“重大新药创制”科技重大专项(2012ZX09503001-003) 作品数:14 被引量:29 H指数:4 相关作者: 鱼红闪 金凤燮 刘春莹 刘廷强 徐龙权 更多>> 相关机构: 大连工业大学 韩国庆熙大学 大连医科大学 更多>> 发文基金: “重大新药创制”科技重大专项 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 生物学 医药卫生 更多>>
异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质 被引量:1 2016年 采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na^+、K^+、Ca^(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe^(3+)、Cu^(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。 徐丹 金凤燮 鱼红闪关键词:分离纯化 酶性质 西洋参多糖酶解产物寡糖的纯化及鉴定 被引量:1 2016年 对生物酶法转化西洋参多糖的产物进行分离纯化得到寡糖,并对其进行鉴定。西洋参多糖的酶解产物经Sevage法除蛋白、Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,得到2个组分PP-1、PP-2相对分子质量约为7.5×10~4和6.7×10~3,其中PP-2为酶降解寡糖。HPLC法对PP-2进行鉴定,结果表明,PP-2为均一的寡糖,其单糖组成为葡萄糖。高碘酸氧化、Smith降解、红外光谱对PP-2的结构进行鉴定,表明PP-2为主链由α-D-(1→4)和α-D-(1→6)吡喃葡萄糖构成的葡聚糖。 李丽新 金凤燮 鱼红闪关键词:西洋参多糖 生物酶法 寡糖 白头翁皂苷H3糖苷酶的分离纯化及酶性质 被引量:4 2015年 对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷H3糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯的酶蛋白,并对其性质做了进一步研究。结果表明,该酶分子质量约为40ku;最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0;在pH 4.0-7.0,温度低于40℃条件下具有相对稳定的酶活力;金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响,而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用;米氏常数为17.01mmol/L,最大反应速度为0.38mmol/(L·min)。 林迪 金凤燮 鱼红闪关键词:糖苷酶 酶性质 白头翁皂苷及其酶解产物的分离纯化 被引量:3 2013年 从白头翁中提取了皂苷作为酶反应底物,使用菌种Absidiasp.P00r产酶催化底物生成产物,使用硅胶柱层析分离纯化底物和产物。底物经体积比8.5∶1.5和8.3∶1.7的氯仿-甲醇洗脱液洗脱得到4种底物皂苷,得率分别为10.6%、13.8%、8.2%、15.3%,HPLC检测其纯度分别为83.94%、81.99%、80.18%、83.40%;产物经体积比8.5∶1.5的氯仿-甲醇洗脱液洗脱得到3种皂苷,得率分别为15.0%、7.1%、10.3%,HPLC检测其纯度分别为93.45%、91.28%、100.00%。 王征魁 曹体爽 刘廷强 鱼红闪关键词:酶解产物 HPLC 一种霉菌产的人参皂苷酶水解Rb_1和Rb_2皂苷糖基的机理 被引量:2 2015年 利用TLC法确定了一种霉菌产的特异人参皂苷酶水解Rb1和Rb2人参皂苷糖基的机理。结果表明,水解人参皂苷Rb1和Rb2的糖基种类和位置不同。水解Rb1皂苷时,先水解其20-O-β-(1→6)-葡萄糖苷键生成Rd,再依次水解Rd上2个3-O-β-(1→2)-葡萄糖苷键生成F2及终产物C-K;但在水解Rb2时,先水解其3-O-β-(1→2)-葡萄糖苷键生成C—O,再依次水解3-O-β-(1→2)-葡萄糖苷键和20-O-α-(1→6)-阿拉伯糖苷键生成C-Y和C-K。 张天杨 刘春莹 鱼红闪 金凤燮关键词:人参皂苷RB1 薄层层析法 两种林下参各部位皂苷的组成成分 被引量:4 2018年 对两种林下参的芦头、主根、须根等各部位皂苷组成与分布进行研究。