包括大脑皮质、海马、嗅脑、丘脑、纹状体、尾状核、中缝大核、小脑、脑干和脊髓等；出生1dAD模型鼠与同窝野生型小鼠大脑皮质内APH-1均有高水平表达，而出生7d、2id表达水平较低，且成年小鼠脑中其表达量有所回升；各时间点痴呆小鼠脑内APH-1免疫阳性反应都比同窝野生型小鼠显著增强（P〈0．05）。结论APH1在痴呆小鼠的CNS中广泛分布，但不同脑区分布和表达存在差异；且痴呆小鼠和正常野生型小鼠脑内APH-1分布和表达有区别，这些差异可能与AD的发生相关。
- 赵蕾龙志敏贺桂琼楚亚楠宋冲
- 关键词：中枢神经系统阿尔茨海默病
