公共文化服务平台

奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎及其疫苗的研究进展被引量：2: 2011年; 金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的重要致病菌,笔者对奶牛乳腺炎、金黄色葡萄球菌及其致病机理、金黄色葡萄球菌乳腺炎疫苗的研究等进行了综述,并对新型疫苗的研究进行了展望。; 孙涛武泽轩王玲玲王洪梅杨宏军何洪彬; 关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌疫苗

牛整合素β5亚基基因的构建与原核表达: 2011年; [目的]构建牛整合素β5亚基(ITGB5)基因,并进行原核表达。[方法]扩增目的基因,将其重组到pET-32a(+)质粒中,将经鉴定为阳性的重组克隆,转化大肠杆菌感受态细胞表达蛋白后纯化。[结果]从牛甲状腺、扁桃体扩增到目的基因ITGB5;ITGB5基因表达产物的SDS-PAGE结果显示,在88 KD处出现表达产物及纯化后的蛋白;W estern-blot分析表明,抗血清可与原核表达的蛋白特异性结合。[结论]表达、并纯化了ITGB5蛋白。; 陈旭王洪梅武建明刘晓王立群何洪彬; 关键词：基因

牛流行热病毒山东流行株G基因的克隆及序列分析被引量：1: 2012年; 为了解牛流行热病毒(BEFV)山东流行株G基因的特点,从临床病料中获得山东流行株牛流行热病毒的G基因,并对其进行序列测定和分析。参考GenBank中牛流行热病毒的G基因序列,设计并合成一对特异性扩增G基因引物进行PCR,扩增目的片段,并克隆于pEASY-T3载体上,筛选阳性重组质粒进行序列测定,用MEGA软件、NJ法构建进化树。结果显示,该流行毒株G基因与GenBank中其他BEFV株G基因的核苷酸推导氨基酸的同源性均大于96%;遗传进化关系分析结果表明,BEFV山东流行株与中国台湾流行株具有较高同源性和较近的亲缘关系。; 侯佩莉杨宏军王洪梅刘文浩何洪彬; 关键词：牛流行热病毒 G基因

口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体的构建及VP1基因稳定表达细胞系的建立: 2010年; 【目的】构建口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1,并建立稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。【方法】采用RT-PCR技术从口蹄疫病毒材料中扩增出VP1基因,并将其连入慢病毒载体FG9中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,转染BHK-21细胞,96h后经流式细胞分选筛选GFP阳性细胞,细胞增殖后经WB检测VP1基因的表达。【结果】VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1测序正确,转染BHK-21细胞经流式细胞仪筛选的GFP阳性细胞后可稳定表达VP1基因。【结论】VP1基因重组慢病毒载体构建成功并获得了稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。; 代文君王洪梅刘晓高运东于力王立群仲跻峰何洪彬; 关键词：口蹄疫病毒 VP1 稳定细胞系

动物转基因研究进展被引量：1: 2011年; 动物转基因技术是一项新的生物学技术,可应用于畜牧业及生物医学等领域。对转基因动物的制作方法及应用进行了综述,对其发展趋势进行展望,以促进动物转基因研究的开展。; 杨慧婷王洪梅孙涛高运东仲跻峰何洪彬; 关键词：转基因动物畜牧业生物医学

Asia1型口蹄疫病毒P1基因的原核表达及其抗血清的制备: 2011年; [目的]研究Asial型口蹄疫病毒P1基因原核表达及其抗血清的制备。[方法]利用基因克隆技术获得Asia1型口蹄疫病毒(FM-DV)的P1基因,然后将P1基因重组到pET-32a(+)质粒中;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导及蛋白纯化后,进行SDS-PAGE分析;将重组菌BL21培养物用超声波裂解,对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。[结果]获得了重组性阳性克隆;SDS-PAGE结果表明在105 kD处出现了目的条带;Western-blot分析表明,抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶5 120,[结论]为建立FMDV的血清学诊断方法及其基因工程疫苗的研究奠定了基础。; 武刚王洪梅刘晓王立群于力仲跻峰何洪彬; 关键词：P1基因原核表达抗血清

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)(1354-1802)的原核表达及抗血清制备: 2012年; [目的]制备人组织型纤溶酶原激活剂t-PA(1354-1802)抗血清,并测定其效价,为深入研究t-PA基因功能奠定基础。[方法]利用基因克隆技术获得t-PA(1354-1802)催化域基因片段,然后将其重组到pET-32a(+)质粒中,进行鉴定及序列分析;将测序正确的阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导、蛋白纯化及免疫兔试验。[结果]SDS-PAGE结果显示,37 kD处出现特异性条带;对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备t-PA蛋白抗血清,Western blot分析表明,抗血清可与标准品t-PA蛋白特异性结合,间接ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶12 800。[结论]成功制备了t-PA(1354-1802)抗血清,为t-PA基因功能的深入研究奠定了基础。; 王青泉武建明李秀梅王立群何洪彬王洪梅刘晓; 关键词：T-PA 原核表达抗血清

fat-1转基因动物研究进展被引量：3: 2012年; 转染秀丽隐杆线虫fat-1基因后的哺乳动物具备了将n-6多不饱和脂肪酸(PUFAs)转化为n-3 PUFAs的能力,可降低动物机体的n-6/n-3 PUFAs比例。n-3 PUFAs有益于人类健康,可减少多种相关疾病发生的风险,但人体内不能合成n-3 PUFAs,其必须依赖于富含n-3 PUFAs的食品,fat-1转基因动物将成为人类必需的n-3 PUFAs的重要来源。对fat-1及其转基因动物的研究现状进行综述。; 杨慧婷王洪梅方永志刘文浩武建明何洪彬

具有绿色荧光标记的表达T7 RNA聚合酶稳定细胞系的建立被引量：1: 2011年; [目的]建立具有绿色荧光标记表达T7 RNA聚合酶的稳定细胞系。[方法]从BL21(DE3)大肠杆菌中克隆出T7RNAP基因,定向克隆质粒FG12后,构建了表达T7 RNA聚合酶基因(T7)的Lenti-virus重组质粒FG12-T7 RNAP。用此重组质粒转染293T细胞,WB可检测出瞬时表达的T7 RNAP蛋白;利用辅助质粒对表达T7的非复制型Lenti-virus病毒进行体外包装,所获得的非复制型Lenti-virus病毒感染BHK-21细胞,利用GFP通过流式细胞分选仪筛选表达T7的细胞系,并利用WB检测基因的表达。[结果]通过WB检测出不同代次的阳性细胞中均能稳定表达目的基因T7 RNA聚合酶。[结论]T7 RNA聚合酶能顺利在真核细胞内表达,并在此基础上建立的稳定细胞系为RNA病毒体内拯救技术平台的建立奠定了基础。; 宋玲玲李欣王洪梅高远东王立群仲跻峰何洪彬; 关键词：T7 真核表达

Mx基因的抗病毒研究进展被引量：4: 2012年; Mx(myxovirus resistance)蛋白是由干扰素诱导产生的具有GTP酶活性的肌动蛋白,具有广谱的抗病毒功能,可抑制RNA病毒及DNA病毒的复制。作者综述了Mx基因及其编码蛋白的结构和功能,阐述了其抗病毒的作用机制,并展望了Mx基因在抗病毒转基因育种领域的应用前景。; 辛婷婷王洪梅何洪彬; 关键词：MX基因抗病毒

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

山东省科技攻关计划(2009GG20002032)