国家自然科学基金(30571667)
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 相关作者：孙殿兴刘金霞曹治宸孙殿兴张超群更多>>
- 相关机构：河北医科大学承德医学院中国人民解放军更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胶原三股螺旋重复蛋白1基因真核表达载体的构建及其与microRNA-30b关系初探被引量：1
- 2020年
- 目的 构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因(CTHRC1)与microRNA(简写为miR)-30b的关系。方法 设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3′UTR区的序列,并克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体。采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果 采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100 bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体构建成功。2 μg和4 μg的pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒转染Huh7及HepG2细胞,转染效率分别可达90%、89%和85%、83%。在293T细胞中,miR-30b组CTHRC1表达下降(P<0.05)。而过表达CTHRC1组中miR-30b的表达下降(P<0.05)。结论 成功构建了pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体;在293T细胞中,CTHRC1基因表达与miR-30b的表达水平相反。
- 周辉芳隗和儒马士朝张超群王君平杨新英谢英孙殿兴
- 关键词：质粒微RNAS
- 局部应用CpG寡聚核苷酸联合4-1BB单克隆抗体治疗小鼠肝癌荷瘤的研究
- 2019年
- 目的探讨局部应用CpG寡聚核苷酸(CpG-ODN)联合4-1BB单克隆抗体对小鼠肝癌的疗效,并评价4-1BB单克隆抗体对CpG-ODN免疫治疗效果的影响。方法在BALB/c雄鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤小鼠模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对照组、CpG组和CpG+4-1BB组,并在左下肢瘤内注射药物。选取同批正常小鼠作为正常对照组。记录小鼠生存情况,计算荷瘤体积、脏器指数,检测血清白细胞介素(IL)-12和干扰素(IFN)γ浓度以及脾脏CD8+T淋巴细胞比例。计量数据用方差分析,各组小鼠存活率采用Log-Rank检验分析。结果处死前模型对照组小鼠荷瘤持续增长,CpG组和CpG+4-1BB组荷瘤体积[(976.08±29.55)mm3、(47.25±0.93)mm3)]与模型组[(1 336.52±39.40)mm3]相比均减小(F = 5 329.273,P < 0.05);CpG+4-1BB组远处荷瘤体积[(611.83±113.02)mm3]与模型组和CpG组[(1 406.62±51.09)mm3、(1 380.01±51.44)mm3]相比减小(F = 247.160,P < 0.05),但CpG组与模型组无明显差异(P > 0.05)。模型组血清IL-12浓度[(23.90±2.33)pg/ml]、IFNγ浓度[(103.02±6.10)pg/ml]和脾脏CD8+T淋巴细胞比例(4.54%±0.62%)较正常组均减低(P值均< 0.05);CpG组和CpG+4-1BB组血清中IL-12浓度[(29.21±2.23)pg/ml、(37.04±1.49)pg/ml]、IFNγ浓度[(116.12±4.08)pg/ml、(138.65±1.72)pg/ml)、CD8+T淋巴细胞比例(6.65%±0.64%、12.73%±0.88%)均高于模型组(P值均< 0.05);CpG+4-1BB组高于CpG组(P < 0.05)。CpG+4-1BB组小鼠存活率均高于模型组和CpG组(χ2 = 25.544,P < 0.05),CpG组与模型组之间无明显差异(P > 0.05)。四组脏器指数无明显差异(P > 0.05)。结论4-1BB单克隆抗体联合CpG-ODN治疗可使肝癌荷瘤体积缩小,并可抑制远处荷瘤增长,明显延长小鼠存活时间。