利用正丁醇萃取法提取总皂苷,桓仁产的15年林下参的芦头、主根、须根的总皂苷质量分数分别为7.68%、3.47%、6.48%;抚松产的25年林下参的芦头、主根、须根的总皂苷质量分数分别为6.67%、2.88%、4.93%;两种林下参芦头中总皂苷质量分数是主根总皂苷质量分数的2倍。经TLC和HPLC检测,25年林下参芦头与主根中Rb1、Rg1、Re质量分数较高,分别占总皂苷的54%、52%,须根中Rb1、Rc、Rg1、Re质量分数较高,占总皂苷的52%;15年林下参芦头中Rb1、Rg1、Re质量分数较高,占总皂苷的48%,主根和须根中Re、Rb1、Rc质量分数较高,分别占总皂苷的40%、45%。从两种林下参中检测到8种高活性稀有皂苷20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、20(R)-Rg3、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3。林下参各部位中人参主要皂苷及主根中稀有皂苷的质量分数,随生长年限增加而增加,但芦头和须根中稀有皂苷含量,随生长年限增加而减少。 苏欣然 刘春莹 王越 鱼红闪 金凤燮关键词:林下参 人参皂苷 双亚基丹酚酸酯酶基因的表达载体构建及其生物转化 2016年 为了实现丹酚酸酯酶的外源性表达,利用了大肠杆菌和毕赤酵母两种表达系统,原核大肠杆菌采用p ET 28a和p ET 32a构建表达载体,并对重组大肠杆菌进行分别诱导表达和共表达;真核毕赤酵母采用p PIC9K构建共表达载体,对重组毕赤酵母进行诱导表达。研究结果表明,两种体系均能诱导表达出丹酚酸酯酶,蛋白在大肠杆菌系统中得到了高效表达,但未显示出该酶活力。毕赤酵母系统可使蛋白分泌性表达,表达产物具有一定的丹酚酸酯酶活力,但表达量不高。说明大肠杆菌系统体系更为适合大量表达丹酚酸酯酶,由此提供了一种该酶的外源表达方法。 程妍 刘春莹 李泰厚 鱼红闪关键词:毕赤酵母 克隆表达 芦丁鼠李糖苷酶水解反应液中鼠李糖的分离纯化 被引量:3 2013年 利用微生物Absidiasp.R9g产的芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR),水解芦丁制备鼠李糖。24.0g芦丁经酶解后,采用大孔吸附树脂对产物进行分离,得到含有4.18g鼠李糖的粗糖液,其得率为17.4%。结合结晶法对鼠李糖粗糖液进行精制,当鼠李糖水溶液质量浓度达到0.4g/mL时,鼠李糖可达到过饱和状态而开始结晶,所得晶体颗粒饱满,无色透明,结晶得率为27.5%。通过高效液相色谱检测,纯度达到99.0%。 张美超 刘廷强 王东明 金凤燮 鱼红闪关键词:鼠李糖 分离纯化 白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶的分离纯化及酶性质 被引量:2 2017年 对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶(PSGaseⅡ)进行分离纯化,得到电泳纯酶蛋白,对其酶学性质以及该酶对底物的催化反应过程进行了研究。结果表明,该酶蛋白的分子质量为56ku,最适反应pH为4.0,在pH 3.0~7.0酶活力稳定;最适反应温度为40℃,在20~40℃酶活力稳定;金属离子Na^+、K^+、Mg^(2+)对酶反应无显著影响,而Fe^(3+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)对其有较强的抑制作用。酶反应动力学参数K_m为19.60mmol/L,v_(max)为21.60mmol/(L·h)。PSGaseⅡ对白头翁皂苷PSⅠ的催化反应过程结果表明反应是分步进行的,PSGaseⅡ以白头翁皂苷PSⅠ为底物,先催化降解为中间产物白头翁皂苷PSⅡ,继续催化反应,最终生成白头翁皂苷A。 代蕊 刘春莹 徐龙权 林完泽 鱼红闪关键词:水解酶 酶性质 人参皂苷酶Ⅲ型转化人参皂苷Rc制备稀有皂苷C-Mc 被引量:2 2017年 利用基因构建克隆的E.coli C41菌产人参皂苷酶Ⅲ型,研究了酶转化人参皂苷Rc制备高活性稀有皂苷C-Mc的方法。结果发现,人参皂苷酶Ⅲ型先水解人参皂苷Rc的3-O-末端葡萄糖基生成C-Mc1,再水解C-Mc1的3-O-葡萄糖基生成C-Mc。人参皂苷酶Ⅲ型水解4.8g的人参皂苷Rc,得到2.8g产物,经HPLC检测,其纯度为90%。经核磁共振检测,产物结构为20-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→6)-β-D-葡萄糖基-20(S)-二醇苷元,即C-Mc。 李冠亨 刘春莹 徐龙权 林完泽 鱼红闪关键词:高效液相色谱 核磁共振