四川省青年科技基金(2012JQ0018)
- 作品数：8 被引量：17H指数：2
- 相关作者：袁青年四季叶迎春高燕王栩更多>>
- 相关机构：泸州医学院四川医科大学泸州医学院附属口腔医院更多>>
- 发文基金：四川省青年科技基金泸州市科技局基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IL-4、IL-13蛋白表达及抗IL-4、IL-13人源单链抗体的筛选被引量：3
- 2013年
- 目的:表达IL-4和IL-13蛋白,从人源单链抗体文库中分别筛选抗IL-4和抗IL-13单链抗体。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-4和IL-13 cDNA;构建硫氧还蛋白融合表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的IL-4和IL-13为抗原从前期构建的人源抗体文库中采用噬菌体展示技术分别筛选抗IL-4和抗IL-13人源单链抗体(scFv)。结果:扩增的IL-4 cDNA大小为280 bp,表达的融合蛋白大小为27 kD左右。扩增的IL-13 cDNA大小为252 bp,表达的融合蛋白大小为25 kD左右。分别以生物素化的IL-4和IL-13蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对人源抗体文库进行3轮富集后,分别有大约37%的scFvs与IL-4有结合特性,有约27%的scFvs与IL-13有结合特性。筛选了4株分别与IL-4和IL-13结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论:成功筛选到抗IL-4和抗IL-13人源性单链抗体。
- 袁青黄黎郭夕源叶迎春年四季
- 关键词：IL-4IL-13人源单链抗体
- 重组人IL-4的克隆、表达和鉴定
- 2014年
- 目的构建人IL-4重组表达载体,表达纯化并鉴定人IL-4重组蛋白。方法采用巢式PCR技术从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)总RNA中扩增人IL-4开放阅读框基因,将扩增的IL-4目的基因与表达质粒pET101/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,进行表达纯化和鉴定。结果采用巢式PCR扩增得到IL-4开放阅读框大小为460bp,测序比对显示序列正确。转化BL21后,通过对不同克隆子表达水平的筛选,筛选到高表达IL-4的克隆子,表达和纯化后聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)显示,其融合蛋白大小约为28×103,与目的蛋白大小一致。Western blot鉴定结果显示表达的蛋白正确,为人IL-4目的蛋白。结论成功表达纯化到人IL-4重组蛋白。
- 王栩年四季邬于川高燕叶迎春袁青
- 关键词：纯化
- IL-33与自身免疫疾病被引量：8
- 2015年
- 2003年Baekkevold发现一种高内皮小静脉核因子（Nuclear factor of high endothelial venules,NFHEV）,2005年Schmitz搜寻序列资料库发现该基因序列与IL-1家族同源,命名为IL-33,在人体定位于染色体9p24.1,编码270个氨基酸。
- 叶迎春年四季刘佳佳高燕袁青
- 关键词：自身免疫疾病免疫反应NUCLEAR病人血清结肠炎模型
- 抗TSLP全人源单链抗体筛选与初步鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的:表达TSLP蛋白,从全人源单链抗体文库中筛选得到抗TSLP单链抗体。方法:扩增TSLP cDNA,将目的基因与表达载体pET101/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的TSLP蛋白为抗原从前期构建的全人源抗体文库中采用噬菌体展示技术筛选抗TSLP全人源单链抗体(scFv)。结果:扩增的TSLP cDNA片段大小为423 bp左右。表达的TSLP蛋白大小为26 kD左右,Dot blot及Western blot鉴定显示表达的蛋白正确,为TSLP目的蛋白。以生物素化的TSLP蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对全人源抗体文库进行3轮富集,通过ELISA检测有35%的scFv与TSLP有结合特性。将筛选的与TSLP结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论:成功筛选到抗TSLP全人源单链抗体。
