黑龙江省自然科学基金(C201215)
- 作品数：3 被引量：11H指数：1
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- 胰腺干细胞负向筛选分子的鉴定
- 2013年
- 背景:利用胰腺干/祖细胞体外增殖分化形成β细胞是细胞替代疗法治疗糖尿病的潜在细胞来源之一。由于缺少有效的筛选分子,胰腺干细胞的分离及特性研究进展缓慢。目的:观察植物凝集素花生凝集素、菜豆凝集素和热稳定抗原对胰腺细胞的标记情况,以期找到胰腺干细胞的负向筛选分子。方法:采用荧光组织化学方法对植物凝集素(花生凝集素、菜豆凝集素)和细胞表面分子热稳定抗原抗体在成体小鼠胰腺、胚胎胰腺及切除后再生胰腺组织中进行化学及荧光组织化学检测;流式细胞仪分析负向筛选分子对胰腺细胞分群情况的影响;应用细胞培养方法对不同群细胞进行体外培养和观察。结果与结论:花生凝集素对胚胎胰腺中分化的腺泡细胞能较好标记,但不标记未分化的胰腺干/祖细胞及前体细胞;菜豆凝集素对未分化和分化的胚胎期胰腺细胞均有标记,热稳定抗原能标记正在分化的胚胎胰腺祖细胞、前体细胞和已分化胰腺细胞。在成体胰腺中,花生凝集素和菜豆凝集素均能标记胰腺腺泡和部分导管细胞,但不能标记胰岛细胞;热稳定抗原能特异标记腺泡细胞、导管细胞、血管内皮细胞、血细胞及再生胰腺新生区的导管样结构。PNA-/lowHSA-/low细胞占总细胞量的1.6%,对其培养观察发现,其中富含体积较小、三角形或多角形的上皮细胞,这些细胞可连续传代。提示协同使用花生凝集素与热稳定抗原可以筛除大部分分化的胰腺细胞及部分非胰腺细胞,从而富集胰腺干细胞。
- 冯锐成郎延贺梁洋吴莹滕春波
- 关键词：干细胞植物凝集素花生凝集素胰腺干细胞标志分子
- 通过整体消化法分离具有集落形成能力的胰腺上皮样细胞
- 2014年
- 目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体消化的方法,将成体小鼠整个胰腺取下,摘除系膜及大的血管,置于胶原酶中消化20min,用PBS吹打胰腺组织,得到的细胞悬液,离心后去除上清与细胞碎片,用培养基重悬实质细胞,接种于6 cm培养皿中,培养7-10天后得到单细胞集落。结果:整体消化法不剪碎胰腺组织,从而避免多种胰腺细胞的参与,得到较为纯净的胰腺上皮细胞悬液,细胞总体数量小于部分消化法,但是单细胞比率远远高于部分消化法,得到的细胞集落更纯净,不需要去除成纤维细胞,方便筛选及进一步扩大培养。结论:整体消化法能够分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大的上皮样集落的细胞。该分离方法方便、快捷,为今后进一步研究成体胰腺干细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。
- 梁杰孔德麟梁洋李丹冯锐成滕春波
- 关键词：成纤维细胞
- Hippo信号通路转录效应因子TAZ/YAP对间充质干细胞分化的调控被引量：11
- 2013年
- 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种多能性细胞,可分化为软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等不同世系细胞。一些世系特异性转录因子,如Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)、过氧化物增殖子激活型受体γ(Peroxisome proliferator-activator receptor gamma,PPARγ)、肌发生分化因子1(Myogenic differentiation 1,MyoD)等在MSCs分别向成骨、脂肪和生肌细胞分化过程中具有关键的调控作用。近几年研究发现,Hippo信号通路可通过其转录效应因子TAZ(Tafazzin)/YAP(Yes-associated protein)对上述世系特异性转录因子进行调控,从而影响MSCs的分化方向。TAZ与RUNX2结合可增强骨发生程序的执行并促进MSCs向成骨分化,而与PPAR-γ结合则会抑制MSCs向脂肪细胞方向分化。在MSC样细胞中,TAZ异位表达会以一种MyoD依赖方式增加生肌基因表达并加速肌纤维生成。此外,BMP-2、TNF-α、Eph-Ephrin等信号通路,小分子药物(KR62980、TM-25659等)以及机械刺激都可通过调控Hippo信号通路转录效应因子TAZ/YAP活性影响MSCs的命运决定。文章综述了哺乳动物Hippo信号通路的转导途径,转录效应因子TAZ/YAP与间充质世系特异性转录因子的作用机理,及与其他信号通路相互作用对MSCs分化的影响。
- 门通朴善花滕春波
- 关键词：TAZ间充质干细胞分化
