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海洋枯草芽孢杆菌HS-A38产直链脂肽活性物质的初步检测被引量：6: 2011年; 从海参肠道中分离得到了一株海洋枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HS-A38,将其发酵上清液经盐酸沉淀、有机溶剂萃取得到具有广谱抗菌活性的代谢物质。采用薄层层析和茚三酮显色检测到4种物质,分别命名为化合物1、2、3和4;应用层析板覆盖指示菌的生物自显影技术对其抗菌活性成分进行追踪、检测,结果发现化合物1和2具有显著抑制弧菌的作用。进一步检测分析表明,化合物1、2和4具有很强的热稳定性,初步推断它们属于直链的脂肽类化合物,并且这4种物质出现在不同的发酵代谢时期,这将为研究群体效应提供基础检测依据。; 张欢丛丽娜侯英敏李爱民谢三群王丹; 关键词：抗菌活性

重组海参溶菌酶的表达及其性质: 2014年; 研究了重组海参（Stichopusjaponicus）溶菌酶（SjLys）可溶性表达的发酵条件。采用多因素正交优选法，以摇瓶培养方式从培养基组分、发酵条件两个方面对重组海参溶菌酶进行研究，构建了高效分泌型表达重组海参溶菌酶工程菌。研究结果发现，30℃、140r／min、IPTG浓度0．3mmol／L、诱导后继续培养14h，目的蛋白分泌表达量可达到30-40mg／L，且产物以大量可溶性蛋白存在。; 卢冬丛丽娜姜启晨谭广毅; 关键词：可溶性

海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：5: 2010年; 研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No.EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。; 谷跃峰丛丽娜骆宁; 关键词：毕赤酵母纯化

重组海参溶菌酶N端可溶性表达与抑菌分析: 2013年; 通过对海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)cDNA(Genbank accession no:EF036468)片段的分析,结果发现N端基因区域所对应的蛋白质序列中含有糖苷酶活性。因此利用RT-PCR技术以其为模板,扩增出长度为174 bp的溶菌酶N端(SjLys-N)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-N,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组SjLys-N的基因工程菌。该工程菌在改造的LB培养基和最适的发酵条件下经IPTG诱导后,表达约23 kD的重组SjLys-N蛋白。此外,它还能以可溶性的形式表达,占总菌体蛋白约46%。经过Western blotting分析,重组SjLys-N在23 kD左右能够与penta-his抗体发生特异性免疫反应,结果表明重组SjLys-N得到正确的表达。最后对纯化后的重组SjLys-N进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌和副溶血弧菌有较高的抑菌活性。上述结果将为进一步研究海参溶菌酶的基因结构与功能之间的关系提高参考。; 常艺海丛丽娜栾桂花刘志文杨杰钱斯日古楞; 关键词：可溶性表达抑菌活性

重组海参溶菌酶基因工程菌的构建及原核表达被引量：5: 2012年; 根据GenBank中海刺参溶菌酶的cDNA序列(Accession no.EF036468),利用RT-PCR技术扩增出海刺参溶菌酶的基因片段(SL),将其克隆到原核表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pET-32a(+)-SL,再转化至E.coil Rosetta(DE3)pLysS。利用IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子质量约为31ku的特异条带。经过Western blotting分析鉴定,结果显示重组海参溶菌酶成功在大肠杆菌中表达,并且有部分可溶性蛋白,占总菌体蛋白约10%。这些结果为进一步研究海参溶菌酶的作用机理奠定基础。; 常艺海丛丽娜卢冬; 关键词：溶菌酶原核表达克隆海参

太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达被引量：1: 2011年; 在双壳类软体动物牡蛎体内,溶菌酶(Lysozyme)在实现宿主免疫防御,破坏和消除侵入体内的病原中发挥着重要的作用。根据GenBank已有的太平洋牡蛎溶菌酶的全长cDNA序列(GenBank:AB179775),通过RT-PCR技术,从太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)中克隆得到溶菌酶(简称为CgLys)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列。生物信息软件分析表明,其ORF为414 bp,编码137个氨基酸(aa),前20个aa为信号肽,成熟肽由117个aa组成,其分子量为13.2 kD。通过构建分子系统发育树对其同源性进行分析比较,初步推断该CgLys属于i型溶菌酶。将该CgLys基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CgLys,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS。该基因工程菌经IPTG诱导发酵后,成功高效地表达了重组CgLys蛋白,其分子质量约为18 kD。该重组CgLys蛋白主要存在于细菌裂解液的上清液中,即以可溶性蛋白形式存在。上述结果将显著简化后续的蛋白纯化过程,为今后扩大规模生产牡蛎溶菌酶提供参考。; 谢三群丛丽娜张欢王丹; 关键词：无脊椎动物太平洋牡蛎纯化

重组海参溶菌酶工程菌发酵及表达产物纯化和性质的研究被引量：4: 2011年; 旨在研究重组海参i型溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SjLys)可溶性表达的发酵条件、纯化及生物学性质。采用摇瓶发酵的培养方式,分别从培养基组分和发酵条件两个方面对获得可溶性重组SjLys进行研究。表达产物通过亲和层析纯化以及凝胶过滤层析脱盐,获得了电泳纯为95%的重组SjLys蛋白。进一步对其生物学活性分析,结果表明该酶最适温度为45℃,最适pH值为6.8,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有广谱抑菌作用。上述结果将为海参溶菌酶进行产业化奠定应用基础。; 王丹丛丽娜谢三群张欢; 关键词：可溶性蛋白纯化酶活性溶菌酶

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