广西壮族自治区卫生厅资助项目(200614)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：李力王素梅黎丹戎唐步坚张玮更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 组织蛋白酶L基因真核表达质粒的构建与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的真核表达质粒并进行表达鉴定。方法:采用RT-PCR技术从人卵巢癌组织总RNA中逆转录CTSL基因的cDNA全长,克隆到pMD18-T载体上;亚克隆至pcDNA3·1载体,重组阳性克隆进行酶切及测序鉴定,重组质粒瞬时转染HO8910细胞,RT-PCR和western-blot检测CTSL基因和蛋白表达。结果:PCR克隆出CTSL cDNA全长,成功克隆入pMD18-T载体,亚克隆至pcDNA3·1载体,重组阳性克隆酶切及测序鉴定证实CTSL基因已正确插入pcD-NA3·1载体。RT-PCR和Western-blot结果证实CTSL基因能够在HO8910细胞中正确表达。结论:成功构建了CTSL基因的真核表达质粒,为下一步探讨CTSL基因在卵巢癌中的作用提供了实验基础。
- 王素梅李力张玮黎丹戎唐步坚
- 关键词：组织蛋白酶L真核表达卵巢癌
- 组织蛋白酶L基因的RNA干扰真核表达载体的构建
- 2008年
- 目的:构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的RNA干扰真核表达载体。方法:根据GenBank数据库提供的CTSL基因核苷酸序列,设计并化学合成4对双链小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),瞬时转染卵巢癌细胞系A2780细胞,通过半定量RT-PCR检测各转染细胞CTSL表达筛选一个有效的si RNA序列。设计并合成能表达其小发卡结构RNA(Small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与psilence4.1-CMV-neo质粒定向连接,构建真核表达载体,DNA测序进行鉴定,并通过半定量RT-PCR验证其干扰效果。结果:构建CTSL的RNA干扰真核表达载体psilence4.1-CMV-neo-CTSL,经DNA测序证实与设计完全一致,通过半定量RT-PCR证实其能够沉默A2780细胞的CTSL基因表达。结论:CTSL基因RNA干扰真核细胞表达载体构建成功。
- 王素梅李力张玮黎丹戎唐步坚
- 关键词：真核表达载体RNA干扰
- RNA干扰CTSL表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移被引量：1
- 2010年
- 目的:构建组织蛋白酶L基因(cathepsin L,CTSL)RNAi的真核表达载体,探讨干扰CTSL基因表达对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响。方法:设计并合成4对CTSL小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染卵巢癌A2780细胞,RT-PCR检测各转染细胞CTSL的表达,筛选沉默效果最好的siRNA序列。设计并合成CTSL-shRNA序列,与psilence4.1-CMV-neo载体连接,构建psilence4.1-CTSL表达载体。psilence4.1-CTSL转染A2780细胞,获得稳定转染克隆A2780-CTSL。RT-PCR和Western blotting验证CTSL基因干扰效果,MTT法和集落形成实验检测A2780细胞的增殖,流式细胞术检测A2780细胞周期,Transwell侵袭小室实验检测A2780细胞体外侵袭和迁移能力。结果:筛选出干扰效果最好的siRNA-CTSL-1202序列,并成功构建相应的CTSL-shRNA表达载体psilence4.1-CTSL。稳定转染psilence4.1-CTSL能沉默A2780细胞中CTSL的表达。沉默CTSL基因后可抑制A2780细胞的侵袭和转移,但不影响A2780细胞的增殖、细胞周期和黏附活性。结论:成功构建CTSL基因siRNA的真核表达载体,RNA干扰CTSL基因表达可抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。
- 王素梅李力张玮黎丹戎唐步坚
- 关键词：SIRNA卵巢癌
