国家自然科学基金(81272349)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
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- LncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨lncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:SGC7901、MKN45、MKN28三个胃癌细胞系,分别经常氧/缺氧孵育24h后,Trizol法提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异。通过差异倍数、邻近编码基因信息分析、长度特征分析等策略初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测lncRNA-AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中相对于常氧条件下的表达水平,进一步检测其在20例胃癌临床标本中相对于癌旁组织的表达水平。构建小干扰RNA慢病毒,稳定下调AK058003在SGC7901及MKN45中的表达。Transwell、划痕实验、裸鼠尾静脉注入不同胃癌细胞等体外和体内实验检测抑制AK058003后对常氧和缺氧条件下胃癌侵袭转移的影响。结果:高通量lncRNA芯片比较发现:缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28与常氧条件下的细胞相比,有84个分子的表达在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调(P<0.05),其中差异倍数在3倍以上的共有5个。多重筛选策略提示AK058003可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果显示:AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调,其分别在SGC7901缺氧16h,MKN45缺氧24h,MKN28缺氧48h时达到峰值。进一步RT-PCR结果发现,AK058003在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。缺氧条件下的Transwell实验结果显示缺氧能够显著增加SGC7901和MKN45的侵袭转移力,而抑制AK058003的表达后,胃癌细胞侵袭转移力明显下降。结论:通过高通量lncRNA芯片比较,首次发现了一系列胃癌细胞中缺氧相关的lncRNAs分子。通过临床标本验证以及功能缺失试验证实lnc-AK058003是系列分子中影响缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNAs分子之一。
- 黄晓峰王亚芳刘理礼
- 关键词：胃癌缺氧
- KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药中的作用被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨KLF8(Kruppel-like factor 8)在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。方法:利用Western blot和实时定量PCR的方法检测三株胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901在常氧及缺氧条件下KLF8的表达水平。Western blot和实时定量PCR检测胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR、SGC7901/ADR和亲本细胞系SGC7901中KLF8的表达水平。构建KLF8正义表达载体及KLF8小干扰RNA的慢病毒载体,将其转染入实验细胞中,用Western blot和实时定量PCR的方法检测KLF8表达量的变化。MTT、Annexin V/PI染色法及阿霉素蓄积量与潴留实验检测KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。结果:缺氧可诱导胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901中KLF8的表达升高。与胃癌亲本细胞系相比,KLF8在胃癌耐药细胞系中的表达升高,并且在SGC7901/VCR细胞中表达升高的更为明显。外源性转染KLF8后可显著增加胃癌细胞中KLF8的表达量,KLF8小干扰RNA可有效降低常氧及缺氧条件下胃癌细胞中KLF8的表达。常氧条件下,外源性转染KLF8的正义表达载体可增加胃癌细胞对不同化疗药物的耐受性,降低化疗药物诱导的胃癌细胞凋亡指数,同时可增加细胞内阿霉素的泵出率。缺氧条件下,KLF8小干扰RNA能够逆转胃癌细胞中上述现象的发生。结论:初步实验结果发现了一个新的缺氧反应分子-KLF8。表型试验证实该分子在缺氧诱导胃癌多药耐药中发挥作用。
- 杨雪王亚芳张慧刘理礼
- 关键词：FACTOR多药耐药胃癌缺氧
- 胃癌转移相关长链非编码RNA差异表达谱的研究
- 2022年
- 目的筛选与胃癌转移相关的长链非编码RNA(lncRNA),寻找可预测及逆转胃癌转移相关的候选基因。方法利用高通量lnc RNA芯片技术分别检测3例未发生远处转移胃癌组织和3例发生远处转移胃癌组织中lncRNA及mRNA表达谱的差异,并对差异表达基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果远处转移胃癌组与无远处转移组相比,有549个lncRNAs及386个mRNAs差异性表达具有统计学意义,其中远处转移胃癌组织中表达升高的lncRNAs共230个,表达升高的mRNAs共208个,表达下降的lncRNAs共319个,表达下降的mRNAs共178个。GO分析显示差异性表达基因的功能主要涉及到肿瘤细胞的生长、代谢、浸润、免疫调节等多种生物过程。KEGG分析显示差异性表达基因的通路主要涉及到细胞因子及其受体相互作用、趋化因子、细胞代谢等信号通路。结论筛选出了胃癌侵袭转移相关的lncRNAs,深入分析这些差异表达lncRNAs的功能及机制可为胃癌侵袭转移寻找出特异性肿瘤标志物及有效治疗靶点。
