湖南省教育厅科研基金(08C745)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 抗淋病LTB-PorB核酸疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫应答的研究被引量：2
- 2010年
- 目的:初步探讨抗淋病LTB-PorB核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应,为研制抗淋病疫苗提供实验依据。方法:大量制备核酸疫苗(pcDNA3.1(-)/ltB-porB)及重组蛋白疫苗(rLTB-PorB);通过鼻饲途径将核酸疫苗和蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加强(DNAprime-protein boost)联合免疫以及分别单独免疫雌性BALB/c小鼠,同时设PBS及空质粒(pcDNA3.1(-))对照组,检测各组体液免疫和细胞免疫应答水平。结果:免疫后第56天,联合免疫组小鼠生殖道sIgAA450(1·083±0·179)、血清IgG A450(1.023±0.116)、脾淋巴细胞诱生的IL-4[(357.58±34.44)/pg/ml]和IFN-γ[(261.85±29.92)/pg/ml]水平均明显高于各对照组(P<0.01),小鼠脾淋巴细胞增殖率(SI:2.12±0.29)较对照组显著增高(P<0.05);核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫组血清IgG亚类IgG2a/IgG1比值分别为1.678、0.455和0.693。结论:LTB-PorB核酸疫苗和蛋白疫苗联合免疫组诱导的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平明显优于单独的核酸疫苗组和蛋白疫苗组,且以诱导Th2倾向性免疫应答为主。
- 戴志兵胡四海刘清南陈敏王玉峰张愉快余敏君朱翠明李忠玉陆春雪
- 关键词：淋病核酸疫苗蛋白疫苗联合免疫
- 淋病奈瑟菌nspA与ltB融合基因的表达及其免疫活性被引量：1
- 2010年
- 目的表达LTB-NspA重组融合蛋白,鼻饲免疫雌性Balb/c小鼠,分析重组融合蛋白的免疫活性,为研制抗淋球菌蛋白疫苗提供实验依据。方法转化并鉴定pET30a/ltB-nspA原核重组质粒后,在E.coliBL21中表达重组融合蛋白。鼻饲途径免疫雌性Balb/c小鼠,检测NspA特异性体液免疫和细胞免疫水平。结果 LTB-NspA融合蛋白组生殖道黏膜产生的NspA特异性sIgA水平和血清IgG水平随免疫时间呈上升趋势,第6周sIgAA450nm达0.689,明显高于NspA组和LTB、蛋白溶解液(solution buffer)对照组(P<0.01);第6周血清中产生的特异性IgGA450nm值达0.734,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01);LTB-NspA组脾淋巴细胞刺激指数(SI)为1.63,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01);LTB-NspA组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原NspA刺激后,培养上清中IFN-γ和IL-4含量明显升高,分别达142.23pg/ml和86.14pg/ml,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01)。但LTB-NspA与NspA两组间血清IgG水平、SI、IFN-γ和IL-4水平差异不显著(P>0.05)。结论 LTB-NspA重组蛋白诱导小鼠产生了较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫;首次证实黏膜佐剂LTB可辅佐NspA诱导小鼠产生高水平的生殖道黏膜免疫。
- 胡耀华胡四海戴志兵王健黄智勇张愉快余敏君陆春雪
- 关键词：淋病奈瑟菌重组蛋白免疫活性
- 淋球菌porB和大肠杆菌ltB融合基因的构建、表达及其免疫活性被引量：8
- 2010年
- 【目的】构建融合基因原核表达载体pET-30a/ltB-porB,并表达重组融合蛋白LTB-PorB,鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,分析重组融合蛋白的免疫活性,为研制抗淋病蛋白疫苗提供实验依据。【方法】构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与淋球菌外膜孔蛋白B(PorB)融合基因及LTB、PorB单基因pET-30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21中表达重组蛋白;鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平。【结果】在大肠杆菌BL21中获得高效表达的重组蛋白;经鼻饲免疫小鼠后,重组融合蛋白LTB-PorB组生殖道黏膜产生的PorB特异性sIgA水平随免疫时间呈上升趋势,第42天A450值达0.66,明显高于对照组(P<0.01),效价高达1∶1280;血清中产生的PorB特异性IgG第28天达最高,A450值为0.60,明显高于LTB和蛋白溶解液(Solution Buffer)对照组(P<0.01),效价高达1:2560,但与PorB对照组血清IgG水平(A450:0.57)无明显差异(P>0.05)。LTB-PorB组脾淋巴细胞刺激指数明显高于LTB和SolutionBuffer对照组(P<0.05),但脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平与对照组无明显差异(P>0.05)。【结论】重组融合蛋白LTB-PorB通过鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠后,能诱导产生高水平的体液免疫和一定水平的细胞免疫。首次证实黏膜佐剂LTB可辅佐PorB诱导小鼠产生高水平的生殖道粘膜免疫。
- 戴志兵胡四海陈敏陆春雪王玉峰刘清南张愉快余敏君朱翠明李忠玉
- 关键词：淋病奈瑟菌基因融合免疫活性