- 朱建光袁青黄黎徐文峰年四季
- 关键词：TSLP人源单链抗体
- 全人源scFv-Fc真核表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的:构建全人源抗IL-33 scFv-Fc重组载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表达并鉴定融合抗体蛋白。方法:RT-PCR扩增人IgG1 Fc段并插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1/Fc重组载体;将合成的信号肽(SP)序列插入重组质粒pcDNA3.1/Fc,构建重组pcDNA3.1/SP-Fc通用载体;最后将本实验室前期筛选的抗IL-33 scFv插入重组质粒pcDNA3.1/SP-Fc中,构建重组pcDNA3.1/SP-scFv-Fc载体,测序正确后转染CHO细胞。RT-PCR、Western blot检测目的基因的转录及表达。结果:重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小为1 560 bp左右。转染CHO细胞后,RT-PCR结果显示目的基因在CHO细胞中成功转录,Western blot显示表达的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清发生特异性免疫反应。结论:成功构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,以便于后续在CHO细胞中表达。
- 叶迎春年四季刘佳佳王栩高燕袁青
- 关键词：CHO细胞真核表达
- 抗IL-4全人源单链抗体的筛选和鉴定
- 2015年
- 目的表达人白细胞介素4(IL-4),从全人源单链抗体(sc Fv)文库中筛选抗IL-4全人源sc Fv并鉴定其特异性。方法采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导p ET102/IL-4/BL21表达IL-4,进行纯化鉴定。利用全人源噬菌体抗体文库表达抗IL-4全人源sc Fv,用表达的IL-4作为抗原,筛选阳性克隆菌株经PCR、酶切及测序鉴定。采用斑点杂交检测抗IL-4sc Fv的特异性。结果表达的IL-4融合蛋白相对分子质量(Mr)为27 000。采用该抗原筛选出了表达抗IL-4的阳性克隆,PCR结果显示,在约1000 bp处有扩增的目的条带。酶切结果显示,有2株克隆的指纹图谱相同,其余均不同。选取指纹图谱不同的且与IL-4结合能力强的4个sc Fv的克隆进行测序,显示有3个的序列正确。斑点杂交显示,这3株克隆表达的sc Fv均具有特异性。结论成功筛选到抗IL-4全人源sc Fv。
- 曹新梅年四季叶迎春王栩袁青
- IL-13和IL-33重组蛋白的原核表达和纯化被引量：1
- 2015年
- 目的:利用PET101/D-TOPO蛋白表达系统,表达人IL-13和IL-33重组蛋白。方法:以健康人外周血单个核细胞(PBMC)的mRNA为模板,采用RT-PCR扩增IL-13和IL-33开放阅读框,将扩增所得目的基因连接到质粒p ET101/DTOPO,构建出重组质粒并转化大肠杆菌BL21,诱导其表达IL-13和IL-33重组蛋白,纯化后进行鉴定。结果:RT-PCR扩增所得IL-13 c DNA为490 bp,IL-33 cDNA大小为800 bp,将其分别连接到质粒PET101/D-TOPO,构建出IL-13和IL-33重组质粒,分别转化大肠杆菌BL21,诱导其表达。SDS-PAGE电泳分析,发现目的条带大小分别为29 kDa和35 kDa左右,Western blotting结果证实重组表达正确。结论:成功构建出IL-13和IL-33重组质粒,成功表达并纯化出IL-13和IL-33重组蛋白。
- 高燕年四季徐文峰叶迎春袁青
- 关键词：IL-13
- 人源性治疗性抗体的应用与制备进展被引量：1
- 2013年
- 治疗性抗体在疾病的诊断和治疗方面具有重要意义。鼠源性单克隆抗体的临床应用受限于诱导产生人抗鼠抗体、亲和力低和半衰期短等,随着转基因小鼠和噬菌体展示技术的成熟,人源性治疗性抗体飞速发展,在肿瘤治疗、自身免疫性疾病的治疗、感染性疾病的治疗及减轻移植排斥反应、体内定位诊断、免疫调节等方面发挥重要作用。本文综述了治疗性抗体在肿瘤及免疫、移植等疾病中的治疗应用及人源性治疗性抗体的制备。
- 郭夕源杨江华邬于川袁青
- 关键词：单克隆抗体治疗性抗体人源性