- 马士朝张超群张超群孙殿兴
- 关键词：免疫疗法4-1BB
- 局部应用Cp G寡聚脱氧核苷酸联合OX40单抗治疗肝细胞癌小鼠模型的效果分析
- 2019年
- 目的探讨局部应用CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合OX40单抗方案对肝细胞癌的疗效,以及对远处同源肿瘤的治疗效果。方法在BALB/c雄性小鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对照组、CpG组、CpG+OX40组,每组10只,并在左下肢瘤内注射药物。选取10只同批正常小鼠作为正常对照组。计算荷瘤体积,ELISA法检测血清IL-12和IFNγ浓度,流式细胞术检测脾脏CD8^+T淋巴细胞比例,比较3组小鼠治疗后的生存情况。计量资料多组间比较采用重复测量设计资料的方差分析和单因素方差分析,进一步两两组间比较采用LSD-t检验;采用log-rank检验分析3组小鼠(不包含正常组)生存率,并绘制生存曲线。结果给予治疗后,模型对照组荷瘤呈进行性增长,血清IL-12和IFNγ水平、脾脏CD8^+T淋巴细胞比例较正常对照组均减低(P值均<0.05)。与模型对照组相比,CpG组和CpG+OX40组干预荷瘤体积均缩小(P值均<0.05);CpG+OX40组远处荷瘤体积比CpG组和模型对照组增长减慢(P值均<0.05),但CpG组远处荷瘤体积与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组相比,两实验组血清中IL-12和IFNγ水平及脾脏CD8^+T淋巴细胞比例均升高(P值均<0.05),且CpG+OX40组高于CpG组(P值均<0.05)。CpG+OX40组小鼠生存率均高于模型对照组和CpG组(P值均<0.05),CpG组与模型对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OX40单抗联合CpG-ODN可使治疗处肝脏肿瘤缩小,并有效减缓远处肿瘤增长,延长小鼠生存时间。
- 马士朝张超群孙殿兴
- 关键词：OX40CPG寡聚脱氧核苷酸
- miR-30b的生物学功能研究进展被引量：4
- 2019年
- miRNAs是一类由18~25个核苷酸组成的非编码RNA。这些核苷酸通过与目标信使RNA(mRNA)的3'或5'端非编码区域结合来实现对目标基因的调节。miRNAs可与目标mRNA结合促进其降解,进而抑制目标mRNA的翻译,是一种快速、灵敏的调节基因的机制[1]。miR-30家族是miRNAs重要成员之一,在实体肿瘤发生信号网络中发挥“中枢”作用,它的表达水平对肿瘤发生有着深远的影响[2]。miR-30家族成员包括miR-30a、-30b、-30c、-30d、-30e和-384-5p。在人类肿瘤中,miR-30b已被证实是一种在癌症发病机制中起着重要作用的肿瘤抑制基因,但在少数情况下发挥类似致癌基因的作用[3-4]。本文拟对miR-30b在肿瘤发生发展过程中的作用机制进行综述。
- 周辉芳谢英孙殿兴
- 关键词：MIRNAS肿瘤靶基因
- 稳定分泌重组HBV载体颗粒细胞系的构建被引量：1
- 2009年
- 目的制备一个持续分泌表达杀稻瘟菌素抗性基因（BsdR）的重组乙型肝炎病毒细胞系。方法删除HBV质粒中各基因的表达，在s基因区插入目的基因BsdR，以构建载体质粒pCH—BsdR；具有G418抗性的无包装信号的HBV辅助质粒pcDNA3．1-CH3142与载体质粒共转染HepG2细胞，经G418和Bsd共筛选，获得细胞克隆，进行系列检测。结果挑选36个细胞克隆，经检测，最终筛选出3个细胞株，具有形成松弛环状DNA的能力，细胞培养上清液中病毒定量分别为4．1×10^6、3．6×10^6、1．2×10^6拷贝／ml。观察到有囊膜的重组HBV颗粒的形成。未检测到野生型HBV的产生。结论该细胞系能够大量制备重组HBV载体颗粒，有助于HBV载体在基因治疗方面的应用和易感细胞系的筛选。
- 刘金霞孙殿兴曹治宸
- 关键词：细胞系
