博士科研启动基金(2011C38)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- TP47蛋白在梅毒血清学诊断中的应用被引量：4
- 2012年
- 目的采用原核基因工程技术重组表达梅毒螺旋体TP47蛋白,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法 PCR扩增获得TP47基因片段并构建pET28b-TP47原核表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导蛋白质表达,经镍柱纯化后通过质谱技术进行鉴定。采用免疫印迹法测定其与梅毒患者血清的免疫反应性。建立基于重组TP47抗原的ELISA间接法并对30份TPPA阳性血清和75份TPPA阴性血清进行方法学验证。结果 PCR扩增获得约1.1kb的基因片段,成功构建原核表达载体pET28b-TP47。重组蛋白在细菌中以包涵体形式表达,约占菌体蛋白含量的70%,分子量约39000Mr,经纯化后其纯度约95%。经质谱分析表明重组蛋白为TP47蛋白。免疫印迹法证实TP47蛋白能够与梅毒患者血清发生特异性反应,ELISA测定TPPA阳性血清和阴性血清的符合率分别为97%(29/30)和97%(73/75)。结论通过DNA重组技术成功获得了梅毒螺旋体TP47蛋白,证实其与梅毒阳性血清具有良好的反应性,为研发新一代梅毒感染诊断试剂盒奠定了基础。
- 林勇平俞辉张婷林毅妍宋金龙刘忠民
- 关键词：梅毒基因工程血清学诊断
- 梅毒螺旋体TP0772蛋白的原核表达和免疫反应性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:利用原核基因工程技术克隆表达梅毒螺旋体TP0772基因,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法:PCR扩增获得TP0772基因,构建pET-28b-TP0772重组质粒,转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导蛋白质表达,经镍柱纯化后通过质谱技术鉴定。采用免疫印迹法测定其与梅毒患者血清的免疫反应性。建立基于重组TP0772抗原的ELISA间接法并对30份TPPA阳性血清和25份TPP阴性血清进行方法学评价。结果:PCR扩增获得约850 bp的基因片段,成功构建原核表达载体pET-28b-TP0772。目的蛋白分子量约为32kDa,以包涵体的表达形式存在,约占菌体总蛋白的30%。经质谱技术和免疫印迹分析证实重组蛋白为TP0772蛋白,并能够与梅毒患者血清发生特异性结合反应。ELISA测定TPPA阳性血清和阴性血清的符合率分别为93%(28/30)和96%(24/25)。结论:通过DNA重组技术成功获得了重组TP0772蛋白,其与梅毒阳性血清具有良好的免疫反应性,为优化梅毒的血清学诊断方法奠定基础。
- 林勇平俞辉张婷刘忠民
- 关键词：梅毒原核表达免疫反应性