- 王亚芳刘向强章思偲刘理礼
- 关键词：胃癌长链非编码RNA芯片
- MALAT-1对胃癌细胞系SGC7901侵袭和迁移能力的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨MALAT-1对胃癌细胞系SGC7901侵袭和迁移能力的影响。方法:用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法在mRNA水平测定MALAT-1在20对胃癌组织及癌旁正常组织的表达,以及在GES和SGC7901细胞中的表达。RNA干扰(RNAi)技术下调胃癌细胞系SGC7901中MALAT-1的表达后,以高内涵细胞运动试验检测其运动能力,Transwell实验检测其侵袭和迁移能力。结果:RT-PCR结果显示MALAT-1在胃癌组织中的表达高于癌旁正常组织;相比GES,MALAT-1在SGC7901中的表达升高。下调MALAT-1在SGC7901中的表达后,高内涵细胞运动试验和Transwell实验结果显示SGC7901的运动、侵袭和迁移能力均明显减弱。结论:MALAT-1能够促进胃癌细胞SGC7901的侵袭和迁移能力。
- 陈迪刘佳铭王凯王亚芳张宏博
- 关键词：胃癌迁移
- LncRNA在缺氧诱导的胃癌细胞中表达谱的变化被引量：8
- 2013年
- 目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)在常氧条件下的胃癌细胞及缺氧诱导的胃癌细胞中表达谱的变化。方法:利用lncRNA芯片技术检测常氧条件下的胃癌细胞,缺氧诱导的胃癌细胞中lncRNA表达谱的变异,经对原始数据进行预处理达到均一化后,筛选出差异表达lncRNA,进行分析。结果:与常氧条件下的胃癌细胞相比较,缺氧诱导胃癌细胞中1.5倍以上变化并有显著差异(P<0.05)的lncRNA,确定为差异表达lncRNA。其中在三种胃癌细胞中的变化均在1.5倍以上的共254条,占所有lncRNA的3.6%;大于1.5倍上调的共136条,1.5倍以上降低的共118条;2倍以上上调的共30条;2倍以上降低的共25条;3倍以上升高的共5条;3倍以上降低的共5条。结论:缺氧诱导的胃癌细胞与常氧的胃癌细胞比较,lncRNA表达谱发生显著变化。提示差异性表达的lncRNAs可能参与了缺氧环境下胃癌细胞多种恶性表型的变化。
- 王亚芳刘理礼靳海峰张慧张宏博聂勇战吴开春樊代明
- 关键词：长链非编码RNA胃癌缺氧
- 缺氧对胃癌细胞BMPR-1A表达及其侵袭和迁移能力的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:检测胃癌细胞中BMPR-1A在常氧和缺氧条件下的表达;探讨两种不同条件下BMPR-1A的不同表达对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。方法:常氧条件下(氧气浓度20%)常规培养胃癌细胞SGC7901和MKN28;缺氧条件下(氧气浓度1%)用二氧化碳/氧气/氮气三气培养箱培养胃癌细胞SGC7901和MKN2824小时。分别用蛋白质免疫印迹(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法在蛋白水平和mRNA水平测定BMPR-1A的表达,以明确BMPR-1A在常氧与缺氧两种不同条件下的差异性表达;同时以Transwell实验检测在常氧和缺氧条件下由于BMPR-1A的差异性表达对胃癌细胞SGC7901和MKN28侵袭和迁移的影响。结果:缺氧条件下刺激胃癌细胞24h后,无论是在蛋白水平还是mRNA水平,BMPR-1A表达明显下降;Transwell实验结果也显示胃癌细胞接受缺氧刺激后其侵袭和迁移能力显著增强。结论:缺氧有增加胃癌细胞侵袭和迁移的能力,该作用机制可能与缺氧导致BMPR-1A的表达下降有关。
- 刘家铭王亚芳魏彦玲张宏博
- 关键词：胃癌缺氧迁移
- lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用被引量：1
- 2019年
- 目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:三个胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28分别经常氧和缺氧孵育24 h,提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异,初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞(相对于常氧诱导的胃癌细胞)以及20对胃癌组织(相对于癌旁组织)中的表达水平。通过慢病毒转染,稳定下调SGC7901和MKN28细胞中lncRNA-uc003uxs的表达。通过Transwell迁移和侵袭实验以及裸鼠尾静脉注射内脏转移实验检测lncRNA-uc003uxs下调后对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果:高通量芯片分析结果显示:与常氧诱导的胃癌细胞相比,缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28中有84个共同上调的lncRNA分子以及70个共同下调的lncRNA分子,而多重筛选策略则提示:lncRNA-uc003uxs可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果表明:lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28中显著上调,其在胃癌组织中的表达水平也显著高于癌旁组织。Transwell实验结果显示:缺氧能够显著增加SGC7901和MKN28细胞的迁移和侵袭能力,而下调lncRNA-uc003uxs的表达后,两种细胞的迁移和侵袭能力明显下降。此外,裸鼠尾静脉内脏转移实验也证实lncRNA-uc003uxs的下调抑制了胃癌细胞SGC7901的体内肝肺转移能力。结论:利用高通量芯片筛选,在胃癌细胞中发现了一系列缺氧相关的lncRNA分子。临床标本分析及功能缺失试验证实:lncRNA-uc003uxs是一个缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子。
- 刘家铭王亚芳刘理礼
- 关键词：胃癌缺氧
