天津市科技支撑计划(11ZCKFSY00900)
- 作品数：6 被引量：37H指数：3
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- 发文基金：天津市科技支撑计划国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 谷氨酸棒杆菌发酵生产1,5–戊二胺的代谢流分析被引量：2
- 2015年
- 为了提高糖类的利用效率,加强糖类代谢向生成尸胺的方向流动,提高尸胺产量,对谷氨酸棒杆菌合成尸胺的代谢网络进行分析,找出影响尸胺合成的代谢流量分配规律和关键节点,并通过改变溶氧及添加辅酶NADPH对关键节点进行验证.结果表明:6–磷酸葡萄糖和丙酮酸是影响碳源流向尸胺合成的关键节点,增强磷酸戊糖途径(HMP)和三羧酸循环(TCA)可以弱化由6–磷酸葡萄糖生成6–磷酸果糖和由丙酮酸生成乳酸,促进碳源向合成尸胺的方向流动,从而有效地提高尸胺产量(产量增幅为77.8%).该研究为高产尸胺的谷氨酸棒杆菌工程菌种改造以及发酵控制提供了理论基础.
- 黎明唐奇李东霞随树珍路福平
- 关键词：代谢途径谷氨酸棒杆菌NADPH
- 根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系的建立及优化被引量：13
- 2012年
- 基于根癌农杆菌介导的遗传转化方法的独特优点,研究黑曲霉转化过程中各主要影响因素,建立高效的黑曲霉遗传转化方法。构建双元载体pBI-hph,通过电转导入农杆菌LBA4404中,以黑曲霉TCCC41056为受体菌株,利用潮霉素B基因作为筛选标记,对影响转化效率的孢子悬液的新鲜程度及浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间、共培养温度这五个条件进行分析,建立根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系。实验结果表明,上述条件对黑曲霉的转化效率有较大的影响,通过优化,黑曲霉转化效率可达83个转化子/107分生孢子;整合到黑曲霉基因组的外源基因可以稳定遗传,在转接10代后遗传性能仍保持稳定,并在众多转化子中筛选得到了糖化酶活力提高18%的黑曲霉突变株。根癌农杆菌介导的黑曲霉转化体系的建立,为进一步研究黑曲霉的功能基因以及开发黑曲霉表达系统提供了有力的手段。
- 黎明刘萌黄云雁周丽颖孙昕路福平
- 关键词：根癌农杆菌黑曲霉糖化酶
- 赖氨酸-尸胺反向转运蛋白cadB基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化被引量：1
- 2012年
- 旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,因而不能够直接合成尸胺。从E.coliK12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因,与绿色荧光蛋白基因gfp融合构建成融合表达载体pXBG,并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达,结果表明表达的CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。将基因cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的pXMJ19-ldc上,构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白的重组质粒pXLB,并转化到谷氨酸棒杆菌中。
- 黄云雁黎明刘萌孙昕周丽颖路福平
- 关键词：谷氨酸棒杆菌共表达
- 大麻纤维微生物脱胶菌株的筛选、鉴定及其应用被引量：5
- 2017年
- 为了筛选并获得高效的大麻纤维脱胶菌株,以沤麻液为筛选来源,采用选择平板进行初筛,再以摇瓶脱胶实验进行复筛,以脱胶麻的残胶率为指标,筛选大麻脱胶微生物.最终获得两株高效的脱胶菌株,经形态学和16S,rRNA鉴定均属于枯草芽胞杆菌.大麻分别经两株菌和两株菌混合脱胶4,d后,残胶率由原麻的50%,左右都降低到了13%,左右,纤维素含量由原麻的50%,都增长到82%,,肉眼观察纤维完全发散,色泽光亮洁白,在电镜下扫描观察没有明显的纤维损伤.这说明筛选到的两株枯草芽胞杆菌都具有应用到大麻脱胶工业的潜力,也为大麻的生物法脱胶提供了一定的依据.
- 杨田随树珍刘逸寒黎明
- 关键词：大麻微生物脱胶枯草芽胞杆菌残胶率
- 吸附-交联法固定D-泛解酸内酯水解酶的研究被引量：1
- 2012年
- 选择6种吸附树脂和离子交换树脂对D-泛解酸内酯水解酶进行固定化,筛选出了固定化效果较好的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D-380为载体,用先吸附后交联的方法固定化。通过实验对固定化条件进行了优化,得出最佳的固定化条件为:加酶量6 U/g树脂、吸附pH 7.5、吸附时间4 h、吸附温度30℃、交联剂戊二醛终浓度0.1%、交联时间2 h。实验表明在此条件下制得的固定化酶有很好的稳定性:固定化酶在连续20次的底物水解反应后,剩余酶活达到71%。当温度达到80℃时游离酶几乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活为60%以上。游离酶的pH稳定性范围为pH 7～8,而固定化酶为pH 6.5～8.5。
- 黎明张建中别松涛宋馨宇刘萌黄云雁杜连祥
- 关键词：固定化交联稳定性
- 生物法合成戊二胺研究进展被引量：15
- 2014年
- 随着经济快速发展,大气污染和全球变暖的趋势日益恶化。世界上每年消耗大量石化资源来源的聚酰胺,戊二胺作为聚酰胺的重要组成单体,生物法合成戊二胺具有经济学和生态学双重意义。目前,生物法合成戊二胺的工程菌主要有谷氨酸棒状杆菌和大肠杆菌,文中从微生物中戊二胺的代谢、戊二胺合成途径的关键酶和转运蛋白、戊二胺生产最佳代谢途径和戊二胺产量的预测、代谢工程研究进展等方面综述了生物法合成戊二胺的最新研究现状和进展,并对其前景进行了展望。
- 李东霞黎明王洪鑫王舒雅路福平
- 关键词：谷氨酸棒状杆菌大肠杆菌
